蔡雨函
- 作品数：24 被引量：93H指数：6
- 供职机构：四川农业大学更多>>
- 发文基金：四川省科技支撑计划长江学者和创新团队发展计划教育部“新世纪优秀人才支持计划”更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生石油与天然气工程更多>>
- 猪NF-κB p65/p50亚基的原核表达及其对猪繁殖与呼吸综合征病毒增殖的影响被引量：3
- 2013年
- 为了研究经原核表达的猪细胞核转录因子NF-κB p65/p50融合蛋白对猪繁殖与呼吸综合病毒(PRRSV)体外增殖影响,本文采用RT-PCR技术扩增出编码成熟p50区和p65开放阅读框(ORF),将其克隆至pET21a(+)中,转化至Rosetta感受态细胞,经异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导表达,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)和蛋白免疫印迹法(Western-blot)对表达产物进行鉴定;纯化复性后添加到DMEM细胞维持液中,观察p65/p50对Marc145细胞毒性,确定最佳使用浓度;探讨最佳浓度的p65/p50对PRRSV体外感染增殖活力的影响,通过实时荧光定量PCR方法研究PRRSV感染时相,绘制PRRSV增殖曲线。成功构建了大量以包涵体形式表达Mr均约为70kD的p65/p50融合蛋白的p65/p50-pET21a(+)原核表达载体;Western-blot显示p50和p65重组蛋白可分别与兔抗人p50多克隆血清、兔抗人p65纯化抗体反应。确定p65/p50最佳添加浓度为0.4μg/mL。通过实时荧光定量PCR技术研究PRRSV感染时相,结果表明NF-κB p65/p50可促进PRRSV感染Marc-145CPE出现及病毒早期增殖;但CPE出现后,病毒增殖受到抑制,病毒滴度水平显著降低(P<0.05)。该结果为进一步研究PRRS的发病机理及治疗策略提供了新思路。
- 王潇娣朱玲蔡雨函黄仆徐志文
- 关键词：核转录因子-ΚB猪繁殖与呼吸综合征病毒病毒复制
- 亲环蛋白A对日本脑炎病毒体外复制能力的影响
- 2015年
- 为研究亲环蛋白A(CyPA)对日本脑炎病毒(JEV)体外增殖能力的影响,构建了真核重组质粒pcDNA3.1-CyPA,并将其转染至BHK21细胞内,接种JEV后于不同时间点收集细胞上清液,采用荧光定量RT-PCR检测各时间点的病毒含量,绘制体外增殖曲线;同时检测不同质量浓度的CyPA原核表达蛋白对JEV复制的影响。结果显示,加入CyPA原核表达蛋白组的上清中病毒含量均显著高于对照组。结果表明,CyPA可以促进JEV的体外复制,为进一步揭示CyPA在JEV感染和致病机制中的作用及JEV抗病毒药物的研发或疫苗的大量生产奠定了一定的理论基础。
- 蔡雨函韩燕刘红亮刘小琬朱玲徐志文
- 关键词：日本脑炎病毒荧光定量
- 2011—2012年四川省猪流行性腹泻病毒的遗传变异分析被引量：13
- 2015年
- 为分析猪流行性腹泻病毒(PEDV)的遗传变异情况,本试验从四川省11个市19个不同地区发生仔猪腹泻疾病的猪场采集的病料中分别扩增到8个PEDV(SC-8)ORF3和部分S基因序列,将其进行比对和遗传演化分析。结果显示,SC-8的ORF3基因包含674~676个碱基,编码224个氨基酸,与GenBank中登录的国内外地方流行株的核苷酸序列同源性为95.7%~99.9%,氨基酸序列同源性为98.2%~100%,与标准毒株CV777相比,核苷酸序列和氨基酸序列除存在点突变现象外,部分序列还存在核苷酸的插入和缺失性突变;部分S基因扩增长度为981bp,编码327个氨基酸,与国内外参考毒株的核苷酸序列同源性为93.2%~99.5%,氨基酸序列同源性为93.5%~100%,与标准毒株CV777相比,四川-绵阳(SCMY)分离株在92~93nt之间存在1个核苷酸插入,在2~29aa之间也有18个氨基酸发生了突变;系统进化树分析表明,8株PEDV ORF3基因均与野毒株亲缘关系较近,而与弱毒疫苗株亲缘关系较远;SC-8的部分S基因均与国内地方流行毒株亲缘关系较近,而与国外分离株的亲缘关系较远。
- 孙贤刚唐蕊涵蔡雨函周远成徐志文朱玲
- 关键词：猪流行性腹泻病毒S基因ORF3基因
- PRRSV体外感染Marc-145细胞对NF-κB p65/p50转录时相及核易位的影响
- 2013年
