诸葛健
- 作品数：270 被引量：1,918H指数：22
- 供职机构：江南大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金长江学者和创新团队发展计划更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学化学工程医药卫生更多>>
- 红曲红被引量：3
- 1999年
- 马美荣诸葛健
- 关键词：红曲色素生产技术发酵
- 红曲霉HMW-DNA的制备被引量：3
- 2005年
- 用低熔点琼脂糖包埋浓度为1×109～1×1010个/mL红曲霉原生质体液制备得到DNA胶块。经裂解和PMFS纯化后脉冲场电泳检测,胶块中的DNA片段长度在800kb以上,每个胶块DNA含量为8～13μg。DNA胶块经脉冲场电泳去除小于600kb的非目的小片段后用限制性内切酶EcoRI、BamHI、HindIII作用,结果大部分能被酶解。可以用于BAC文库等大片段基因组文库的构建,为红曲霉功能基因组的研究奠定了基础。
- 周礼红王正祥诸葛健
- 关键词：高分子量DNABAC文库脉冲场电泳红曲霉DNA含量限制性内切酶
- 一些氨基酸对产甘油假丝酵母甘油生产的促进作用被引量：6
- 2006年
- 以EMP途径与TCA循环中间代谢物的添加为对照,研究在尿素为氮源的产甘油假丝酵母发酵过程中添加氨基酸对甘油产量的影响。结果表明:对甘油产量有强促进作用的氨基酸有谷氨酸、谷氨酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、赖氨酸、酪氨酸、脯氨酸、组氨酸和丝氨酸,其最适添加浓度在0.26～0.45g/L之间,丙酮酸、α_酮戊二酸、草酰乙酸、柠檬酸和琥珀酸的最适添加浓度在0.24～0.42g/L之间;赖氨酸最适于在0h添加,丙酮酸和草酰乙酸在第14h,谷氨酸、谷氨酰胺、组氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、酪氨酸、甘氨酸、α_酮戊二酸和琥珀酸在第30h,天冬酰胺、丝氨酸和柠檬酸在第48h;在最适条件下添加这些促进剂,甘油产量均呈显著增加趋势,转化率和增加率分别达到60%和16%以上。氨基酸的作用机理为其脱氨形成的碳骨架经特定的分解代谢途径进入TCA循环,使其强化,导致碳代谢流在3_磷酸甘油醛节点处发生转移,使甘油合成途径的代谢流增加。
- 谢涛方慧英诸葛健
- 关键词：氨基酸产甘油假丝酵母甘油生产
- 渗透压对产甘油假丝酵母甘油合成与胞内磷积累的影响被引量：2
- 2009年
- 研究了不同磷浓度时渗透压对产甘油假丝酵母甘油合成与胞内磷积累的影响。结果表明,不同磷含量时,产甘油假丝酵母甘油合成越多,分泌至胞外和积累于胞内的甘油也越多,其最大甘油合成量存在一个最适渗透压。同样;在相同渗透压下,其最大甘油合成量也存在一个最适磷浓度。在相同磷含量时,渗透压增高能够促进胞内聚磷酸盐积累;当渗透压相同时,培养基中磷含量增加,胞内游离磷和聚磷酸盐均增加。在生长稳定期后期,富磷可以促进胞内游离磷和聚磷酸盐积累显著增加。经分析发现,产甘油假丝酵母胞内积累甘油与聚磷酸盐,可能对克服对数生长期细胞数量少而渗透压胁迫大的困境发挥了极其重要的作用,从而能维持其生长稳定期较高的生物量、细胞存活率和甘油产量。
- 谢涛方慧英诸葛斌诸葛健
- 关键词：渗透压甘油合成产甘油假丝酵母
- 选择性分离放线菌被引量：32
- 1999年
- 进行了土样的预处理试验，探讨了平板培养基中抑制剂重酪酸钾的最适浓度．结果表明，选择性分离放线菌的比较适宜的方法为：采集的土样在２８℃或室温条件下风干１０～２０ｄ后，将土壤悬浮液（１０－１）于４０℃和ｐＨ７的条件下，加６％酵母膏和０．０５％ＳＤＳ（５ｍｍｏｌ／Ｌ磷酸缓冲液），震荡２０ｍｉｎ，水稀释至１０－２；或土壤悬浮液（１０－１）于５０℃和ｐＨ７的条件下，加６％胨和０．０５％ＳＤＳ（５ｍｍｏｌ／Ｌ磷酸缓冲液），震荡１０ｍｉｎ，水稀释至１０－２．然后用平板稀释法接菌在高氏合成１号琼脂＋重酪酸钾（质量浓度为２５０ｍｇ／Ｌ）的平板培养基上。
