程中华
- 作品数：7 被引量：35H指数：4
- 供职机构：上海第二医科大学附属仁济医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 甲基转移酶1表达质粒对结肠癌细胞错配修复基因甲基化及其表达的影响被引量：6
- 2004年
- 目的 分析DNA甲基转移酶 1(Dnmt1)基因的真核表达质粒对人结肠癌细胞错配修复基因甲基化及其转录水平和微卫星不稳定性 (MSI)的影响。方法 分别构建含有人的正义Dnmt1(HMT)和反义Dnmt1(THM)的真核表达质粒 ,将其转染入结肠癌SW1116细胞 ,以Western印迹实验分析各组细胞Dnmt1蛋白的表达情况。定量PCR检测hMLH1、hMSH2基因的表达。甲基化特异性PCR分析hMLH1、hMSH2启动子区甲基化情况 ,银染法研究其对微卫星不稳定性的影响。结果 转染正义Dnmt1质粒的细胞hMLH1、hMSH2的启动子甲基化水平升高 ,基因mRNA表达降低。转染反义Dnmt1质粒可使细胞中hMSH2启动子呈非甲基化状态 ,基因表达增强。未发现转染正义和反义Dnmt1基因的SW1116细胞存在MSI的变化。结论 重组Dnmt1表达质粒可通过调控人结肠癌细胞中错配修复基因的甲基化影响基因的表达。
- 陆嵘房静远朱红音陈萦晅程中华李恩灵
- 关键词：基因表达质粒结肠癌甲基化基因成分
- 人胃癌细胞肿瘤相关基因的表达与甲基化调控被引量：3
- 2005年
- 目的:旨在阐明胃癌的发生中多种抑癌基因和癌基因的甲基化情况,以期为进一步深入探索通过改变抑癌基因的甲基化而为胃癌治疗提供新方法. 方法:培养人胃癌细胞株MKN-45和HGC-27两种细胞,在MTT确定去甲基化制剂5-氮脱氧胞苷(5-aza- 2’-deoxycytidine,5-aza-dC)浓度和时间对细胞生长活力没有影响后,分别以2,5,和10μmol/L,浓度分别干预24和72 h,然后提取其DNA和RNA,用RT-PCR的方法检测p16INK4A,p21WAF1,p53,c-Ha-ras和c- myc等多种基因的表达情况;同时以流式细胞仪分析药物干预后的MKN-45和HGC-27的细胞周期变化; DNA分析则通过亚硫酸氢盐修饰和测序和甲基化特异性PCR(MSP)的方法检测p16INK4A基因及c-myc启动子区甲基化的情况. 结果:我们所采用的5-aza-dC的浓度和时间对细胞的生长无显著性影响.5-aza-dC干预前,MKN-45和HGC-27两种胃癌细胞系中均有p16INK4A表达,5-aza- dC干预后在MKN-45和HGC-27两种胃癌细胞系中p16INK4A的表达增强,且不同的胃癌细胞株表达增强最明显时的时间与浓度不同.-p53,p21WAF1,c-myc,c-Ha-ras 等多种基因在干预前后均有表达,且在干预前后无明显变化.在5-aza-dC干预后,HGC-27细胞周期阻滞在G1期,而MKN-45细胞的周期无明显改变.p16INK4A启动子区存在甲基化使得该基因的表达减少,在去甲基化试剂处理后使其表达增强. 结论:人胃癌细胞系MKN-45和HGC-27中,p16INK4A 启动子甲基化是其在表达减弱的主要原因,其去甲基化程度取决于5-aza-dC干预的时间和浓度.