- 为了解猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染对细胞核转录因子-κB(NF-κB,p65/p50)mRNA转录时相及核易位的影响,探讨PRRSV感染导致的免疫抑制与NF-κB的活化异常是否有一定的相关性,运用实时荧光定量PCR技术对PRRSV感染Marc-145细胞不同时期NF-κB p50、p65mRNA的转录水平变化进行定量分析,并提取不同感染时期Marc-145细胞核蛋白,利用免疫印迹法检测细胞核内具有活性的p50、p65水平变化。荧光定量结果表明,Marc-145细胞感染PRRSV后第8～12小时,p50、p65转录水平急剧下调,第12～120小时p50、p65mRNA含量一直维持在较低水平,与接毒前及对照组同时期的转录水平相比,差异显著或极显著(P<0.05或P<0.01)。免疫印迹结果表明,Marc-145细胞感染PRRSV后第12～96小时,细胞核内均未检测到p50的表达;感染后第12小时,细胞核内p65表达下调,第48～96小时未检测到p65的表达。可见,PRRSV体外感染Marc-145细胞能够抑制NF-κB p65/p50mRNA的转录及核易位。以上结果支持PRRSV感染早期无力的先天性免疫应答可能与NF-κB活化水平的低下有关的观点,为进一步研究PRRS的感染机制及NF-κB的功能提供新的思路和依据。
- 王潇娣朱玲周远成陈蕾李碧蔡雨函徐志文
- 关键词：转录时相
- 猪博卡病毒双重PCR检测方法的建立及其应用被引量：13
- 2013年
- 为了建立快速检测猪博卡病毒(PBoV)所有基因型的诊断方法,根据GenBank中公布的PBoV的不同基因型序列,对其进行同源性分析,分别设计出扩增PBoV1/PBoV2及PBoV3/PBoV4/PBoV5的引物,在分别建立单一PCR检测方法的基础上,通过对两组引物的比例、退火温度等条件的优化,首次建立了同时检测PBoV1/PBoV2和PBoV3/PBoV4/PBoV5的双重PCR方法。使用该方法对来自四川省部分猪场的18份腹泻仔猪病料进行检测。结果显示,建立的双重PCR特异性强,敏感性高,重复性好;四川省存在猪博卡病毒感染,样品中有10份为猪博卡病毒阳性,其中7份为猪博卡病毒3/4/5型,2份为猪博卡病毒1/2型,1份为猪博卡病毒1/2型及3/4/5型共感染。结果表明,建立的双重PCR能成功检测出猪博卡病毒所有基因型,并能区分PBoV1/PBoV2和PBoV3/PBoV4/PBoV5,为猪博卡病毒的诊断和预防提供了技术支持。
- 蔡雨函朱玲周远成杨文宇徐志文
- 猪博卡病毒双重PCR检测方法的建立及其应用
- 引言猪博卡病毒(Porcine Bocavirus,PBoV)是近几年从猪群内鉴定的一种新的细小病毒,在健康猪群和表现呼吸道及腹泻症状的猪群中均有较高的阳性检出率,并存在于野猪中。目前已发现PBoV有5个基因型,但至今还...
- 蔡雨函周远成朱玲刘红亮徐志文
- 猪环曲病毒套式RT-PCR检测方法的建立及应用被引量：3
- 2014年
- 根据GenBank中猪环曲病毒N基因设计合成2对特异性扩增引物,成功建立了猪环曲病毒的套式RT-PCR快速检测方法。为验证本方法的特异性,以猪伪狂犬病病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、A群猪轮状病毒、猪瘟病毒、猪嵴病毒、沙门菌及大肠杆菌作为阴性对照,结果显示只有在猪环曲病毒的核酸作为模板时才能扩增出预期的258bp和198bp 2条片段。敏感性试验显示,该方法能检测到的最低核酸含量为1pg。结果表明,建立的RT-PCR方法特异性强、灵敏度高,可用于猪环曲病毒的临床检测和流行病学调查。利用本方法对采集自四川省部分地区的50份临床样品进行检测,猪环曲病毒阳性率为30%。
- 王赟周璐周远成蔡雨函朱玲徐志文郭万柱
- 关键词：套式RT-PCR
- PEDV、TGEV、RV和PToV多重RT-PCR检测方法的建立及初步应用
- 引言自2011年以来猪腹泻病广泛流行于我国各地,患病仔猪发病率、死亡率均可高达80%以上,给养猪业造成了严重经济损失。猪传染性胃肠炎(Transmissible Gastroenteritis,TGE),猪流行性腹泻(P...
- 刘小琬周远成杨凡方和俊郭博蔡雨函徐志文
- 文献传递
- 乙型脑炎病毒的分离鉴定及其在microRNA水平上与PK-15细胞的相互作用研究
- 流行性乙型脑炎病毒(JEV)是一种危害严重的人畜共患病病原，属于黄病毒科黄病毒属。该病毒严重威胁人类健康，感染人后入侵中枢神经系统，造成死亡或者留下严重的神经系统后遗症。同时它可以感染猪群，造成种猪繁殖障碍，严重制约养猪...
- 蔡雨函
- 关键词：PK-15细胞病毒复制
- 文献传递
- 一例多种病毒混合感染引起仔猪腹泻的实验室诊断被引量：1
- 2013年
- 2012年12月,四川雅安某猪场哺乳仔猪发生严重腹泻,表现为精神不佳,食欲下降,呕吐,水样腹泻,病情严重患猪迅速脱水死亡,发病率约75%,死亡率达80%以上。剖检可见胃黏膜轻度出血,胃内有未消化完的凝乳块;小肠肠壁变薄,胀气,呈半透明状,肠系膜淋巴结肿胀;其它组织器官无明显病变。该场发病后使用抗生素治疗无效。通过流行病学调查和临床症状可初步判定为病毒性腹泻,
- 蔡雨函朱玲
- 关键词：病毒性腹泻仔猪腹泻肠系膜淋巴结流行病学调查哺乳仔猪食欲下降
