沈秋瑾
- 作品数：11 被引量：147H指数：4
- 供职机构：上海市肿瘤研究所更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人源DKK1真核悬浮分泌表达系统的建立及其特异性抗体的制备和鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的:利用哺乳动物细胞悬浮培养表达系统分泌表达人源Dickkopf-1(DKK1)蛋白,纯化蛋白并制备特异性抗体。方法:构建DKK1真核表达载体pCMVcStrep-DKK1,并借助脂质体将载体瞬时转染入Free-Style293-F细胞(无血清培养),ELISA和蛋白印迹法检测DKK1蛋白表达量。利用亲和层析法纯化DKK1蛋白,Wnt信号通路荧光素酶报告系统检测其生理活性。以纯化的DKK1蛋白免疫BALB/c小鼠获得相应抗体,并初步鉴定其抗原特异性。结果:DKK1蛋白分泌表达在Free-Style293-F细胞培养液中,蛋白浓度在转染后第5天达最高(20mg/L)。所纯化的DKK1蛋白能够抑制Wnt3a蛋白诱导的报告基因的表达。抗DKK1小鼠抗体能特异性识别细胞内源性DKK1蛋白。结论:建立了在哺乳动物细胞悬浮培养系统中高效分泌表达人源DKK1重组蛋白的表达系统,并获得相应的特异性抗体,为其下一步结构与功能研究及在肿瘤中的应用奠定了实验基础。
- 沈秋瑾孔娟邓云蒋华胡素文孔洁倪涛游海燕李宗海屠红张志刚覃文新
- 关键词：细胞培养技术哺乳动物细胞
- 血清DKK1在制备早期肝细胞癌或小肝细胞癌的诊断试剂中的用途
- 本发明涉及血清DKK1在制备早期肝细胞癌或小肝细胞癌的诊断试剂中的用途。本发明人通过分析大量的肝细胞癌样本，从中分析了DKK1和AFP的表达情况，首次发现血清DKK1诊断早期肝细胞癌或小肝细胞癌具有较高的灵敏度和特异性；...
- 覃文新沈秋瑾顾健人杨胜利
- 文献传递
- Dickkopf-1基因在宫颈鳞癌组织中的甲基化研究被引量：3
- 2012年
- 目的检测Dickkopf-1（DKKl）基因在宫颈鳞癌组织中的甲基化状态，分析其临床意义。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测28例宫颈炎、20例CINI、31例CINⅡ～Ⅲ及36例宫颈鳞癌组织中DKKl基因启动子区甲基化情况，并分析富颈鳞癌组织中DKKl基因甲基化水平与临床病理特征之间的相关性。结果宫颈炎、CINI、CINⅡ～Ⅲ和宫颈鳞癌组中DKKl基因甲基化阳性率分别为10．7％、10％、32．3％和44．4％。宫颈鳞癌组织的甲基化阳性率明显高于宫颈炎和CINI组，DKKl基因启动子甲基化与肿瘤分化程度以及肿瘤的直径相关。结论DKKl基因启动子区甲基化检测可能为宫颈鳞癌的诊断以及鉴别诊断提供一个新的检查方法。
- 崔素芬包广宇张玲玲沈秋瑾覃文新
- 关键词：宫颈肿瘤DICKKOPF-1DNA甲基化
- 靶向ATP6L的RNA干扰抑制乳腺癌细胞的体外侵袭能力
- 2010年
- 目的:通过靶向ATP6L的RNA干扰抑制质子泵的功能,检测MCF-7/ADR乳腺癌细胞的体外侵袭情况。方法:采用有效ATP6L干扰片段及干扰对照分别转染MCF-7/ADR细胞,通过荧光分光光度计检测BCECF与细胞分泌上清孵育后在不同激发光激发后发射的荧光量;用实时荧光定量PCR检测细胞中基质金属蛋白酶2(MMP-2)的表达情况;用明胶酶谱方法检测细胞分泌上清中的MMP-2活性;用细胞侵袭实验(Transwell)检测细胞体外侵袭能力。结果:在MCF-7/ADR细胞中,下调ATP6L基因的表达可以使细胞的泌H+能力减弱;细胞中MMP-2表达水平无变化;细胞分泌上清中的MMP-2活性减弱;细胞的体外侵袭能力下降。结论:靶向ATP6L的RNA干扰可抑制质子泵的功能,从而抑制MCF-7/ADR乳腺癌细胞的体外侵袭能力。
- 游海燕金洁唐宁邓云舒惠群沈秋瑾覃文新
- 关键词：RNA干扰肿瘤
