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人工中枢免疫耐受缺损模型的构建: 研究背景:中枢免疫耐受对于免疫系统识别自身和非自身,从而清除外来异物,维持对自身成分的不反应性是必不可少的。研究表明,NF-κB信号传导通路对于胸腺髓质微细构造的形成和维持特别是诱导胸腺髓质上皮细胞的分化和成熟,进而控制...; 秦俊文谢琪璇秋山泰身井上纯一郎黄卉卉董少男万颖张坤; 关键词：TRAF6 慢病毒 SHRNA

人ZP3的N端肽的体外表达: 2013年; 目的：为了深入研究透明带的功能，体外表达人ZP3的N 端肽段。方法：通过PCR克隆人ZP3的第77～703的DNA序列，利用该片段构建hZP3的N端肽的原核表达载体，转化大肠杆菌Rosetta （DE3）进行体外表达，利用分离的表达产物免疫小鼠，通过ELISA检测抗体反应，利用Western blotting和免疫组化检测抗血清与重组透明带蛋白和人卵巢天然的透明带蛋白的特异反应。结果：Western blotting结果显示，获得了约27 ku的重组蛋白，用该蛋白免疫小鼠获得了抗体滴度近20000的抗血清，该抗体能与重组透明带蛋白和人卵巢天然的透明带蛋白的特异反应。结论：成功表达人ZP3的N端重组肽，表达产物具有免疫原性。; 曹佐武徐放谢琪璇乜春城姚冠颖; 关键词：透明带抗原性体外表达免疫组化

酶联免疫吸附法测定血清抗精子抗体: 1990年; 将酶联免疫吸附技术用于人血清抗精子抗体的检测,126例,临床检查结果所得,平均批内变异系数为6.5%,平均批间变异系数为7.1%,证实该法稳定性、重复性良好。44例正常供血者标本得正常值为 O.D(?)0.355。将其与目前临床上应用较广的精子浅盘凝集试验(TAT)结果比较,两者符合率达87.3%。; 张江兰谢琪璇张春雪; 关键词：酶联免疫吸附法抗精子抗体

酵母菌表达系统中表达人卵透明带ZP3蛋白的方法: 本发明公开了一种酵母菌表达系统中表达人卵透明带ZP3蛋白的方法，载体质粒为pPIC9k，目的蛋白选用了23～408位氨基酸，串联组氨酸序列片段连在目的蛋白的N末端，导入前采用SacI酶对重组质粒进行线性化。表达生成的ZP...; 谢琪璇潘善培; 文献传递

壳聚糖-卵透明带DNA纳米微囊的制备及其体外表达被引量：4: 2004年; 　目的:发展壳聚糖-卵透明带口服DNA粘膜免疫避孕疫苗.方法:首先利用基因工程技术构建含卵透明带特异抗原pZP3αDNA的真核质粒表达载体pVAX1-pZP3α,然后用壳聚糖C390包被pVAX1-pZP3α重组质粒制备免疫微囊,测定免疫微囊对质粒DNA的包裹率,用原子力显微镜(AFM)观察壳聚糖-DNA微囊的形态结构,并体外转染HeLa细胞,用间接免疫荧光法(IIF)检测pZP3α的瞬时表达.结果:pZP3αDNA正确插入到载体pVAX1中并与壳聚糖C390形成纳米免疫微囊,对重组质粒pVAX1-pZP3α的包裹率达90%以上.AFM成像技术显示这些微囊的直径为100nm到300nm不等,平均为224 6nm,形状为球形、椭圆形等.体外转染HeLa细胞用IIF法检测到了抗原pZP3α在细胞内的表达.结论:壳聚糖-卵透明带口服DNA纳米免疫微囊制备成功,为进一步发展更安全、方便、有效的卵透明带DNA避孕疫苗打下了基础.; 孙彩军潘善培王彬谢琪璇肖銮娟唐键蔡继业; 关键词：卵透明带 DNA疫苗壳聚糖纳米微囊免疫避孕

抑制小鼠TRAF6基因表达的shRNA及其应用: 本发明公开了一种抑制小鼠TRAF6基因表达的shRNA及其应用。本发明所述抑制小鼠TRAF6基因表达的shRNA的脱氧核糖核酸序列为GAATCACTTGGCACGACACTT。本发明先设计含有抑制小鼠TRAF6基因的sh...; 秦俊文谢琪璇秋山泰身井上纯一郎; 文献传递