- 徐成勇袁野黎丹辉夏欢耕诸葛健
- 关键词：放线菌预处理抑制剂
- Neurospora crassa phytase功能区基因phy A'的克隆表达及活性变化
- 2008年
- 目的:检测N.crassa phtase功能区基因phy A′表达的Phy A′活性变化。方法:先将N.crassa phy A′克隆到表达载体pPIC9K中,然后将获得的重组质粒pPIC9K-phy′转化到毕赤氏酵母中分泌表达,分离纯化重组酶Phy A′,并测定其酶学性质。结果:与原酶相比,N.crassa Phy A′的最适温度降低、热稳定性降低以及酶活力的降低。结论:N.crassa phtase N端的前12个氨基酸对维持该酶的功能有比较重要的作用。
- 周小玲黄天华诸葛健
- 关键词：植酸酶活性
- 酵母细胞的高效转化方法被引量：20
- 1998年
- 运用醋酸锂处理酵母细胞，建立并优化了酵母完整细胞的高效质粒转化体系，转化率达１０４μｇ－１．通过对影响转化的诸因子的研究，发现载运ＤＮＡ是影响酵母完整细胞转化效率的最主要因素，热休克处理及处理时间、聚乙二醇相对分子质量及浓度等对转化率也有显著影响。
- 王正祥方慧英诸葛健
- 关键词：酵母细胞质粒脱氧核糖核酸
- 液质联机法初步研究洛伐他汀的微生物转化被引量：6
- 2003年
- 目的:分析微生物对洛伐他汀的转化。方法:应用HPLC/MS技术测定转化产物的相对分子质量。其中液相色谱条件为色谱柱:Alltima ODS-2(250mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-0.5％乙酸(80:20);流速:1.0mL·min^(-1);柱温:室温。质谱为ZMD Micromass电喷雾质谱仪。结果:得到相应的HPLC和MS图谱,并对其分析发现此菌株对洛伐他汀有转化作用。结论:HPLC/MS适合于研究他汀类药物的微生物转化。
- 于海方慧英诸葛健秦昉陶冠军
- 关键词：高效液相色谱质谱洛伐他汀微生物转化
- 好氧发酵法生产甘油的转化率和生产强度被引量：1
- 1998年
- 设计了小型玻璃连续发酵反应器，考察了甘油发酵的生产强度和转化率变化规律。结果表明：转化率随发酵时间的延长趋于一定值。对甘油发酵过程作碳源衡算，求得理论转化率ＹＰ＝１．５７；甘油浓度对发酵时间作图是一条“Ｓ”形曲线，生产强度随发酵时间有一峰值的变化。采用了高密发酵来提高发酵生产强度，结果表明：菌体浓度为１１％～１２％发酵液发酵６０ｈ甘油浓度达到１０８．９ｇ／Ｌ，生产强度为１．８１ｇ／（Ｌｈ），８０ｈ甘油浓度为１４２ｇ／Ｌ，生产强度为１．７７ｇ／（Ｌｈ）．发酵结束转化率达到５２％．
- 杨海麟诸葛健
- 关键词：甘油转化率
- 3-羟基丙酸高产菌株的筛选及诱变选育被引量：8
- 2012年
- 【目的】3-羟基丙酸是一种重要的化学平台化合物,期望得到一株能够高产3-羟基丙酸的菌株。【方法】从土壤及粪便筛选并对得到的菌株进行鉴定和复合诱变。【结果】得到了一株能够利用丙酸发酵生产3-羟基丙酸的酵母Y-11,经生理生化鉴定及18S rDNA序列分析确定其为Candida sp.(假丝酵母)。以Y-11为出发菌株,经紫外-亚硝基胍-60Coγ复合诱变得到了突变性状稳定且可遗传的高产菌株5-13B,其3-羟基丙酸的产量为11.78 g/L,是出发菌株的2.46倍。【结论】对出发菌株和突变株的发酵特性进行了比较,结果表明突变株的3-羟基丙酸产量、对底物丙酸的转化率、产物3-羟基丙酸的积累性能及丙酸的耐受性均优于出发菌株。
- 范俊英方慧英诸葛斌诸葛健
- 关键词：假丝酵母3-羟基丙酸诱变发酵特性
