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乙型脑炎病毒持续感染株E区序列变异与病毒性状的关系被引量：3: 2006年; 目的研究乙型脑炎病毒(JaGAr-01株和Nakayama株)持续感染变异株性状与E区基因序列的关系。方法将两种乙脑病毒野生株分别感染人肝癌KN73细胞,建立乙型脑炎病毒持续感染系。采用PFU法进行病毒滴度测定;为探讨持续感染病毒的增殖性,将两种病毒野生株及其持续感染株分别感染KN73细胞;利用E区特异引物以RT-PCR法得到两种病毒E区基因片段,应用基因测序反应进行序列分析,并对两种病毒株E区序列进行比较。结果在KN73细胞中两种持续感染株的增殖性比野生株明显低下。E区基因测序显示与JaGAr-01野生株比较,其持续感染变异株有4个氨基酸发生置换(第61位酪氨酸→天门冬氨酸,第219位组氨酸→酪氨酸,第384位缬氨酸→谷氨酸,第418位脯氨酸→丙氨酸);持续感染Nakayama株与其野生株相比有11个氨基酸发生置换(第51位精氨酸→丝氨酸,第61位酪氨酸→天门冬氨酸,第83位赖氨酸→谷氨酸,第123位丝氨酸→精氨酸,第209位精氨酸→赖氨酸,第227位脯氨酸→丝氨酸,第276位天门冬氨酸→丝氨酸,第290位精氨酸→赖氨酸,第387位赖氨酸→精氨酸,第418位亮氨酸→脯氨酸,第454位精氨酸→甘氨酸)。对比还显示基因变异后的持续感染JaGAr-01株和持续感染Nakayama株氨基酸排列的相同性达99.2%。结论乙脑病毒的持续感染变异株增殖性低于野生株;乙脑病毒变异株E区存在基因变异。; 徐可树李琪王华枫周霞; 关键词：流行性乙型脑炎病毒

重组转化生长因子-β_3基因对大鼠肝星状细胞内、外蛋白表达的影响被引量：1: 2009年; 目的探讨重组转化生长因子-β3(TGF-β3)基因对大鼠肝星状细胞(HSC)内、外蛋白合成及分泌的影响。方法构建质粒pcDNA3.1(+)-TGF-β3和pcDNA3.1(+)-TGF-β1。稳定转染:通过脂质体介导的方法,将pcDNA3.1(+)-TGF-β1转染HSC-T6,经G418筛选建立稳定高表达pcDNA3.1(+)-TGF-β1的HSC-T6细胞阳性克隆。再将pcDNA3.1(+)-TGF-β3转染HSC-T6克隆细胞,用W estern b lot法和酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测细胞内外TGF-β1、Ⅰ型胶原、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9及金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)-1的蛋白表达量。结果pcDNA3.1(+)-TGF-β3转染HSC-T6阳性细胞克隆后,与单纯阳性克隆组相比,TGF-β1、Ⅰ型胶原、TIMP-1细胞内蛋白表达及培养上清中的分泌水平均明显降低(P<0.05),MMP-2的表达也降低,但两者间差异无统计学意义(P>0.05),而MMP-9的表达明显增高(P<0.05)。结论重组质粒pcDNA3.1(+)-TGF-β3能减少细胞内外Ⅰ型胶原的合成及分泌;通过调节MMP-9及TIMP-1的表达,可抑制细胞外基质的合成,促进其降解。; 张祎周霞余姣徐可树; 关键词：转化生长因子-Β3 肝纤维化肝星状细胞

重组转化生长因子β3基因对大鼠肝星状细胞Ⅰ型胶原表达的影响被引量：6: 2008年; 目的观察转化生长因子D3基因（TGFβ3）对大鼠肝星状细胞株（HSC—T6）Ⅰ型胶原合成的影响。方法TGFβ3表达质粒[pcDNA3．1（＋）-TGFβ31和TGFβ1表达质粒[pcDNA3．1（＋）-TGFD11的构建。通过脂质体介导方法，将pcDNA3．1（＋）-TGFβ1、pcDNA3．1（＋）-TGFβ3分别及共同转染体外培养的HSC—T6细胞，荧光定量PCR法及Westernblot法分别检测转染后TGFβ1、TGFD3、Ⅰ型胶原mRNA及蛋白质的表达。将pcDNA3．1（＋）-TGFD1转染HSC—T6细胞，经G418筛选建立高表达TGFD1的HSC～T6细胞克隆，pcDNA3．1（＋）-TGFD3转染克隆细胞，荧光定量PCR法检测转染后TGFβ3、TGFβ1及Ⅰ型胶原mRNA的表达，Westernblot法检测TGFβ1、Ⅰ型胶原蛋白的表达情况。结果构建的pcDNA3．1（＋）TGFD3、pcDNA3．1（＋）-TGFD1质粒可转染HSC—T6细胞，转染率28．2％。pcDNA3．1（＋）TGF侈3转染细胞后，Ⅰ型胶原mRNA及蛋白的表达较空白组及对照组增加，以72h增高最为明显（P〈0．05）；共转染组Ⅰ型胶原mRNA及蛋白质的表达较pcDNA3．1（＋）-TGFβ1转染组明显降低（P〈0．05）。TGF侈3转染克隆细胞后，TGFD1mRNA表达较克隆组无明显改变（P〉0．05），而蛋白质表达明显下降（P〈0．05），Ⅰ型胶原mRNA及蛋白质表达均较克隆组明显降低（P〈0．05）。结论TGFD3基因转染正常培养的HSC—T6细胞，增加Ⅰ型胶原的表达；转染高表达TGFβ1的克隆组HSC—T6细胞，Ⅰ型胶原表达明显降低，提示TGFβ3对肝纤维化的发生有抑制作用。; 周霞余姣李琪钱伟徐可树; 关键词：转化生长因子Β3 肝星状细胞