利用H_2O_2提高GS115rhZP3培养中的溶氧和目的蛋白产量被引量：2: 2004年; 目的:提高毕赤酵母摇瓶培养中的溶氧,从而提高目的蛋白的表达量.方法:在rhZP3工程菌培养过程分别加入不同浓度的H2O2,甲醇诱导培养后,取培养液上清进行SDS-PAGE电泳和Westernblot,并与不加H2O2的对照组比较,分析H2O2对重组人卵透明带ZP3蛋白(rhZP3)在毕赤酵母中表达量的影响.结果:H2O2可提高培养基的溶氧量.当H2O2浓度为5mmol/L时,目的蛋白的表达量最高.结论:在rhZP3毕赤酵母工程菌摇瓶培养中,加入H2O2可提高rhZP3的表达量.; 肖銮娟谢琪璇潘善培唐键; 关键词：过氧化氢毕赤酵母溶氧

蛋白质快速定量法及其在rhZP3纯化中的应用被引量：1: 2005年; 目的　建立层析过程中洗脱峰蛋白质含量的快速定量法。方法　利用蛋白质的紫外吸收原理和层析软件的积分功能,即A2 80 和峰面积计算层析过程中洗脱峰蛋白质含量。结果　洗脱峰大小与蛋白质含量呈线性关系,洗脱峰蛋白质含量可用方程X =Y A进行估算,X为待测蛋白含量(mg) ,Y为洗脱峰面积(mAU×ml) ,A为1g L待测蛋白在层析系统的紫外吸收值(mAU)。将其应用于重组人卵透明带ZP3蛋白(rhZP3 )的纯化,用该方程估算的纯化蛋白含量与用Low ry法测定结果相似。结论　该法简便、快速、重复性好,具有一定实用价值。; 谢琪璇郑育声彭雅林肖銮娟余巍潘善培; 关键词：层析蛋白纯化

小鼠TRAF6特异性shRNA慢病毒质粒的构建及活性: 2011年; 目的:构建小鼠TRAF6基因特异性shRNA慢病毒质粒。方法:设计、合成小鼠TRAF6基因特异性shRNA核苷酸,将其链接入pENTR/U6载体,基因测序;通过LR克隆酶将pENTR/U6中的TRAF6特异性shRNA核苷酸插入CS-RfA-EG慢病毒载体,KpnⅠ限制酶切分析;通过慢病毒将TRAF6基因特异性shRNA慢病毒质粒导入MEF13细胞中,FACS分析质粒导入率,同时利用Western blot技术检测MEF13细胞中TRAF6的表达以及磷酸化IκBα的表达。以LacZ基因特异性shRNA慢病毒质粒为对照。结果:构建的小鼠TRAF6基因特异性shRNA慢病毒质粒与设计相符;MEF13细胞中慢病毒质粒的导入率为95%以上;与对照组比较,TRAF6基因特异性shRNA可长期、完全抑制MEF13细胞中TRAF6的表达及TRAF6介导的IκBα的磷酸化。结论:成功构建小鼠TRAF6基因特异性shRNA慢病毒质粒。; 谢琪璇罗峰秋山泰身井上纯一郎秦俊文; 关键词：TRAF6 SHRNA RNAI

杆状病毒表达的hZP3 B细胞表位嵌合肽的免疫活性研究: 2003年; 为研究杆状病毒系统表达的人透明带ZP3的B细胞表位嵌合肽(BCP)的免疫原性及其抗血清与人透明带的免疫交叉反应,重组z3bcp病毒用于感染sf9细胞以表达BCP。Tricine＿SDS＿PAGE用于分离感染液中的小相对分子质量表达产物,表达产物用于免疫小鼠制备抗血清,免疫细胞化学试验用于检验抗血清与人卵泡透明带的交叉反应性。结果显示,sf9细胞被z3bcp病毒感染后,培养液中分离出一条相对分子质量约为6000的特异带,而正常sf9细胞中没有等同的带。免疫细胞化学试验结果显示,该特异肽的抗血清能与人透明带特异结合,表明人透明带BCP嵌合肽在杆状病毒系统中成功表达,表达产物具有抗原性,抗血清能与人透明带特异结合。; 曹佐武杨林郑辉刘穗玲肖銮娟谢琪璇王自能; 关键词：杆状病毒

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