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HIV-1病毒感染因子基因克隆、表达、纯化及其抗体制备的研究被引量：1: 2006年; 目的制备HIV-1病毒感染因子(Vif)及其抗体。方法用PCR技术从HIV-1NL4·3cDNA质粒中扩增病毒感染因子(vif)基因,vif基因全长为579nt(核苷酸),翻译成含192个氨基酸的蛋白质。将测序鉴定过的vif基因克隆到原核表达载体pET-32a上,以包涵体的形式在大肠埃希菌BL21(DE3)中高效表达,Vif蛋白C端融合6×His标签便于纯化及鉴定。应用酶切鉴定、SDS-PAGE及WesternBlot等方法确保基因片段的正确性及表达蛋白的特异性。间接ELISA法测定兔多克隆抗体滴度。结果成功地获得了高纯度的Vif融合蛋白,纯度可达80%以上。用其制备多克隆抗体滴度可达1∶204800。结论获得高纯度的Vif融合蛋白及其高效价的抗体。; 李岚杨怡姝张晓光张晓梅李泽琳曾毅; 关键词：HIV-1 基因表达抗体

校情报研究面临的体制难题及改革进展: 科研水平是评估高校实力的重要因素，教学水平是见证高校品牌的关键要点，教学、科研的提高，必定建立在情报研究的基础上。如何发挥高校图书馆的资源、人才、设备优势，与高校其他部处学院的情报研究相融合，为传统的图书馆职责拓展范围，...; 沈思嗣杨怡姝王小利李泽琳曾毅; 关键词：高校情报研究; 文献传递

中草药中HIV-1三大酶类抑制剂研究进展被引量：1: 2007年; 艾滋病，即获得性免疫缺陷综合征（AIDS），是由人类免疫缺陷病毒（HIV）感染所导致的人体防御机能的缺陷（尤其是细胞介导的免疫机能缺陷），患者易于发生机会性感染以及肿瘤的各种临床综合征。当前，艾滋病的治疗以高效抗逆转录病毒疗法（High Active Anti—Retroviral Therapy，HAART）为主，但其毒副作用强，耐药性不断发生，价格昂贵，且不能彻底清除人体内的HIV，; 王晓艳刘兆梅王小利马洪涛杨怡姝温瑞兴; 关键词：HIV-1 逆转录酶整合酶蛋白酶抑制剂中草药

内在抗病毒因子Trim5α抗HIV-1作用研究进展被引量：1: 2011年; 2004年Stremlau等在恒河猴体内发现Trim5α蛋白能有效地阻断HIV病毒的感染[1]。Trim5α属于三重基序蛋白（ tripartite motif protein，Trim）家族中的一员，该家族蛋白结构中包含一个典型的RING结构域，一个或两个B-Box结构域及一个卷曲螺旋Coiled-Coil结构域，因此又被称为RBCC蛋白。目前已发现的人类Trim家族基因超过70余种，Trim蛋白家族的基因散在地分布在人类染色体上，其编码的蛋白广泛分布于细胞核及细胞质中。Trim蛋白家族涉及的生物学功能广泛，与细胞的分裂、生长、分化、成熟及免疫都有密切关系[2]。许多Trim家族成员，还具有限制反转录病毒感染的能力[3]，其中Trim5α蛋白的抗HIV-1活性引起了众多研究者的关注。; 吴森仁杨怡姝曾毅李泽琳; 关键词：抗HIV-1作用

具有抑制登革病毒复制作用的短肽及其应用: 本发明涉及病毒学领域，具体公开了一种具有抑制登革病毒复制作用的短肽及其应用。本发明所提供的短肽的氨基酸序列为KHGHHRH，即Lys‑His‑Gly‑His‑His‑Arg‑His。所述短肽具有与NS5高特异性的亲和能力...; 王明连张婷李劲松王群杨怡姝李劲涛王小利; 文献传递

人APOBEC3G基因克隆、表达、纯化及多克隆抗体制备: 2008年; 为了获得人APOBEC3G蛋白及其多克隆抗体,从H9细胞中提取总RNA,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术获得人APOBEC3G基因.将测序鉴定过的APOBEC3G基因克隆到原核表达载体pET-32a上,以包涵体的形式在E.coli BL21(DE3)中高效表达,由于APOBEC3G蛋白C端融合了6×His标签,有助于对蛋白的纯化及鉴定.应用酶切技术、SDS-PAGE及Western Blot等方法确保基因片段的正确性和蛋白的特异性.纯化后的APOBEC3G蛋白用来免疫日本大耳白兔,用间接ELISA法测定兔多克隆抗体滴度,获得了纯度超过80%的APOBEC3G融合蛋白,抗APOBEC3G多克隆抗体滴度高达1:102 400.; 李岚杨怡姝李泽琳曾毅; 关键词：基因抗体纯化克隆

