傅立元
- 作品数：7 被引量：38H指数：4
- 供职机构：辽宁师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：辽宁省科学技术计划项目辽宁省海洋与渔业厅科研计划项目公益性行业科研专项更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 文蛤肠、外套膜和肝胰脏组织cDNA文库构建及其ESTs序列分析被引量：7
- 2010年
- 利用SMART cDNA文库构建试剂盒构建了文蛤(Meretrix meretrix)肠、外套膜和肝胰脏组织的cDNA文库。经测定原始文库滴度分别为2.10×106、1.70×106和1.60×106,重组率高于95%,肠组织文库插入片段长度均大于1000bp,外套膜和肝胰脏组织文库的插入片段长度大于1kb的占87.5%,文库质量符合标准要求。随机选取文库的3168个克隆进行5′端测序,获得高质量表达序列标签(Expressed Sequence Tags,ESTs)3029个(肠:1005,外套膜:1019,肝胰脏:1005),测序成功率95.58%。经质量控制和拼接得到1796个单基因簇(Unigene),其中306个叠联群(Contigs),1490个单一序列(Singletons)。通过Blastx搜索比对、查询和注释分析,共得到已知基因696个(肠:216,外套膜:235个;肝胰脏:245个),占总数38.75%。在1796个单基因簇(Unigene)发现微卫星序列55条,这些存在微卫星位点的序列占整个ESTs数据库的3.1%。
- 高祥刚李云峰宋文涛王健傅立元刘卫东鲍相渤赫崇波
- 关键词：文蛤CDNA文库表达序列标签
- 虾夷扇贝外套膜和肾脏组织cDNA文库构建以及EST的初步分析被引量：21
- 2010年
- 利用SMARTcDNA文库构建试剂盒首次构建了健康虾夷扇贝(Mizuhopecten yessoensis)外套膜和肾脏2种组织的cDNA文库。2个文库容量分别为2.30×106CFU/mL和1.20×106CFU/mL,重组率均超过98%,平均插入片段长度均大于1kb,文库质量符合标准要求。将随机选取的4009个克隆进行5′端测序,得到3884个有效序列(外套膜923个,肾脏2961个),测序成功率96.9%。经过质量控制和拼接,共得到2007条单基因簇(Unigenes),包含363个序列重叠群(Contigs)和1644条单一序列(Singletons)。通过BLASTx和BLASTn搜索比对,共有659个Unigenes(外套膜157个;肾脏502个)获得了基因注释(E
- 李云峰刘卫东高祥刚李文姬刘莹傅立元李宏俊王健鲍相渤赫崇波
- 关键词：虾夷扇贝CDNA文库免疫相关基因EST-SSR
- 圆斑星鲽肌肉和脾脏组织cDNA文库构建及部分ESTs分析被引量：1
- 2010年
- 构建了圆斑星鲽肌肉和脾脏组织的cDNA文库,2个文库的库容量分别为5.0×106和1.1×106,重组率为97.3%和93.2%,平均插入片断长度大于800 bp。进行了1002个(肌肉541个,脾脏461个)ESTs测序,得到621个(肌肉192个,脾脏429个)单基因簇,其中包括110个(肌肉87个,脾脏23个)重叠群和511个(肌肉105个,脾脏406个)单拷贝。BLASTX分析的结果显示,318(51.2%)个基因簇有相关同源性,其他的303个EST(48.8%)无明显的同源性(E值≤E-5)。
- 李云峰贺凌史晓明高祥刚傅立元王健刘星赫崇波
- 关键词：圆斑星鲽CDNA文库ESTS
- SSR不对称PCR法分析虾夷扇贝遗传多样性被引量：8
- 2009年