大鼠肝星状细胞TGF—β3／TGF-β1mRNA比值与TGF-β1、MMP-9、TIMP-1表达的关系被引量：2: 2009年; 目的探讨大鼠肝星状细胞（HSC—T6）中转化生长因子-β3（TGF-β3）和转化生长因子-β1（TGF-β1）mRNA比值变化与TGF—β1、MMP-9、TIMP1表达的关系。方法构建质粒pcDNA3．1（＋）-TGF-β1和pcDNA3．1（＋）-TGF-β1。将pcDNA3．1（＋）TGF—β1转染HSC—T6细胞株，经筛选建立高表达TGF-β1，的HSC-T6细胞阳性克隆。pcDNA3．1（＋）-TGF-β3转染该阳性克隆，48h后荧光定量PCR法和Westernblot法分别检测TGF-β1、TGF-β1、MMP-9和TIMP1mRNA和蛋白的变化。结果空白组、对照组、阳性克隆组及TGF-β3干预组中，TGF-β3／TGF-β3 mRNA比值分别为0．286±0．070、0．874±0．141、0．448±0．327和1．277±0．244；阳性克隆组与空白组和对照组相比，TGF-β1，和TGF-β1的mRNA及蛋白表达明显增高（P〈0．05），MMP9的mRNA及蛋白表达明显减少（P〈0．05）；TGF-β1干预组与阳性克隆组相比，TGF-β1蛋白和TGF-β1 mRNA及蛋白表达明显下降（P〈0．05），MMP-9mRNA及蛋白表达明显增加（P〈0．05）。结论TGF-β1能下凋TGF-β3。蛋白表达；当TGF-β3／TGF-β1mRNA比值〉1时，TGF-β1和TIMP-1表达减少，MMP-9表达增加；当TGF-β2／TGF-＆mRNA比值〈1时，TGF-鼠表达减少，TIMP—1和MMP-9表达无变化。; 余姣周霞李琪钱伟徐可树; 关键词：肝星状细胞

转化生长因子-β3对肝脏和胰腺纤维化的影响被引量：2: 2007年; 组织纤维化的基本特征是细胞外基质降解减少、过度沉积,导致组织结构的改建.TGF-β3通过抑制胶原的沉积,促进其降解而具有抗纤维化作用,并被证实在创伤愈合过程中可减轻伤后疤痕的形成.本文着重介绍了TGF-β3在肝脏及胰腺纤维化中的表达及其作用,以进一步了解其对纤维化疾病的影响.; 周霞徐可树; 关键词：转化生长因子-Β3 肝纤维化胰腺纤维化

KLF6与早期肝纤维化: 2006年; Kruppel样因子6（KLF6）是一种核转录调控因子，也称Zf9（zinc finger factor 9）或CPBP（core promoter-binding protein），可以特异性结合靶基因启动子区域的GC盒、CACCC盒等核心元件而发挥生物学效应。近年来国外研究表明：在活化的肝星状细胞（HSC）中，可见KLF6的表达，KLF6可通过调节TGFβ1及Ⅰ型TGFβ、Ⅱ型TGFβ受体、尿激酶型纤维蛋白酶原激活剂、α1（1）型胶原的表达，在肝纤维化过程中发挥其作用，现就KLF6与早期肝纤维化的关系综述如下。; 周霞徐可树; 关键词：早期肝纤维化基因启动子区域 TGFΒ1 TGFΒ受体肝纤维化过程

放线菌素D对持续感染乙脑病毒复制的影响: 2006年; 目的：研究放线菌素D对持续感染乙脑病毒增殖活性的影响。方法：将乙脑病毒感染人肝癌细胞株KN73，采用标准胰蛋白酶消化技术进行细胞传代，建立持续感染系，加入不同浓度的放线菌素D（0～2．0mg·L^-1），24h后收集细胞内病毒，应用空斑形成实验测定病毒含量，对比用药前后持续感染病毒量的变化。结果：用浓度为0．1，0．2，0．5，1．0，2．0mg·L^-1的放线菌素D处理感染细胞后，细胞内病毒量分别是对照组的1．89，3．33，4．34，4．52，4．85倍。结论：放线菌素D可使持续感染的乙脑病毒复制增加。; 徐可树王华枫李琪周霞; 关键词：放线菌素D 乙型脑炎病毒病毒复制