APOBEC3G与Vif在HIV-1感染中的作用: 2012年; 载脂蛋白B mRNA编辑催化多肽样(apolipoprotein B mRNA-editing catalytic polypeptide-like,APOBEC)蛋白是一组胞嘧啶脱氨基酶,具有天然的抗病毒活性,对多种病毒具有抑制作用,特别是逆转录病毒.APOBEC3蛋白能够抑制人类免疫缺陷病毒(HIV-1)的感染,其中APOBEC3G和APOBEC3F的作用最强.APOBEC3G能够通过胞嘧啶脱氨基作用和非胞嘧啶脱氨基作用抑制病毒感染.HIV-1病毒感染因子(Vif)蛋白主要经泛素-蛋白酶体途径介导APOBEC3G降解,从而拮抗其抗病毒作用.APOBEC3G和Vif之间相互作用的研究对于寻求新的抗HIV治疗靶点具有重要意义.; 马寅佳杨怡姝曾毅; 关键词：人类免疫缺陷病毒载脂蛋白B

基于包膜蛋白和Tat蛋白筛选HIV-1细胞融合抑制剂的高效方法被引量：5: 2018年; 旨在建立一个细胞-细胞融合系统,高效筛选对HIV-1病毒细胞-细胞间传播有抑制作用的药物。构建了p EGFP-Tat质粒,将p EGFP-Tat质粒和HIV-1包膜质粒共转染HEK-293T细胞,成为表达Tat蛋白和包膜蛋白的效应细胞,然后与表达CD4及辅助受体和β-半乳糖苷酶、荧光素酶双报告基因的靶细胞TZM-bl融合,建立了细胞-细胞融合系统,并进行条件优化,确定了最佳的融合体系。用阳性融合抑制剂maraviroc以及没有融合抑制作用的AZT和raltegravir作用于该体系,证明该系统可以特异性有效筛选具有细胞融合抑制作用的药物。用该系统测试了8个样本,发现两种样品对融合有一定的抑制作用。该方法背景值低,特异性强,可用来高效筛选具有切断HIV-1病毒细胞-细胞间传播作用的抗病毒药物。; 王小利杨怡姝沈思嗣王先良冯甜胡秦曾毅; 关键词：HIV-1 进入抑制剂药物筛选

人β-半乳糖苷酶R299L突变体的获得与活性研究: 2022年; 目的:GM1神经节苷脂贮积症是一种由半乳糖苷酶beta 1(galactosidase beta 1,GLB1)基因突变引起的β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,β-gal)活性降低导致的严重的溶酶体贮积病。该病以进行性、致命性神经退行性病变为特征,目前尚无有效的治疗手段,AAV载体介导的基因治疗被认为是最有希望的治疗方法。通过基因定点突变获得具有较高β-gal活性的GLB1突变体,以期用于后续AAV介导的基因治疗。方法:对人类和其他6种脊椎动物GLB1基因进行多序列比对分析,筛选出部分氨基酸位点进行定点突变,采用携带突变位点的重组质粒和AAV9载体转染或感染HEK-293细胞,比较突变体与未突变体的活性差异。对GM1模型鼠注射携带coGLB1-R299L的rAAV9病毒,探究该突变体的体内活性表达。结果:从15个突变体中筛选出coGLB1-R299L突变体,经质粒转染导入细胞后,其β-gal活性比具有野生型氨基酸序列的coGLB1增加了30%~40%。AAV体外感染实验中,rAAV9-coGLB1-R299L组的β-gal活性较未感染的细胞对照组提升了约2.2倍。体内结果显示,rAAV9-coGLB1-R299L在模型鼠体内广泛表达,心脏、肝脏、脾脏、肺、脑组织中β-gal活性显著提升。结论:获得了具有更高β-gal活性的突变体coGLB1-R299L,初步探究了rAAV9-coGLB1-R299L的体外表达效果和模型鼠体内β-半乳糖苷酶的表达与分布,为该突变体应用于AAV介导的GM1神经节苷脂病治疗奠定基础。; 章嫣马文豪赵天意吴小兵盛望杨怡姝; 关键词：Β-半乳糖苷酶腺相关病毒载体定点突变

流式细胞术检测Vpr蛋白对细胞周期影响实验被引量：1: 2010年; 流式细胞术是生物学领域重要的检测技术。为实现实验教学与科研工作的紧密结合,该设计采用流式细胞仪检测表达绿色荧光蛋白阳性细胞比例和细胞周期分布,分析质粒转染的效率并研究蛋白的功能。通过2个经典的检测方案,使学生更好地理解和掌握流式细胞术的检测原理、操作步骤及结果分析方法。; 王小利杨怡姝孙晓娜肖向茜沈思嗣; 关键词：流式细胞术绿色荧光蛋白细胞周期

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