于荣荣
- 作品数：15 被引量：24H指数：4
- 供职机构：山西大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山西省回国留学人员科研经费资助项目国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 飞蝗几丁质脱乙酰基酶的真核表达、亲和纯化及酶活性被引量：8
- 2017年
- 【目的】体外真核表达飞蝗(Locusta migratoria)几丁质脱乙酰基酶1和2(chitin deacetylase 1and 2,LmCDA1和LmCDA2)并测定其酶活性,为进一步明确飞蝗LmCDA1和LmCDA2在几丁质降解途径中的生理功能及研发新型绿色环保杀虫剂提供依据。【方法】使用BLASTP和SMART软件在线预测LmCDA1、LmCDA2a和LmCDA2b的结构域;PCR克隆获得目的基因LmCDA1、LmCDA2a和LmCDA2b的全长序列,并分别构建p Fast Bac-LmCDAs重组质粒,转化获得Bacmid重组质粒后,转染至昆虫Sf9细胞进行目的蛋白的体外表达。采用Western blot技术对目的蛋白表达情况进行检测,并通过Ni-NTA亲和层析柱和阴离子(Q-Sepharose)交换层析柱对蛋白产物进行纯化。12%SDS-PAGE检测蛋白纯度后,采用分光光度法以对硝基乙酰苯胺为底物检测目的蛋白的酶活性,T检验法对LmCDA2a和LmCDA2b酶活力进行差异显著性分析。【结果】BLASTP和SMART软件预测结果显示LmCDA1、LmCDA2a和LmCDA2b均含有4个结构域:N-端信号肽(signal peptide)、几丁质结合域(chitin binding peritrophin-A,Ch BD)、A型低密度脂蛋白受体结构域(low-density lipoprotein receptor class A,LDLa)和脱乙酰基酶催化结构域(catalytic domain,CDA)。3个基因的几丁质结合域中均包含6个保守的半胱氨酸。LmCDA2a和LmCDA2b两个剪切子除在其第3个半胱氨酸和第4个半胱氨酸之间(67—84 aa)的氨基酸数目和组成及在第4和第6个半胱氨酸(84—106 aa)之间的序列存在差异外,其余部分完全一致。Western blot结果显示LmCDA1、LmCDA2a和LmCDA2b的蛋白分子量约为61 k D左右,与预测的蛋白分子量大小一致,表明Bacmid重组质粒在昆虫Sf9细胞中成功表达。采用12%SDS-PAGE胶电泳对各蛋白纯化组分进行检测,结果显示Ni-NTA亲和层析柱可将大部分杂蛋白洗脱,而Q-Sepharose交换层析柱可对蛋白进行更彻底地纯化。酶活检测结果显示LmCDA1、LmCDA2a和LmCDA2b的酶活力分别为0.268、0.354、0.228 U·μL^(-1)
- 赵盼张学尧刘晓健赵小明于荣荣董玮马恩波张建珍张敏
- 关键词：飞蝗真核表达蛋白纯化
- Retroactive基因及其dsRNA在害虫防治中的应用
- 本发明提供一种Retroactive基因及其dsRNA在害虫防治中的应用。具体为从飞蝗转录组数据库中搜索获得Retroactive基因片段，对其进行全长克隆，测序后获得Retroactive基因全长cDNA序列，其核苷酸...
- 于荣荣张建珍张敏丁国伟马恩波
- 飞蝗表皮几丁质有序排列关键基因的功能研究
- 昆虫表皮覆盖整个虫体，对昆虫生长发育具有重要作用。几丁质是表皮的主要成分，其致密排列组装成精细的表皮结构。由于人类和高等动物体内不含几丁质，因此表皮可做为害虫防治的安全靶标。表皮几丁质的有序排列对维持表皮结构的完整性至关...
- 于荣荣
- 关键词：飞蝗基因表达生物学功能
- 注射dsRNA对飞蝗Knickkopf基因在mRNA和蛋白水平的沉默效率被引量：2
- 2016年
- 【目的】本研究旨在评估dsRNA对飞蝗Locusta migratoria Knickkopf(Knk)基因mRNA和蛋白表达的沉默效率,以期为基于RNAi技术探索飞蝗体内基因功能的研究提供基础资料。【方法】选择飞蝗2龄第1天的若虫,将体外合成的飞蝗Knk基因dsRNA注射进入飞蝗体腔内,注射后48,72和96 h分别解剖试虫的腹部表皮,一半用于RT-q PCR方法检测其mRNA表达;另一半用于Western blot法检测其蛋白的表达量。【结果】dsRNA注射进入飞蝗体腔内48,72和96 h后,与对照相比,Knk mRNA水平相对表达量分别降低78.3%,96.2%和95.1%;Knk蛋白表达量分别降低61.2%,33.3%和52.9%。【结论】注射ds Knk能显著沉默飞蝗Knk基因mRNA水平和蛋白水平的表达,但mRNA水平的沉默效率高于蛋白水平。
- 于荣荣丁国伟杨美玲马恩波张建珍
- 关键词：飞蝗DSRNAWESTERNBLOTRT-QPCR
- Retroactive基因及其dsRNA在害虫防治中的应用
- 本发明提供一种Retroactive基因及其dsRNA在害虫防治中的应用。具体为从飞蝗转录组数据库中搜索获得Retroactive基因片段，对其进行全长克隆，测序后获得Retroactive基因全长cDNA序列，其核苷酸...