- DKK1可作为肝癌早查早诊的血清蛋白标志物被引量：93
- 2012年
- 上海交通大学医学院附属仁济医院上海市肿瘤研究所＂癌基因及相关基因国家重点实验室＂覃文新研究组,今年8月在国际著名的医学杂志《柳叶刀.肿瘤学》TheLancetOncology发表了题为＂血清DKK1蛋白作为肝癌诊断标志物的大规模临床多中心研究＂的论文,
- 沈秋瑾覃文新
- 关键词：肝细胞瘤
- 人源性长寿保障基因2通过与V-ATPase作用抑制肝癌细胞的生长被引量：25
- 2010年
- 人源性长寿保障基因2(Homo sapiens longevity assurance homologue2,LASS2)是本实验室克隆到的一个与酵母长寿保障基因LAG1高度同源的人类新基因。前期研究显示,LASS2可与V-ATPase质子泵的c亚基ATP6L结合,过表达LASS2可以抑制肝癌细胞SMMC-7721的生长。本研究旨在探讨LASS2对V-ATPase质子泵功能的调节是否参与LASS2对肝癌细胞生长的抑制作用。使用本室构建、保存的pCMV-HA2-LASS2质粒瞬时转染肝癌细胞(HCCLM3),而未转染质粒的HCCLM3细胞作为空白对照,运用CCK-8试剂盒检测细胞生长情况;采用BCECF-AM和BCECF氢离子敏感探针分别测定细胞内、外H+浓度;应用流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测线粒体和胞质内细胞色素c(cytochrome c,Cytc)、胞质中的无活性pro-caspase-3的表达情况。结果显示,外源性LASS2的过表达对HCCLM3细胞生长有抑制作用;过表达LASS2使HCCLM3细胞内H+浓度上升,细胞凋亡率提高,线粒体Cyt c释放增加,胞质中pro-caspase-3含量下降。以上结果提示提示LASS2可能通过调控V-ATPase质子泵的功能,提高细胞内H+浓度,从而激活细胞线粒体凋亡途径、抑制肝癌细胞的生长。
- 唐宁金洁邓云柯荣湖沈秋瑾樊少华覃文新
- 关键词：肝癌细胞生长细胞色素C
- 靶向肿瘤酸性微环境的抗肿瘤新策略被引量：12
- 2008年
- 越来越多的体内体外实验及临床检测都证明了肿瘤酸性微环境对肿瘤的发生、发展和迁移起着重要作用。在肿瘤酸性微环境的重要调节因子中,V型ATP酶(V-ATPases)的作用至关重要。这些蛋白能将离子泵出膜外,在正常细胞和肿瘤细胞中都有着多种功能。本文回顾和总结了该领域的最新研究成果:在异种移植人肿瘤细胞的动物模型中,体内实验显示,采用小分子干扰RNA(siRNA)可抑制V-ATPases的功能,加入药物性质子泵抑制剂可显著地抑制人肿瘤细胞的生长。这些结果提示V- ATPases可作为癌症治疗中一个重要的新选择靶标。
- 沈秋瑾覃文新
- 关键词：质子泵抑制剂细胞外基质抗肿瘤药物
- 血清DKK1在制备肝细胞癌和甲胎蛋白阳性慢性肝病鉴别诊断试剂中的用途
- 本发明涉及血清DKK1在制备肝细胞癌和甲胎蛋白阳性慢性肝病鉴别诊断试剂中的用途。本发明人通过分析大量的肝细胞癌样本，从中分析了DKK1和AFP的表达情况，首次发现DKK1可良好地鉴别(区分)肝细胞癌和甲胎蛋白(AFP)阳...
- 覃文新沈秋瑾顾健人杨胜利
- 文献传递
- DKK1作为诊断标志物的用途
- 本发明公开了DKK1作为诊断标志物的用途，发明人通过分析大量的肝细胞癌样本，从中分析了DKK1和AFP的表达情况，首次发现血清DKK1对于诊断肝细胞癌，尤其是诊断甲胎蛋白阴性肝细胞癌、鉴别肝细胞癌和甲胎蛋白阳性慢性肝病和...
- 覃文新沈秋瑾顾健人杨胜利
- 文献传递
- 血清DKK1在制备甲胎蛋白阴性肝细胞癌的诊断试剂中的用途
- 本发明涉及血清DKK1在制备甲胎蛋白阴性肝细胞癌的诊断试剂中的用途。本发明人通过分析大量的肝细胞癌样本，从中分析了DKK1和AFP的表达情况，首次发现血清DKK1诊断AFP阴性肝细胞癌具有较高的灵敏度和特异性。
- 覃文新沈秋瑾顾健人杨胜利
- 文献传递