- 杨丽朱红音程中华陆嵘陈萦晅房静远
- 关键词：5-AZA-DCP16^INK4A基因P21^WAF1C-HA-RASHGC-27MKN-45细胞
- 重组DNA甲基化酶1表达质粒对结肠癌细胞相关基因表达的影响被引量：13
- 2004年
- 目的 分析DNA甲基化酶 1(DNMT1)基因的真核表达质粒对人结肠癌细胞肿瘤相关基因的表达影响。方法 分别构建并转染含有人正义和反义DNMT1的真核表达质粒入结肠癌SW 1116细胞 ,PCR和限制性内切酶证实转染结果 ,以Western印迹法分析各组细胞DNMT1蛋白的表达情况。定量PCR检测hMLH1、hMSH2及c myc、p16 INK4A 基因的表达。结果 经G4 18筛选得到稳定转染DNMT1基因的结肠癌细胞系 ,且分别在该转染有正义和反义质粒的细胞系中 ,DNMT1蛋白表达上调和下调。同时发现转染正义DNMT1的细胞中hMLH1、hMSH2及c myc的表达降低 ,而转染反义DNMT1的细胞中hMSH2的表达明显增强。各组细胞p16 INK4A基因的表达差异不明显。
- 陆嵘房静远朱红音陈萦晅程中华李恩灵
- 关键词：结肠癌细胞系肿瘤相关基因WESTERN印迹法
- 自身免疫性肝病的细胞凋亡研究进展
- 2003年
- 细胞凋亡是机体维持内环境稳定的重要机制。在慢性炎症性疾病和自身免疫性疾病中存在细胞凋亡的紊乱。细胞凋亡在人类肝脏的发生、发育及疾病(特别是自身免疫性肝病)发生中均起着重要的作用,本文主要讨论在自身免疫性肝病中细胞凋亡的主要途径及其发挥的作用。
- 程中华房静远
- 关键词：自身免疫性肝病细胞凋亡天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶
- 胃肠系细胞增殖、凋亡与DNA甲基化
- 2002年
- 细胞的增殖与凋亡是一对并存的矛盾,正常状况下双方处于动态平衡。如增殖过度则可能发生肿瘤。调控增殖与凋亡的基因较多,但其表达多受基因甲基化影响。本文即分析与胃肠系细胞增殖或凋亡相关基因的甲基化调控情况。
- 程中华
- 关键词：细胞增殖DNA甲基化肿瘤细胞凋亡
- 人胃癌组织DNA甲基化酶、去甲基化酶与肿瘤相关基因的表达被引量：8
- 2004年
- 目的 探讨胃癌组织中甲基化酶、去甲基化酶基因与肿瘤相关癌基因和抑癌基因的关系。方法 取 2 8例胃癌手术标本的癌区、癌旁、正常组织 ,分别以RT PCR法和定量RT PCR法检测DNA甲基化酶 1(DNMT1)、去甲基化酶mbd2、甲基化结合蛋白MeCP2和 p16 INK4A、c myc等基因的转录水平 ,以相关分析等统计学处理研究各基因表达之间及分别与病理组织学之间的关系。结果 癌组织平均DNMT1和mbd2mRNA分别明显高于和低于正常组织。胃癌组织中c myc的表达增强 ,而MeCP2和 p16 INK4A无明显变化。在正常组织中 ,MeCP2与mbd2 ,p16 INK4A与MeCP2、mbd2 ,c myc与MeCP2的转录水平表现出一定的相关性 ,而当肿瘤发生后仅发现c myc与mbd2的表达呈负相关。以上各基因与肿瘤生物学行为均无相关性。结论 肿瘤相关基因mRNA的表达与甲基化酶DNMT1无关 ,而与甲基结合蛋白有关。
- 程中华房静远杨丽陈萦晅陆嵘陆娟朱红音顾伟齐
- 关键词：胃癌组织DNA甲基化酶肿瘤RT-PCR法
- hMSH2在胃癌组织中的表达及其与DNA甲基化之间的关系被引量：5
- 2004年
- 目的:分析胃癌组织中DNA甲基化酶Dnmt1和hMSH2表达情况的相关性及与肿瘤生物学行为之间的关系. 方法:以real-time RT PCR法检测28例胃癌组织中Dnmt1 和hMSH2 mRNA的表达,亚硫酸氢钠变性后测序分析hMSH2启动子区甲基化状态. 结果:在28例胃癌组织中有9例(32%)DNMT1 mRNA的高表达,10例hMSH2(35.7%)的低表达,在hMSH2低表达的胃癌组织中有2例存在DNA启动子区的高甲基化.两个基因mRNA的表达与胃癌生物学行为包括肿瘤大小、淋巴结转移、组织学类型均无明显相关性. 结论:胃癌组织中存在Dnmtl的高表达,DNA甲基化在一定程度上参与了hMSH2基因表达的缺失.
- 程中华房静远杨丽陈萦陆嵘朱红音顾伟齐陈晓宇彭延申施尧
- 关键词：HMSH2胃癌癌组织DNA甲基化