重组转化生长因子β3基因对大鼠肝纤维化细胞模型胶原合成及沉积的影响被引量：8: 2008年; 目的观察重组转化生长因子艮（TGF-β3）基因对大鼠肝纤维化细胞模型胶原合成及沉积的影响。方法（1）构建质粒pcDNA3．1（＋）-TGF-B]和pcDNA3．1（＋）·TGF-β1。（2）将pcDNA3．1（＋）-TGF-β1，转染大鼠肝星状细胞（HSC）-T6，经G418筛选建立稳定高表达TGF-β1的HSC-T6细胞阳性克隆。（3）pcDNA3．1（＋）-TGF-β3转染HSC-T6阳性细胞克隆，荧光实时定量PCR法检测TGF-β3 mRNA的表达；荧光实时定量PCR法及Western印迹法分别检测TGF-β1、I型胶原、基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9及TIMP-1的mRNA和蛋白表达情况。结果（1）pcDNA3．1（＋）-TGF-β3和pcDNA3．1（＋）-TGF-β1质粒均可转染HSC-T6细胞，以转染48h时转染效率最高，达28．2％。（2）pcDNA3．1（＋）-TGF-β3转染HSC-T6细胞阳性克隆后，与单纯阳性克隆组相比，TGF-β1，mRNA表达无明显改变，而蛋白表达明显低（0．48±0．07 vs 0．66±0．14，P=0．023）；I型胶原mRNA及蛋白的表达明显低（mRNA：7．2±1．0 vs 13．7±0．4，P=0．010，蛋白：0．45±0．21 vs 0．82±0．13，P=0．041），MMP-2 mRNA及蛋白较低，但差异无统计学意义（均P〉0．05），MMP-9mRNA及蛋白表达明显多（均P〈0．05），TIMP-1mRNA及蛋白表达明显低（均P〈0．05）。结论（1）重组TGF-β3真核表达载体构建正确，在转染阳性克隆细胞48h后获得高效表达；（2）稳定高表达TGF-β1，的HSC-T6细胞阳性克隆可作为肝纤维化细胞模型；（3）pcDNA3．1（＋）-TGF-β3转染阳性克隆能减少胶原合成，并通过调节基质金属蛋白酶及其抑制剂的表达对胶原沉积起抑制作用。; 李琪周霞余姣钱伟徐可树; 关键词：转化生长因子Β 肝硬化胶原合成

瑞巴派特对门脉高压性胃病胃黏膜中瘦素表达的影响被引量：4: 2006年; 目的:观察瑞巴派特对门脉高压性胃病胃黏膜中瘦素表达的影响,评价其对门脉高压性胃病的胃黏膜保护作用．方法:将患者随机分为正常对照组、正常干预组、空白对照组及试验组各15例,其中正常干预组及试验组给予口服瑞巴派特治疗．治疗前后内镜检查对比,用RT-PCR法分别检测治疗前后胃黏膜组织中瘦素mRNA的表达水平．结果:0 wk时,正常对照组瘦素mRNA表达量为0．344±0．202,空白对照组0．816±0．132,实验组0．803±0．143,与正常对照组相比,空白对照组与实验组的瘦素mRNA的表达有差异 (P<0．05);4 wk时,空白对照组瘦素mRNA表达量为0．867±0．170,试验组为1．120±0．237,正常干预组为0．397±0．199,与空白对照组相比, 试验组瘦素mRNA的表达增多;与正常干预组相比,试验组在治疗后其瘦素mRNA的表达显著升高(P<0．01)．内镜检查前后对比:药物治疗4 wk时试验组14例中胃黏膜的内镜表现不同程度改善12例(12/14),而空白对照组无一例改善．结论:瑞巴派特可通过增加胃黏膜中的瘦素表达,对门脉高压性胃病的胃黏膜起保护作用．; 徐可树李琪周霞; 关键词：瑞巴派特瘦素门脉高压性胃病

瑞巴派特对门脉高压性胃病的临床疗效观察被引量：7: 2006年; 目的评价瑞巴派特对门脉高压性胃病的临床疗效及安全性。方法将患者随机分为正常对照组、正常干预组、空白对照组及试验组各15例,其中正常干预组及试验组给予口服瑞巴派特治疗4周。观察治疗前后临床症状积分和内镜表现的变化。结果治疗前试验组与空白对照组的症状积分无显著性差异,而药物治疗4周后试验组患者剑突下疼痛、上腹不适、烧心等症状明显缓解,与治疗前相比,差异有显著性(P<0.01),腹胀虽有缓解,但不如前者明显(P>0.05);而空白对照组则症状无缓解;试验组的总有效率为85.7%。治疗前试验组有胃窦和/或胃体水肿糜烂,甚至呈mosaic样改变,治疗后这些表现明显改善。结论瑞巴派特能改善门脉高压性胃病患者的临床症状及胃黏膜病变。; 李琪周霞徐可树; 关键词：瑞巴派特门脉高压性胃病疗效

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周霞

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