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枯草芽孢杆菌抗脯氨酸结构类似物突变株的筛选及突变株proBA基因的克隆和序列分析被引量：4: 2002年; 利用亚硝基胍对枯草芽孢杆菌 9315 1进行诱变处理 ,获得了耐NaCl浓度达 14 %的突变株 ,同时发现该突变株也是一个抗脯氨酸反馈抑制突变菌株。其胞内自由脯氨酸的含量随着盐浓度的提高显著增加 ,说明其对渗透压的耐受能力与胞内自由脯氨酸的含量紧密相关。利用PCR方法克隆突变株的proBA基因 ,得到一个约 2 3kb的DNA片段 ,序列分析表明该片段含有一完整的proB基因和部分proA基因。与野生菌株的proB基因相比 ,突变株proB基因中有3个碱基发生了改变 ,其中一个碱基的变化 (从起始密码子开始第 781位由T→A)导致了一个氨基酸发生改变 (Ser→Thr) ,另外两个碱基变化为沉默位点突变。将该proB基因转入大肠杆菌脯氨酸营养缺陷型菌株 ,能够与其功能互补。同时对部分proA基因序列分析发现 ,其与proB基因头尾重叠 ,在proA基因起始密码子上游第 14个碱基处有一个类似于SD的序列 ,其所编码的氨基酸序列与枯草芽孢杆菌 16 8的同源性为 77%; 苗丽霞曹军卫刘瑞杰王友亮曾永辉; 关键词：枯草芽孢杆菌克隆

枯草芽孢杆菌突变株proBA基因植物表达载体的构建及转基因拟南芥的耐盐性能初探被引量：2: 2005年; 从枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)抗脯氨酸结构类似物突变株中克隆得到脯氨酸合成途径中的关键酶基因proB(编码γ-谷氨酰胺激酶)和proA(编码谷氨酰胺-γ-半醛脱氢酶),同时设计引物从拟南芥基因组中扩增得到吡咯啉-5-羧酸合成酶B基因(p5csB)的第一个内含子序列,将其分别与proB和proA基因通过PCR拼接后,酶切连接构建得到植物双元表达载体pBI121pro。以LBA4404为介导,采用真空抽滤的方法转化得到转proBA基因拟南芥;第三代的纯合子(T3)通过半巢式PCR的方法验证外源基因已整合到拟南芥基因组中,GUS活性分析表明外源基因在叶片中表达最强,茎部其次,根部最弱;对600mmol.L-1致死浓度NaCl耐受能力的分析表明,转基因拟南芥的平均存活时间(37.8min)明显高于野生型拟南芥(26min)。; 曾永辉陈喜涵苗丽霞曹军卫; 关键词：拟南芥转基因枯草芽孢杆菌耐盐

枯草芽孢杆菌抗脯氨酸反馈抑制耐盐突变株的筛选及proBA基因的克隆和表达: 利用亚硝基胍对枯草芽孢杆菌93151进行诱变处理，获得了一株耐NaCI浓度高达14%的突变株，经测定该突变株是一个抗脯氨酸反馈抑制突变菌株。对该突变菌株细胞内自由脯氨酸含量的分析发现，随着培养基中盐浓度的提高，细胞内自由...; 苗丽霞; 关键词：枯草芽孢杆菌分子克隆

枯草芽孢杆菌耐盐突变株proA全基因克隆及proBA基因渗透压调节功能研究: 利用TaKaRa LA PCR试剂盒扩增枯草芽孢杆菌93151耐盐突变株proA基因的未知下游序列。根据测序结果,设计引物,克隆出发菌株和突变株全长proBA基因。序列分析表明,突变株proA基因有三个碱基发生了突变(从...; 刘瑞杰曹军卫苗丽霞

枯草芽孢杆菌耐盐突变株proA基因克隆及proBA基因渗透压调节功能研究被引量：5: 2004年; 利用TaKaRaLAPCRTM试剂盒扩增枯草芽孢杆菌 931 5 1耐盐突变株proA基因的未知下游序列。根据测序结果 ,设计引物 ,克隆出发菌株和突变株全长proBA基因。将出发菌株和突变株的proBA基因分别转化大肠杆菌JM83(proBA- ) ,均能够与其功能互补。SDS PAGE分析其表达产物 ,有两条分子量分别约为 4 0kD和 4 5kD的新蛋白带出现。测定 4种转化子 (分别含有出发菌株和突变株proB基因的大肠杆菌 1 1 2 5 2转化子及proBA基因的大肠杆菌JM83转化子 )的耐盐能力。发现含有突变株proB或proBA基因转化子的耐盐能力 ,均比相应的含有出发菌株proB或proBA基因的转化子高。另外含有出发菌株和突变株的proBA基因转化子的耐盐能力 ,也均比相应的仅含proB基因的转化子高 ,表明枯草芽孢杆菌的ProA比大肠杆菌的ProA更为有效。测定所有JM83转化子胞内自由脯氨酸 ,发现其含量随盐浓度的上升而提高。; 刘瑞杰曹军卫苗丽霞; 关键词：枯草芽孢杆菌克隆

渗透压调节基因和蛋白质及制备方法和应用: 本发明公开了一种耐盐基因和蛋白质及制备方法和应用，其具有SEQ IDNo.1核苷酸序列的耐盐基因和其具有具有SEQ ID No.2氨基酸序列的蛋白质，本发明制备简便，操作方便，该基因在转基因植物中的应用。; 曹军卫苗丽霞刘瑞杰王友亮陈明清魏红波; 文献传递

渗透压调节基因和蛋白质及制备方法和应用: 本发明公开了一种耐盐基因和蛋白质及制备方法和应用，其具有SEQ ID No.1核苷酸序列的耐盐基因和其具有具有SEQ ID No.2氨基酸序列的蛋白质，本发明制备简便，操作方便，该基因在转基因植物中的应用。; 曹军卫苗丽霞刘瑞杰王友亮陈明清魏红波; 文献传递

枯草芽孢杆菌抗脯氨酸结构类似物突变株的筛选及突变株proBA基因的克隆和序列分析: 利用亚硝基胍(NTG)对枯草芽孢杆菌93151进行诱变处理,获得了耐NaCl浓度达14%的突变株93151-14, 同时发现该突变株也是一个抗脯氨酸反馈抑制突变菌株。它胞内自由脯氨酸的含量随着盐浓度的提高而显著增加,说明...; 苗丽霞曹军卫; 文献传递

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苗丽霞