王友亮
- 作品数：10 被引量：4H指数：1
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- D38R突变对细菌视紫红质光循环后半程M态和N态的影响
- 2006年
- 用重叠PCR的方法,定点突变细菌视紫红质(bacteriorhodopsin,BR),克隆到单突变体BRD96N和双突变体BRD38R/D96N的基因,同源转化盐沼盐杆菌(Halobacterium salinarium)L33(BR-),表达突变蛋白BRD96N和BRD38R/D96N.通过显微视频方法对突变BR的M态光致变色特性进行记录,BRD38R/D96N的M态寿命为5 s,约为BRD96N(M态寿命为3 s)的1.7倍.对突变体的激光共聚焦拉曼光谱测定发现,在BRD96N中,1 170 cm-1下移到1 171cm-1,1 258 cm-1上移到1 255 cm-1,而BRD38R/D96N中1 170 cm-1下移到1 173 cm-1;1 258 cm-1上移到1 252 cm-1,而且BRD38R/D96N与BRD96N相比,1 186 cm-1处的峰明显增强.近紫外区圆二色谱显示,两种突变体近紫外区的正负带虽然没有太大差别,但288 nm和290 nm处的极峰却差别显著.所有这些研究结果表明,细菌视紫红质Asp38(D38)突变为Arg(R)可以延长其光循环后半程M态和N态的寿命.
- 王友亮金卫华曹军卫姚保利雷铭
- 关键词：细菌视紫红质重叠PCR光循环
- 枯草芽孢杆菌抗脯氨酸结构类似物突变株的筛选及突变株proBA基因的克隆和序列分析被引量：4
- 2002年
- 利用亚硝基胍对枯草芽孢杆菌 9315 1进行诱变处理 ,获得了耐NaCl浓度达 14 %的突变株 ,同时发现该突变株也是一个抗脯氨酸反馈抑制突变菌株。其胞内自由脯氨酸的含量随着盐浓度的提高显著增加 ,说明其对渗透压的耐受能力与胞内自由脯氨酸的含量紧密相关。利用PCR方法克隆突变株的proBA基因 ,得到一个约 2 3kb的DNA片段 ,序列分析表明该片段含有一完整的proB基因和部分proA基因。与野生菌株的proB基因相比 ,突变株proB基因中有3个碱基发生了改变 ,其中一个碱基的变化 (从起始密码子开始第 781位由T→A)导致了一个氨基酸发生改变 (Ser→Thr) ,另外两个碱基变化为沉默位点突变。将该proB基因转入大肠杆菌脯氨酸营养缺陷型菌株 ,能够与其功能互补。同时对部分proA基因序列分析发现 ,其与proB基因头尾重叠 ,在proA基因起始密码子上游第 14个碱基处有一个类似于SD的序列 ,其所编码的氨基酸序列与枯草芽孢杆菌 16 8的同源性为 77%
- 苗丽霞曹军卫刘瑞杰王友亮曾永辉
- 关键词：枯草芽孢杆菌克隆
- 细菌视紫红质多重突变体结构变化及其中间态的寿命
- 2007年
- 采用基因定点突变的方法,构建了细菌视紫红质(Bacteriorhodopsin,BR)的3种突变体蛋白,即单突变体BRE194Q、三突变体BRI119T/T121S/A126T和四突变体BRI119T/T121S/A126T/E194Q.测定了突变体和野生型BR在水溶液和聚乙烯醇(PVA)膜中的紫外-可见吸收光谱和拉曼光谱,采用显微视频录像技术记录了PVA膜中野生型和3个突变体样品的M态寿命.与野生型BR相比较,在水溶液中,单突变体的可见吸收光谱的最大吸收峰发生了轻微红移,三突变体和四突变体的最大吸收峰则分别发生了11.0和12.0 nm的明显蓝移.在PVA膜中,3个突变体BR的可见吸收光谱的最大吸收峰均发生蓝移,四突变体BR的最大吸收峰为557 nm,蓝移达15.0 nm.四突变体BR在水溶液中的共振拉曼光谱不仅表现有与M态特征相关的1567和1573 cm-1谱带,还有L态特征带1334 cm-1及N态特征带1200,1328,1530和1549 cm-1.在PVA膜中的样品与在水溶液中的比较,四突变体共振拉曼光谱的1334和1549 cm-1带消失,同时1187 cm-1带的强度下降.显微视频录像技术记录的PVA膜中样品的M态寿命表明,野生型BR的M态寿命最短,单突变体的M态寿命小于1.0 s,三突变体的寿命为3.0 s,四突变体的寿命为2.0 s.
