常小斌
- 作品数：7 被引量：65H指数：5
- 供职机构：湖南农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：湖南省自然科学基金上海市科技兴农重点攻关项目国家质检总局科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 动物源性食品中弓形虫Nested PCR-RFLP分子检测技术的建立被引量：7
- 2007年
- 目的 为了建立一种快速、特异、灵敏检测动物源性食品中弓形虫的技术。方法根据原虫rDNA的部分序列，找出弓形虫和新孢子虫共同保守DNA片段，设计套式PCR两对引物，以Ultra Pure^TM基因组DNA快速提取试剂盒提取弓形虫和新孢子虫DNA为模板，初步建立了检测两种虫体的NestedPCR技术。将纯化的Nested PCR产物成功地克隆到pGEM-T-easy载体中，经鉴定、测序并进行同源性分析。结果 Nested—PCR的外、内引物对两种虫体rDNA基因均能进行扩增，长度分别在800～900bp、400～500bp之间。内引物扩增DNA序列与公布的同种虫体DNA序列同源性较高，弓形虫和新孢子虫分别达99.1％、97．2％，但它们两者之间差异较大，同源性仅为86．6％。用软件寻找能区别两者基因序列差异的酶切位点，挑选内切酶进行RFLP实验，结果表明新孢子虫NestedPCR扩增片段能被Vspl酶切。同时进行该分子检测技术的特异性和敏感性试验，实验证明该NestedPCR能对弓形虫和新孢子虫rDNA基因进行特异性的扩增，而对其它原虫基因未能扩增出任何片段；该Nested-PCR能检测出100个弓形虫速殖子／g猪肉。结论 本实验建立NestedPCR检测方法不仅可用于检测动物性食品中弓形虫，而且能明确区分弓形虫和新孢子虫。
- 王权王巧全潘淑娟陈志强陈永军常小斌李健
- 关键词：弓形虫新孢子虫套式PCR
- 嗜水气单胞菌Lamp检测方法的建立及应用被引量：22
- 2007年
- 基于嗜水气单胞菌气溶素（aerolysin）基因的序列，设计了1套引物，通过条件优化，成功建立了针对致病性嗜水气单胞菌的环媒恒温基因扩增（Lamp）检测法。采用Lamp法对病原菌进行了扩增，并对病鱼血样进行了检测。结果表明，该法只检出致病性嗜水气单胞菌。对不同浓度的细菌悬液扩增结果表明，Lamp检测嗜水气单胞菌的最低菌液浓度为1．4～14／μL。
- 程天印刘洵常小斌
- 关键词：嗜水气单胞菌
- 藤黄微球菌PCR检测方法的建立被引量：3
- 2007年
- 根据藤黄微球菌23SrRNA基因序列设计了一对特异性引物,通过优化扩增条件,成功地建立了一种快速、灵敏、准确的PCR检测法。与大肠杆菌、沙门氏杆菌、链球菌等九种其他病原菌无特异性反应,以自然感染猪的临床样品YZ株抽提的DNA为模板,扩增结果为阳性。结果表明,该法检测藤黄微球菌准确性高。本法扩增藤黄微球菌产生的特异性片段为1326bp;最低检出浓度为1058CFU/mL。
- 陈宇明程天印王小君纪春晓常小斌
- 关键词：藤黄微球菌PCR
- 环介导等温基因扩增技术及其应用研究进展被引量：14
- 2006年
- 本文简单综述了环介导等温基因扩增方法(LAMP法)的基本原理,操作方法及其研究进展。LAMP法是一种简便、快速、高效、特异性很强的基因扩增方法,尤其适合于人类和动物疫病的检测。
- 常小斌刘洵程天印王小君陈宇明
- 己烯雌酚单克隆抗体的制备及初步应用
- 本研究以己烯雌酚(diethylstilbestrol,DES)为研究对象,通过一系列化学反应合成和纯化得到了己烯雌酚-单-羧基丙基-醚(DES-MCPE),采用活性酯法将己烯雌酚-单-羧基丙基-醚分别与牛血清白蛋白(B...
- 常小斌
- 关键词：己烯雌酚单克隆抗体
- 文献传递
- 己烯雌酚单克隆抗体的制备及鉴定被引量：8
- 2008年
- 用人工合成的己烯雌酚-牛血清白蛋白(DES-BSA)作为抗原免疫Balb/c小鼠,利用杂交瘤技术建立了1株稳定分泌己烯雌酚单克隆抗体的杂交瘤细胞1F5,经鉴定:杂交瘤细胞染色体数为99.24±2.5,其分泌的抗体亚型为IgG2α。该细胞株体外传代和冻存复苏后抗体分泌稳定。间接ELISA测定培养上清效价为1∶640,诱生腹水效价3.2×106。ciELISA检测显示其DES 50%抑制质量浓度(IC50)为24μg/L,与水产养殖中常见禁用激素和抗菌药物的交叉反应小,表明该单抗具有较好的敏感性和特异性。
- 常小斌程天印王权
- 关键词：己烯雌酚单克隆抗体
- 赖解旋酶恒温基因扩增技术的原理、应用和展望被引量：12
- 2007年
- 赖解旋酶恒温基因扩增方法(HDA法)是新近发明的一种简便、快速、高效的体外恒温基因扩增技术.该法依靠DNA解旋酶解开双链DNA、单链DNA结合蛋白(SSB)维持单链状态、DNA聚合酶催化靶片段的扩增.研究表明,HDA能扩增微生物基因组DNA、病原菌DNA、质粒DNA和cDNA等,从灵敏性、准确性和可操作性几方面看,该方法具有广阔的实用前景.
- 刘洵程天印常小斌王小君
- 关键词：DNA解旋酶