- 于荣荣张建珍张敏丁国伟马恩波
- 文献传递
- 昆虫几丁质去乙酰基酶基因1及其在害虫防治中的应用
- 本发明提供一种昆虫几丁质去乙酰基酶基因1(CDA1)全长序列及其在农业害虫防治中的应用。具体为通过生物信息学方法，从飞蝗转录组中获取几丁质去乙酰基酶基因1片段，进一步调取获得序列为SEQ ID NO：1基因全长。依据SE...
- 张建珍于荣荣张敏李大琪马恩波
- 文献传递
- 亚致死剂量马拉硫磷和西维因对飞蝗P450基因表达研究被引量：4
- 2012年
- 采用实时定量PCR技术检测飞蝗Locusta migratoria细胞色素P450基因CYP4G62、CYP6EL1和CYP9AQ1经马拉硫磷和西维因不同亚致死剂量和不同时间处理后mRNA的表达水平。结果表明,经马拉硫磷不同亚致死剂量LD10、LD30和LD50处理后,飞蝗CYP4G62和CYP6EL1均在高剂量LD50被显著诱导,分别为对照的3.03和2.0倍,而在低剂量LD10无显著性差异。CYP9AQ1在3个亚致死剂量下表达量均显著提高,且增量随处理浓度增加而降低。经西维因3个亚致死剂量处理后,除在LD30这一浓度下引起CYP4G62表达提高外,其它的P450基因均无显著性差异。选择2种农药的LD15对飞蝗进行点滴处理,分别检测6、12、24和48 h基因的相对表达。经马拉硫磷LD15处理后,除CYP6EL1在12 h和CYP9AQ1在24 h表达量显著降低外,其它各时间点基因表达均无显著差异。经西维因处理不同时间后,3个P450基因的相对表达量均无显著性差异。综合上述结果说明马拉硫磷对3个细胞色素P450基因有一定的诱导作用,而西维因对其无诱导作用。
- 于荣荣郭艳琼张建珍马恩波郭亚平
- 关键词：细胞色素P450马拉硫磷西维因亚致死剂量
- 飞蝗几丁质脱乙酰基酶基因的分子特性和生物学功能被引量：3
- 2017年
- 【目的】几丁质脱乙酰基酶(chitin deacetylase,CDA)是昆虫几丁质代谢系统的重要酶系,研究飞蝗(Locusta migratoria)几丁质脱乙酰基酶基因的分子特性和生物学功能,为新型农药靶标筛选提供科学依据。【方法】基于飞蝗转录组数据库,获得几丁质脱乙酰基酶基因的c DNA序列,将其与飞蝗基因组进行比对,绘制基因结构图。将其与赤拟谷盗CDAs序列进行比对,并采用Blast P和SMART软件进行功能域预测。将已鉴定的飞蝗CDAs分别与赤拟谷盗、果蝇、冈比亚按蚊、家蚕、中华稻蝗和云杉卷叶蛾的同源序列进行聚类分析,采用MEGA 5.02软件中的neighbor-joining(NJ)法构建系统发育树。采用reverse transcription quantitative PCR(RT-q PCR)方法检测分析CDA在飞蝗5龄若虫不同组织部位和不同发育日龄表皮中的表达特性,进一步采用RNA干扰(RNAi)技术研究其对飞蝗蜕皮发育的影响。采用化学检测法测定其几丁质含量。利用透射电镜(TEM)观察其对表皮几丁质排列的影响。【结果】在飞蝗转录组数据库中搜索获得3条几丁质脱乙酰基酶基因全长c DNA序列,生物信息学分析发现其均具有信号肽,开放阅读框包含几丁质结合区(Ch BD)和几丁质脱乙酰基催化域(CDA)2个功能域。与赤拟谷盗CDAs序列比对结果表明飞蝗2条CDAs部分序列存在差异,且与赤拟谷盗Tc CDA5的2个剪切子差异序列位置一致,显示2条序列为2个剪切子。聚类分析结果表明,3条序列分别与6种昆虫CDA4和CDA5以较高的置信度聚为一支。分别将其命名为Lm CDA4、Lm CDA5a和Lm CDA5b。不同组织部位表达结果表明Lm CDA4和Lm CDA5在飞蝗前肠、后肠和表皮中高表达,Lm CDA5在脂肪体中也有较高的表达;CDAs在5龄不同天数表皮表达结果显示Lm CDA4和Lm CDA5在5龄第1和第2天的表皮中表达量较高,之后逐步下降。注射ds Lm CDA4或ds Lm CDA524 h后,与对照组相比,基因表达量显著降低,沉默效率达�
- 于荣荣丁国伟刘卫敏张敏赵小明韩鹏飞马恩波张建珍
- 关键词：飞蝗日龄表型
- 昆虫几丁质去乙酰基酶基因1及其在害虫防治中的应用
- 本发明提供一种昆虫几丁质去乙酰基酶基因1(CDA1)全长序列及其在农业害虫防治中的应用。具体为通过生物信息学方法，从飞蝗转录组中获取几丁质去乙酰基酶基因1片段，进一步调取获得序列为SEQ ID NO：1基因全长。依据SE...
- 张建珍于荣荣张敏李大琪马恩波
- 文献传递
- Knickkopf基因dsRNA在害虫防治中的应用
- 本发明提供一种Knickkopf基因dsRNA在害虫防治中的应用。具体是一种飞蝗Knickkopf基因，该基因的核苷酸序列为SEQ ID NO：1，基于SEQ ID NO：1，设计并合成基因片段和相应的dsRNA。设计合...
- 张建珍于荣荣李涛丁国伟马恩波
- 文献传递
