李树清
- 作品数：74 被引量：247H指数：10
- 供职机构：上海出入境检验检疫局更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目上海出入境检验检疫局科研基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学政治法律更多>>
- 复合PCR鉴定胸膜肺炎放线杆菌方法的建立及初步应用被引量：5
- 2005年
- 根据胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,App)apxIVA毒素基因序列和16SrRNA序列分别设计了一对特异性引物P1P4和一对通用引物S7S10,建立了检测App全部15个血清型的复合PCR方法。对App的15个血清型国际参考株和国内的11个App菌株进行检测,都能得到363bp和692bp的两个扩增片段。而放线杆菌等13株参考菌株只能得到692bp的扩增片段。该方法能将15个血清型的App菌株鉴定到种。检测的灵敏度达9pgDNA1300CFU。用建立的方法检测临床分离的302株可疑菌株,阳性4株,与其它鉴定方法相符。结果表明复合PCR可用于App菌株的鉴定。
- 李树清易建平陈志飞王巧全周筱华罗满林方怡陈敏夏谦
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌复合PCR
- 赤羽病 中山病和茨城病流行病学调查初报被引量：11
- 2002年
- 应用引自日本的赤羽病病毒OBE-1株,中山病病毒K47株和茨城病病毒BK13株以及相应的标准阳性血清,建立了这三种病的病毒微量中和试验和琼脂免疫扩散试验诊断方法。应用此方法先后对我国7个省市的牛场进行这三种病的检疫。通过血清检疫、现场临床症状观察和疫病流行规律调查,证实我国目前这三种病都在流行,应引起各方面的重视。
- 刘焕章昊东来胡守萍辛九庆李树清崔尚金
- 关键词：赤羽病茨城病流行病学
- 四重荧光qRT-PCR检测猪腹泻相关病毒方法的建立被引量：3
- 2018年
- 为建立同时检测猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪delta冠状病毒(Porcinedeltacoronavirus,PDCoV)和猪捷申病毒(Porcine teschovirus,PTV)的四重荧光qRT-PCR检测方法,本研究以PEDV的N基因、TGEV的S基因、PDCoV的M基因和PTV基因组5'非编码基因为检测对象,建立同时检测4种病毒的荧光RT-PCR方法。结果显示,该方法可以特异扩增4种病毒的基因,不能扩增猪呼吸道冠状病毒、伪狂犬病毒、猪瘟病毒、口蹄疫病毒、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪圆环病毒2型的基因;PEDV、TGEV、PDCoV和PTV的最低核酸检出量分别为141、68、8和11拷贝数;对100份送检样品进行检测,其中PEDV、TGEV、PDCoV和PTV感染检出率分别为10%、6%、2%和55%。结果表明本研究建立的检测方法具有良好的特异性和敏感性,而且操作快速简便,可用于猪腹泻疫病的临床诊断和流行病学调查。
- 包雯骏张强李树清林颖峥李健严亚贤
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒猪捷申病毒
- 横川后殖吸虫与扇棘单睾吸虫双重PCR鉴别方法的建立被引量：1
- 2015年
- 目的建立一种能快速鉴定横川后殖吸虫(Metagonimus yokogawai)和扇棘单睾吸虫(Haplorchis taichui)的双重PCR方法。方法从Gen Bank中获取横川后殖吸虫和扇棘单睾吸虫以及与其同源性较高的虫种的核糖体DNA第一内转录间隔区(ITS1)序列,应用Primer premier 5.0软件设计2对特异性引物,并优化PCR反应体系和反应条件,建立双重PCR法。将横川后殖吸虫和扇棘单睾吸虫与17个相关虫种一起进行PCR扩增,检测方法的特异性。横川后殖吸虫和扇棘单睾吸虫的ITS1扩增产物经p MD19-T载体进行TA克隆获得质粒,并将质粒进行梯度稀释,检测其敏感性。应用新建的双重PCR法鉴定从47副猫内脏和40副犬内脏中收集的吸虫,检测该方法的准确性和实用性。结果新建的双重PCR法能扩增出横川后殖吸虫和扇棘单睾吸虫的目的片段,大小分别为648 bp和279 bp,不与钩棘单睾吸虫、华支睾吸虫、心形咽口吸虫、次睾属吸虫囊蚴、外睾属吸虫囊蚴、藐小棘隙吸虫、抱茎棘隙吸虫、弗氏棘口吸虫、似锥低颈吸虫、全冠属吸虫、重盘属吸虫、异尖属线虫、东方次睾吸虫、卫氏并殖吸虫、瓦氏瓦生吸虫、背孔属吸虫和宫脂属线虫的DNA发生交叉扩增,具有较好的特异性。敏感性试验表明,应用该双重PCR法,2类吸虫DNA的最低检测值分别为1.49×10-1pg和1.14×10-1pg。对来自猫内脏和犬内脏的吸虫检测表明,该方法能够区分横川后殖吸虫和扇棘单睾吸虫,并且不与猫、狗中其他的吸虫DNA发生交叉扩增。结论本研究所建立的双重PCR法可用于快速鉴定横川后殖吸虫和扇棘单睾吸虫。
- 梅雪芳李树清康羊群石云良黄腾飞陈志飞黄维义
- 关键词：双重PCR
- 浅谈旋毛虫病
- 旋毛虫病是由毛形科的旋毛虫成虫和幼虫引起的人畜共患寄生虫病。其成虫寄生于宿主的肠内(肠旋毛虫),幼虫寄生于各部(横纹肌)肌肉(肌旋毛虫),且形成包囊,当人和动物食用生的或未烧熟的旋毛虫病畜肉后,即可感染旋毛虫病。包括人类...
