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纤维素乙醇高温发酵的研究进展与展望被引量：3: 2013年; 利用高温细菌发酵,纤维素乙醇生产有望实现"生物质降解-乙醇发酵-乙醇蒸馏"过程的同步化,从而最大限度地降低纤维素乙醇的生产成本;这是一个目标更高、道路更远、科学性更强的可再生能源发展策略。纤维素乙醇高温发酵研究已经取得了重要进展,目前面临的主要挑战包括发酵乙醇的高温细菌的遗传转化系统不够稳定、缺少内源的高活性和耐热性纤维素酶,以及乙醇代谢调控机理有待进一步解析。这些科技难题将会在DNA生物合成和进化技术、细胞生物学技术,以及合成生物学技术的发展中得到解决。; 乐易林邵蔚蓝; 关键词：纤维素乙醇代谢调控遗传转化系统合成生物学

草菇木聚糖酶SDS-PAGE后的复性及活性染色被引量：3: 2003年; 草菇木聚糖酶经SDS PAGE后在胶中能够原位复性,通过银染和刚果红活性染色比较,可确定该酶在胶中的位置.草菇木聚糖酶是单亚基蛋白,相对分子质量为24500.; 胡沂淮李迅邵蔚蓝; 关键词：草菇木聚糖酶 SDS-PAGE 复性活性染色银染

红色亚栖热菌耐热木聚糖酶的克隆表达及生物信息学分析被引量：1: 2015年; 从自主分离的Meiothermus.rubber菌株的基因组中克隆到木聚糖酶基因,并进行了超量表达、重组酶的纯化和酶学性质研究。结果表明,重组木聚糖酶Mru是热稳定性酶,最适反应温度为65℃,能够有效降解木聚糖产生木糖和木二糖。生物信息学分析发现,木聚糖酶Mru与数据库中来自亚栖热菌的木聚糖酶的同源性为60%~100%。在木聚糖酶Mru的结构模型中,GH10木聚糖酶的保守位点大多位于β折叠,α螺旋保守性很低。本研究揭示,木聚糖酶Mru代表一类新型热稳定性GH10木聚糖酶。; 俞洁琼王洪成何正文乐易林邵蔚蓝; 关键词：木聚糖酶生物信息学分析

基于温控载体表达胆固醇氧化酶被引量：2: 2016年; 胆固醇氧化酶在医药检测、食品加工、农业生产等方面都有重要的应用价值。以来源于Rhodococcus sp.的胆固醇氧化酶基因为研究对象,构建于温控表达载体p Hsh上,免去了诱导剂的使用,采用温度调控使胆固醇氧化酶基因在大肠杆菌中成功表达。在摇瓶水平对酶的表达量进行优化,最终的酶量为855 U/L。使用镍柱将酶纯化,得到单一条带,相对分子质量约为55 k Da。分析其酶学性质,最适p H 7.0,在p H 5.0～7.0稳定;最适反应温度40℃,在50℃保温,其半衰期为6.9 min。以胆固醇为底物,在p H 7.5、37℃条件下测酶活,计算得动力学参数K_m为3.38 mmol/L,k_（cat）/K_m为6.09 s-1·（mmol/L）。; 袁晔张玲邵蔚蓝王武杨海麟; 关键词：胆固醇氧化酶

以基因重组技术开发木聚糖类半纤维素资源被引量：57: 2002年; 木聚糖类半纤维素是一类取之不尽而又亟待开发利用的碳水化合物 ,经生物降解后所产生的木糖和少量其它单糖 ,可以用作基本碳源生产各种发酵产品 ,包括有机酸、氨基酸、单细胞蛋白、糖醇、工业酶类、溶剂或燃料醇 .有关半纤维素酶及其基因的研究已经积累了很多资料 ,其中包括木聚糖酶、木糖苷酶、阿拉伯糖苷酶、葡萄糖醛酸酶、木聚糖乙酰酯酶以及它们的基因 .通过基因重组技术可以使发酵工程菌获得降解半纤维素的能力 ,或者把能有效降解半纤维素的微生物构建成发酵工程菌。; 邵蔚蓝薛业敏; 关键词：可再生资源半纤维素酶基因重组技术

