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王希菊
作品数:
1
被引量:4
H指数:1
供职机构:
江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室
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相关领域:
生物学
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合作作者
邵蔚蓝
江南大学生物工程学院工业生物技...
蒋宇
江南大学生物工程学院工业生物技...
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蒋宇
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邵蔚蓝
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王希菊
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1篇
微生物学通报
年份
1篇
2005
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海栖热袍菌胞外α-淀粉酶在E·coli中的高效表达
被引量:4
2005年
为解决密码子偏好性差异造成的表达水平低下问题,采取了3种手段提高海栖热袍菌胞外α-淀粉酶在E.coli中的表达水平。用PCR方法从海栖热袍菌(Therm otoga maritima)基因组DNA中扩增出胞外α-淀粉酶A的完整基因amyA,插入表达载体pET-20(b)中构建成质粒pET-amyA;运用基因工程手段将amyA基因富含稀有密码子的信号肽进行切除,将不含信号肽的amyAⅠ基因插入pET-20(b)中构建成质粒pET-amyAⅠ;用PCR法从大肠杆菌基因组中扩增出argU基因,插入pET-amyAⅠ中构建成质粒pET-amyAⅡ。将重组质粒分别转化到E.coliJM109(DE3),并将重组质粒pET-amyAⅠ转化E.coliBL21-CodonP lus(DE3)-R IL。通过IPTG诱导测酶活性:在E.coliJM109(DE3)中表达的重组酶(pET-amyA)、(pET-amyAⅠ)、(pET-amyAⅡ)的酶活分别是1658.0 U/mL、6721.7 U/mL、8904.5 U/mL,在E.coliBL21-CodonP lus(DE3)-R IL中表达的重组酶(pET-amyAⅠ)的酶活是13867.7 U/mL。表明通过这些手段能大幅提高T.maritima胞外α-淀粉酶在E.coli中的表达水平。
王希菊
蒋宇
邵蔚蓝
关键词:
海栖热袍菌
Α-淀粉酶
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