- 杜军李树清
- 文献传递
- 钩棘单睾吸虫和扇棘单睾吸虫ITS2序列测定及其种系发育分析被引量：2
- 2015年
- 本试验将从犬猫肠道中分离的钩棘单睾吸虫和扇棘单睾吸虫用盐酸卡红染色后观察其形态学特征;PCR扩增其ITS2基因序列并测序,并将测序结果与GenBank同属异形科的多棘单睾吸虫和横川后殖吸虫序列进行比对;应用Mega 6.05软件采用邻位相连法构建种系发育树进行分析。盐酸卡红染色后显示,钩棘单睾吸虫和扇棘单睾吸虫各形态学特征符合经典的分类学描述。PCR测序后获得钩棘单睾吸虫和扇棘单睾吸虫ITS2序列长度分别为295和297bp,G＋C含量分别为49.5%（146/295）和54.2%（161/297）。提交至GenBank后获得登录号分别为钩棘单睾吸虫KJ137221-KJ137223,KP165437-KP165439;扇棘单睾吸虫KP165440。序列比对结果显示,钩棘单睾吸虫和扇棘单睾吸虫种内差异性为0,4种异形吸虫种间差异为15.2%-28.9%。基于ITS2序列建立的种系发育树显示钩棘单睾吸虫和扇棘单睾吸虫构成自展值为78%的拓扑分支。
- 梅雪芳李树清胡长红黄腾飞陈志飞黄维义
- 犬猫3种冠状病毒基因克隆的构建与芯片检测技术被引量：6
- 2008年
- 蔗糖密度梯度离心纯化浓缩犬冠状病毒(CCV)、猫冠状病毒(FCV)和猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)的细胞培养物,分别设计7、17、11对引物,对病毒RNA进行反转录和PCR扩增,回收PCR产物连接pGEM-T载体并转化大肠杆菌TGI,构建35个基因片段的克隆。煮沸裂解法制备质粒DNA,回收PCR扩增产物,点制冠状病毒基因芯片。抽提病毒总RNA,利用Cy3-dCTP随机渗入反转录PCR标记,与芯片进行杂交检测,淘汰交叉的克隆片段,每种病毒只选择其4对引物克隆的基因片段。将特异克隆扩增片段重新点制基因芯片,与病毒样品PCR扩增产物杂交,未发现交叉现象。基因芯片检测比传统PCR敏感1000倍,可有效应用于3种病毒的检测与区分。
- 李健熊炜陈沁王权王巧全张建武胡永强李树清
- 关键词：冠状病毒克隆基因芯片杂交
- 荧光定量RT-PCR鉴别IBDV超强毒株与经典疫苗毒株被引量：3
- 2009年
- 鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)超强毒株的出现给该病的防控带来了新的困难,有效鉴别IBDV超强毒株对IBD的防控有着积极意义。根据IBDV VP4基因的保守序列,设计了一对通用引物RPa/RPb,特异性扩增IBDV VP4基因720bp的目的片段。根据超强毒株和经典毒株VP4基因序列的差异,分别合成了FAM标记的超强毒荧光探针和JOE标记的经典毒荧光探针,建立了实时荧光RT-PCR鉴别IBDV超强毒株与经典疫苗毒株的方法。检测超强毒和经典毒的敏感性分别可达420和320个拷贝数。建立的实时荧光RT-PCR方法敏感性高、特异性强,可用于临床样品中IBDV超强毒和经典毒的鉴别诊断。
- 汪振兴李树清孙建和
- 关键词：荧光探针
- 畜禽4种重要传染病快速诊断新技术和标准的研究与应用
- 李树清赵俊龙孙建和王巧全王艳张强周锐陈志飞严亚贤李健何国声王贵强杜凯杜军汪振兴
- 猪传染性胸膜肺炎是由胸膜肺炎放线杆菌( APP)引起的一种高度传染性、致死性呼吸道疾病，曾给世界各国养猪业带来了巨大的经济损失，是中国进口种猪必检的疫病。附红细胞体病是一种人畜共患传染病，其危害越来越受到重视。牛无浆体病...
- 关键词：
- 关键词：畜禽传染病猪传染性胸膜肺炎附红细胞体病鸡传染性法氏囊病
- 贝类产品中诺沃克病毒的实时荧光RT-PCR检测方法研究被引量：14
- 2004年
- 诺沃克病毒是一种分布很广泛的肠道腹泻病毒 ,主要存在于牡蛎、文蛤等贝类中。本研究建立了从贝类中提取诺沃克病毒RNA的方法以及进行实时荧光RT -PCR检测的方法。
- 潘良文张舒亚李晓虹严罗美李树清王巧全
- 关键词：诺沃克病毒