极端嗜热菌海栖热袍菌α-葡萄糖醛酸酶的高效表达和重组酶的纯化被引量：6: 2004年; α 葡萄糖醛酸酶作为木聚糖降解的限速酶之一 ,在木聚糖类半纤维素的生物转化中起着重要的作用。海栖热袍菌Thermotogamaritima是一个嗜极端高温的厌氧细菌 ,其产生的极耐热性酶类具有非常可观的工业应用前景。但热袍菌属Thermotoga的基因在大肠杆菌中的表达一般较困难。研究了T .maritima中的极耐热性α 葡萄糖醛酸酶基因在大肠杆菌不同菌株中的表达水平及纯化技术。结果表明 ,稀有密码子AGA、AGG和AUA限制了该基因在大肠杆菌中的表达 ,在大肠杆菌BL2 1 CodonPlus(DE3) RIL可得到高效表达 ,重组蛋白表达量达 2 0 % ,比酶活比野生菌株提高 5倍 ;重组蛋白经热处理和金属Ni2 + 的亲和层析提纯后 ,达到了电泳纯 ,提纯倍数为 5 1倍 ,收率为5 5 1 %。对重组菌诱导表达条件的研究表明 ,营养丰富的TB培养基有助于重组菌的生长 ,重组菌生长至OD6 0 0 为0 7～ 0 8时添加IPTG诱导; 薛业敏毛忠贵邵蔚蓝; 关键词：海栖热袍菌酶学性质

碱性蛋白酶工程菌发酵条件及重组酶的纯化和性质的研究被引量：22: 2002年; 在 5L发酵罐中对重组碱性蛋白酶工程菌株BP0 71高产碱性蛋白酶的条件进行了研究 ,通过提高通气量和改变搅拌转速 ,BP0 71可在发酵 40h内达到产酶高峰 ,酶活力最高可达 2 44 80u mL。利用快速蛋白液相层析(FPLC)技术 ,建立了快速高效纯化碱性蛋白酶的方案。发酵液通过硫酸铵沉淀、DEAE A 5 0脱色及聚乙二醇浓缩得粗酶 ,再经过CM Sephadex C 5 0、Sephadex G 75柱层析后得到了单一组份的重组碱性蛋白酶 ,酶纯度提高了 76 .2倍。SDS -PAGE显示重组碱性蛋白酶分子量为 2 8kD。酶学性质研究表明 ,酶的最适作用pH为 11,最适作用温度为 6 0℃ ,具有良好的pH稳定性和热稳定性。Ca2 +、Mg2 +对酶的稳定性有促进作用 ,Hg2 +、Ag+、PMFS和DFP能强烈抑制酶的活力。; 唐雪明王正祥邵蔚蓝刘吉泉方慧英诸葛健; 关键词：碱性蛋白酶工程菌发酵条件重组酶纯化

选择性酸降解叶绿素产物分析及与牛血清白蛋白的相互作用: 2008年; 脱镁叶绿酸a可以作为光敏活性剂用于光动力治疗.从天然植物的叶绿素出发,采用酸选择性降解,硅胶层析纯化的方法制备脱镁叶绿酸a.得到的产物经液相色谱、二极管阵列检测和质谱分析,表明其光谱吸收和分子量均与脱镁叶绿酸a一致.利用荧光光度法研究了脱镁叶绿酸a与牛血清白蛋白的相互作用,结果表明:脱镁叶绿酸a与牛血清白蛋白形成1:1的配合物,结合常数为5·0×105L/moL.; 唐蕾徐磊韩跃邵蔚蓝陶冠军秦昉; 关键词：牛血清白蛋白液相色谱-质谱荧光光谱

海栖热袍菌鞘的提纯及其成分和敏感性: 2008年; 海栖热袍菌(Thermotoga maritima MS8)是一种极端嗜热厌氧菌,细胞始终被一种鞘结构所包围,并且鞘在细胞两端呈现气囊状.通过膜截留法、透析法和等密度梯度离心法对鞘进行提纯,其中密度梯度离心法提纯的效果较理想.通过TLC分析,鞘由糖、蛋白、脂类组成,偏向膜的性质.通过对鞘的敏感性研究,发现蛋白酶K可以帮助鞘形成孔洞,并且仍可保留细胞的完整性,这可能有助于进一步促进T.maritima MS8基因转化工作的发展.; 周庆邵蔚蓝; 关键词：海栖热袍菌薄层层析透射电镜

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