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GM-CSF/Fc<,γ2'->融合蛋白载体的构建和表达: 该研究成功地对融合蛋白的补体结合位点进行了突变;对该融合蛋白在二氢叶酸还原酶缺陷型细胞CHO-dhfr中进行了高效表达尝试;该融合蛋白具有GM-CSF的生物活性;并对如何进一步在真核细胞中高效表达融合蛋白进行了探讨.; 宁金鹰; 关键词：粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子细胞毒作用融合蛋白转染; 文献传递

利用PCR技术构建GM-CSF/Fc_(γ2)^-融合蛋白真核表达载体: 2001年; 目的　对融合基因GM -CSF Fcγ2 进行定点突变 ,去除其补体结合位点 ,构建GM -CSF Fcγ2-融合蛋白真核表达载体。方法　通过设计突变引物 ,利用PCR定点突变技术扩增融合基因GM -CSF Fcγ2-。并通过T -A克隆策略 ,把突变后的融合基因GM -CSF Fcγ2-重组到真核表达载体pRc CMV2中 ,构建真核表达质粒pRc CMV2 GM -CSF Fcγ2-并经过酶切和测序确证。结果　成功对融合基因GM -CSF Fcγ2-进行了突变 ,构建了真核表达载体pRc CMV2 GM -CSF Fcγ2-。; 宁金鹰王尊荣许佐良; 关键词：融合蛋白定点突变聚合酶链反应

利用CHO(dhfr^-)细胞高效表达GM-CSFFc_(γ2)^-融合蛋白被引量：1: 2001年; 目的　利用二氢叶酸还原酶缺陷型细胞CHO(dhfr - )高效表达融合蛋白GM -CSF Fcγ2-。方法　利用脂质体基因转染技术 ,把含有融合基因GM -CSF Fcγ2-的真核表达质粒pRc CMV2 GM -CSF Fcγ2-和含有二氢叶酸还原酶基因的真核表达质粒pSV2 -dhfr共转染二氢叶酸还原酶缺陷型细胞CHO(dhfr - )中。用G4 18和撤除H、T(次黄嘌呤、胸腺嘧啶核苷 )双筛选 ,获得dhfr +neo +双表型阳性的细胞克隆。取表达产量最高的克隆进行亚克隆 ,并行MTX加压筛选 ,以提高表达量。用RT -PCR、ELISA和Westernblot对表达产物进行鉴定并行MTT法检测表达蛋白的生物学活性。结果　成功地表达出了具有GM -CSF生物学活性的融合蛋白GM -CSF Fcγ2-。结论　该方法可行 ,表达量达到 15μg ml。; 宁金鹰王尊荣许佐良; 关键词：融合蛋白基因表达

支原体感染与肿瘤被引量：8: 2004年; 支原体是广泛存在于自然界的条件致病微生物,可能是唯一可以与真核生物共生,并可与哺乳动物细胞长期相互作用的原核生物。多种不同的肿瘤组织中可检测到支原体的存在,某些支原体的持续感染可导致哺乳动物细胞的转化、上调癌基因的表达并引起肿瘤细胞生物学行为的改变,提示支原体感染与肿瘤的发生有潜在的相关性。; 宁金鹰寿成超; 关键词：支原体感染肿瘤原核生物癌基因基因表达

猪鼻支原体蛋白P37诱导人外周血单核细胞释放肿瘤坏死因子被引量：4: 2003年; 胃癌组织中存在较高的猪鼻支原体感染率,提示猪鼻支原体感染同胃癌的发生可能存在某种相关性.由于肿瘤坏死因子(TNF-α)在微生物感染导致肿瘤发生中起重要作用,而P37蛋白是猪鼻支原体的主要免疫原,因此,探讨P37能否诱导TNF-α的表达与释放,对阐明猪鼻支原体在胃癌发生中的可能分子机制有重要意义,运用PCR技术克隆了p37基因,在对其编码序列中7个色氨酸密码子TGA进行TGG定点突变后,利用PGEX-4T-1表达载体在大肠杆菌中成功表达了P37蛋白,并经Western blot得到证实,在此基础上,利用RT-PCR及TNF-α敏感细胞株L929的细胞毒性实验,发现P37确能诱导外周血单核细胞表达和释放TNF-α,抗P37单克隆抗体PD4对该诱导活性有明显的中和作用,结果提示,猪鼻支原体通过P37诱导TNF-α产生在猪鼻支原体感染所致相关疾病中可能起重要作用,值得进一步研究.; 宁金鹰黄甦吴健孟麟寿成超; 关键词：人外周血单核细胞肿瘤坏死因子 TNF-Α 胃癌

重症肌无力患者外周血乙酰胆碱特异性单个核细胞IFN-γ和TGF-β的变化被引量：3: 2003年; 目的　研究重症肌无力 (myastheniagravis,MG)外周血AChR特异性单个核细胞IFN -γ和TGF -β的分泌能力 ,探讨细胞因子IFN -γ和TGF -β在MG发病机制中的作用。方法　应用体外细胞培养和ELISA方法检测MG患者外周血单个核细胞 (PBMNC)经AChR刺激后产生IFN -γ和TGF -β的水平。结果　急性期MG患者IFN -γ和TGF -β的诱生水平高于正常对照组 (P <0 0 1 ) ,AChRAb阳性组MG患者IFN -γ的诱生水平高于AChRAb阴性组 (P <0 0 1 )。; 王尊荣宁金鹰孙兆林; 关键词：外周血乙酰胆碱特异性单个核细胞 IFN-Γ TGF-Β

胃癌中猪鼻支原体的感染及其促肿瘤侵袭的分子机制研究: 利用单克隆抗体PD4免疫组化检测发现胃癌组织中存在较高的猪鼻支原体感染率,提示支原体感染和胃癌发生可能存在一定相关性.但考虑到组化检测方法的局限性及支原体种类的复杂性,该文作者利用巢式PCR和原位杂交方法对56例新鲜胃癌...; 宁金鹰; 关键词：胃癌肿瘤侵袭 TNF-Α

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宁金鹰