- 金卫华曹军卫王友亮熊贵光姚保利雷铭
- 关键词：细菌视紫红质突变体共振拉曼光谱聚乙烯醇
- 细菌视紫红质D96N、D38R/D96N突变体的构建及其对光循环后半程中间态M、N的影响
- 王友亮
- 关键词：细菌视紫红质光循环质子泵PVA
- 定向进化方法提高BR分子光存贮性能的研究
- 细菌嗜紫红质(bacteriorhodopsin,BR)是存在于极端嗜盐菌-盐生盐杆菌紫膜上的一种光敏蛋白,BR蛋白的重要功能是质子泵。BR在完成质子泵功能的同时伴随着一个光循环的过程。 BR分子吸收光能后,形成一系列的...
- 宋景娇王友亮金卫华曹军卫
- 文献传递
- 遗传修饰对细菌视紫红质的优化
- 细菌视紫红质是嗜盐菌细胞膜上一种具有光驱质子泵功能的蛋白质,它是自然界中除叶绿素系统之外的唯一光合系统。自1967年被发现以来,BR以其光循环、质子泵、光致变色三大功能而被认为在太阳能电池、人工视觉、光信息存储、神经网络...
- 王友亮曹军卫
- 关键词：细菌视紫红质重叠PCR光循环
- 文献传递
- bop基因及其上游启动子的克隆
- bop基因是编码盐沼盐杆菌紫膜中细菌视紫红质分子(bacteriorhodopsin,BR) 的一段DNA序列,全长786bp,上游启动子部分约400个bp,其表达产物为前BR蛋白,前 BR蛋白经加工,去掉C端的13个氨...
- 宋景娇王友亮曹军卫
- 文献传递
- 渗透压调节基因和蛋白质及制备方法和应用
- 本发明公开了一种耐盐基因和蛋白质及制备方法和应用，其具有SEQ IDNo.1核苷酸序列的耐盐基因和其具有具有SEQ ID No.2氨基酸序列的蛋白质，本发明制备简便，操作方便，该基因在转基因植物中的应用。
- 曹军卫苗丽霞刘瑞杰王友亮陈明清魏红波
- 文献传递
- 渗透压调节基因和蛋白质及制备方法和应用
- 本发明公开了一种耐盐基因和蛋白质及制备方法和应用，其具有SEQ ID No.1核苷酸序列的耐盐基因和其具有具有SEQ ID No.2氨基酸序列的蛋白质，本发明制备简便，操作方便，该基因在转基因植物中的应用。
- 曹军卫苗丽霞刘瑞杰王友亮陈明清魏红波
- 文献传递
- bop基因及其上游启动子的克隆与表达
- 2005年
- 应用重组PCR的方法,直接从盐沼盐杆菌(Halobactrium salinarium)S9的基因组DNA上扩增到了编码细菌视紫红质(bacteriorhodopsin)的基因———bop基因及其启动子部分(1 196 bp),并将其克隆到表达载体pXLNovR后,在宿主菌株中得到了表达.测序结果表明,扩增得到的片段与NCBI数据库中的bop基因及启动子的序列完全相同,且其表达产物的分子量与野生型BR蛋白的分子量一致,并且在568 nm处表现出BR蛋白特征吸收峰.本方法与其他方法(如逆转录PCR,建立基因文库后从中调取等方法)相比具有操作简便,成功率高的优点.
- 宋景娇王友亮曹军卫
- 关键词：细菌视紫红质重组PCR