- 采用微卫星引物的不对称扩增法(即不对称PCR-SSR方法),得到了较为准确的微卫星,运用8对微卫星标记对取自日本青森县的自然群体(QSX)、俄罗斯海参崴自然生群体(HSW)和大连旅顺口的自然群体(LSK)及大连的广鹿岛(GLD)、獐子岛(ZZD)、小长山(XCS)和凌水桥(LSQ)养殖群体进行遗传多样性分析。平均观察杂合度(Ho)和期望杂合度(He)分别为0.51563～0.64583和0.67575～0.74535,其中QSX群体的平均杂合度最高,HSW群体的最低,各群体间的差异不显著,说明中国的扇贝的群体遗传多样性仍然处于一个很高的水平,种质资源较丰富。并对常规PCR和不对称PCR方法扩增微卫星的优缺点进行了探讨。
- 高祥刚曹洁刘莹刘卫东傅立元鲍相渤赫崇波
- 关键词：微卫星标记虾夷扇贝
- 圆斑星鲽MHC ⅡB基因结构、多态性及组织表达分析被引量：4
- 2011年
- 通过表达序列标签法和cDNA末端快速扩增(RACE)技术,分离和克隆了圆斑星鲽(Verasper variegatus)主要组织相容性复合体(MHC)IIB的全长cDNA序列,该cDNA全长为1144bp,5'UTR(untranslated region)为7bp,3'UTR为450bp,开放阅读框(ORF)长度为687bp,可编码228个氨基酸,包含信号肽、抗原结合域(β1)、IGC区(β2)、跨膜区和胞质区5个结构域。同源分析表明,圆斑星鲽MHCIIB氨基酸序列与其他硬骨鱼具有49%～79%的同源性,与鼠、人、红原鸡和护士鲨的相似性较低,分别为34%、33%、31%和30%。圆斑星鲽MHC ⅡB基因含有5个内含子,与其他硬骨鱼不同,其β2结构域编码区内存在1个109bp的内含子。根据获得的MHC ⅡB基因组序列设计特异性引物,在10尾野生圆斑星鲽中扩增了包括完整内含子1和外显子2的长度约388bp的DNA片段,PCR产物直接测序后发现在270bp的抗原结合域中共有23个位点发生变异,密码子第1位和第2位的变异明显高于第3位。利用荧光定量PCR分析组织表达发现,MHCIIB基因在健康圆斑星鲽9种组织中均有表达,但表达量存在差异,肾的表达量最高,肌肉的表达量最低,肾、心、脾脏和鳃的表达量显著高于肝、皮肤、脑、血和肌肉。本研究旨在为MHC基因家族的遗传进化分析、结构与功能的解析提供基础,同时为圆斑星鲽的分子免疫学和标记辅助育种研究提供参考依据。
- 李宏俊王娟王娟高祥刚苏浩刑坤傅立元
- 关键词：圆斑星鲽MHC基因结构多态性
- 虾夷扇贝β-actin基因的克隆和序列分析被引量：1
- 2010年
- 为进一步研究虾夷扇贝功能基因的表达调控。利用SMART cDNA文库构建试剂盒成功构建了健康虾夷扇贝外套膜和肾脏两种组织的cDNA文库。对随机选取的4009个克隆进行5′端测序,比对,筛选出1条β肌动蛋白同源序列,对此EST序列两端进行扩增、测序,得到肌动蛋白基因cDNA全长序列。肌动蛋白基因cDNA全长1536bp(不包括polyA),5′端非编码区84bp,3′端非翻译区321bp,阅读框1131bp,编码377个氨基酸。在基因组DNA中,该基因被一个内含子分为两段,内含子位于第41和第42个氨基酸之间,长度为1498bp。系统发育分析显示该肌动蛋白属于β类型。本研究得到的虾夷扇贝β-肌动蛋白基因可以被用于作为定量某种虾夷扇贝mRNA的标准,这为继续研究虾夷扇贝其它功能基因,及其分子生物的进一步研究、促进其他相关分子发育和系统进化研究奠定了基础。
- 傅立元高祥刚李云峰王健赫崇波
- 关键词：虾夷扇贝CDNA文库Β-肌动蛋白基因克隆
- 虾夷扇贝beta-actin基因和G型溶菌酶基因的克隆与表达研究
- 虾夷扇贝是20世纪80年代有日本引入我国,现已成为我国北方重要的贝类养殖品种,但近年来,虾夷扇贝陆续爆发大规模死亡,不但造成了巨大的经济损失,还严重影响了该产业的健康发展。病害的不断爆发以及病因的多样性迫切要求我们对此进...
- 傅立元
- 关键词：虾夷扇贝Β-肌动蛋白
- 文献传递
