方慧英
- 作品数：154 被引量：671H指数：14
- 供职机构：江南大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金长江学者和创新团队发展计划更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程化学工程生物学农业科学更多>>
- 根癌农杆菌介导产甘油假丝酵母的遗传转化
- 根癌农杆菌(Agrobacterium tumfaciens)可以将它的Ti质粒的一段T-DNA序列转化到广泛的宿主细胞并能整合到宿主染色体中.研究通过构建质粒pCAM 3300-Zeocin,将其电击转化根癌农杆菌.通...
- 张君胜饶志明沈微方慧英诸葛健
- 关键词：产甘油假丝酵母根癌农杆菌
- 文献传递
- 利用PCR-DGGE技术筛选分离海南黄帝椒产品微生物被引量：3
- 2012年
- 黄帝椒是海南特产高辣度辣椒。该研究以黄帝椒产品为原料,采用聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)技术分析了其微生物种群关系,并结合传统平板筛选法进行菌种分离及鉴定,获得了海南特辣黄帝椒产品优势微生物。研究结果显示,海南黄帝椒产品平板筛选分离到了Pseudomonas stutzeri,Lactobacillus plantarum,Lactobacillus brevis等可培养的菌株;DGGE图谱中检测到了6个条带,其中,乳酸菌占总菌数的65%,处于最优势地位,假单胞菌占总菌数的16%,处于次要地位。该研究也首次提及了不同的微生物对黄帝椒产品的颜色、脆性的影响。
- 李汉文诸葛斌方慧英孙进龚星慧诸葛健
- 关键词：PCRDGGE微生物
- 碱性蛋白酶工程菌发酵条件及重组酶的纯化和性质的研究被引量：22
- 2002年
- 在 5L发酵罐中对重组碱性蛋白酶工程菌株BP0 71高产碱性蛋白酶的条件进行了研究 ,通过提高通气量和改变搅拌转速 ,BP0 71可在发酵 40h内达到产酶高峰 ,酶活力最高可达 2 44 80u mL。利用快速蛋白液相层析(FPLC)技术 ,建立了快速高效纯化碱性蛋白酶的方案。发酵液通过硫酸铵沉淀、DEAE A 5 0脱色及聚乙二醇浓缩得粗酶 ,再经过CM Sephadex C 5 0、Sephadex G 75柱层析后得到了单一组份的重组碱性蛋白酶 ,酶纯度提高了 76 .2倍。SDS -PAGE显示重组碱性蛋白酶分子量为 2 8kD。酶学性质研究表明 ,酶的最适作用pH为 11,最适作用温度为 6 0℃ ,具有良好的pH稳定性和热稳定性。Ca2 +、Mg2 +对酶的稳定性有促进作用 ,Hg2 +、Ag+、PMFS和DFP能强烈抑制酶的活力。
- 唐雪明王正祥邵蔚蓝刘吉泉方慧英诸葛健
- 关键词：碱性蛋白酶工程菌发酵条件重组酶纯化
- 产谷胱甘肽重组巴斯德毕赤氏酵母发酵条件的研究被引量：4
- 2007年
- 考察了培养基组成及培养条件对重组巴斯德毕赤氏酵母(Pichia pastoris)x-33(pGAPZA-gsh 1)合成谷胱甘肽(GSH)的影响。优化后的培养基组成为:甘油30g/L、蛋白胨40g/L、酵母膏9g/L、半胱氨酸0.36 g/L、KH_2PO_4 3g/L;培养条件为:自然pH、摇床转速200r/min、装液量为30mL/250mL、接种量为10%。在此优化条件下重组酵母的GSH产量是98.5mg/L,为优化前的2.33倍,生物量最大值达到19.6g/L。在5L发酵罐上进行放大实验,发酵结束后GSH产量、重组菌的生物量分别为97.9mg/L,18.7g/L与摇瓶发酵结果基本吻合。
- 饶志明艾丽静沈微方慧英诸葛健
- 关键词：谷胱甘肽摇瓶发酵罐
- 嗜热真菌植酸酶基因的克隆及其在巴斯德毕赤酵母中高效表达
- 2009年
- 根据已报道的植酸酶基因序列设计一对引物,用PCR方法从嗜热真菌(Thermomyces sp.)中扩增获得不含信号肽和内含子的植酸酶基因(phyT),对该1.4kb的片段进行克隆与序列测定。序列分析表明该基因与已报道的嗜热疏绵霉(Thermomyces lanuginosus)的植酸酶基因相似性最高,DNA和氨基酸水平相似性分别达到95%和99%。将phyT基因插入毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建重组质粒pPIC9K-phyT并电转化毕赤酵母(Pichia pastoris GS115)。植酸酶基因成功在毕赤酵母中表达并对重组酶酶学性质进行了研究。诱导表达酶活结果显示与野生型菌株相比,活性提高了67.8%,最适温度65℃,75℃处理20min后仍有70%以上酶活活性。最适pH为6.0。SDS-PAGE分析显示其分子量约55ku以上。
- 张文荟诸葛斌沈微饶志明方慧英诸葛健
- 关键词：嗜热真菌植酸酶重组毕赤酵母热稳定性
- 利用产甘油假丝酵母突变株好氧发酵生产甘油的方法
- 本发明公开了一种好氧发酵生产甘油的方法，所述方法包括液化及糖化淀粉质原料，制得糖浓度为20-30%(w/v)的净糖液；向上述净糖液中加入尿素、玉米浆配制成发酵培养基；向上述发酵培养基中加入种子培养液，在30-100立方米...
- 诸葛健方慧英
- 文献传递
- 芭蕉芋糖化液酒精发酵条件研究被引量：4
- 2002年
- 对芭蕉芋糖化液的三角瓶酒精发酵条件进行了研究。通过单因素实验和正交优化实验 ,确定种子培养基为含葡萄糖 16 1%的芭蕉芋糖化液添加 1%玉米浆和 0 2 %尿素 ,种子培养条件为 33℃ ,15 0r/min摇床培养 17h ,接种量 10 %。发酵培养基为含葡萄糖 16 1%芭蕉芋糖液添加尿素 0 2 %和玉米浆 2 %。发酵初始pH值 4 3。 33℃下静置发酵。在此发酵条件下可从 16 1%的糖液中得到 9 4 3% (v/v)的酒精 ,达到葡萄糖理论转化率的 91 0 %。
- 陈叶福方慧英王正祥刘桂香诸葛健
- 关键词：芭蕉芋糖化酒精发酵
- 固定化Amycolatopsis sp.ST2710分段发酵无锡他汀被引量：1
- 2012年
- 用海藻酸钠对Amycolatopsis sp.ST2710细胞进行固定化处理。以固定化细胞的机械强度以及分段发酵无锡他汀的转化率为指标,考察了海藻酸钠浓度、CaCl2浓度、固定化时间和包埋菌体量对固定化细胞分段发酵无锡他汀的影响,得到最佳的固定化条件为:海藻酸钠浓度20 g/L、CaCl2浓度10 g/L、固定化时间1 h、包埋菌体量2 mL菌悬液/10 mL凝胶。对固定化细胞分段发酵无锡他汀的特点进行了研究,结果显示:Amycolatopsissp.ST2710经过固定化处理后,大幅度提升了其对底物洛伐他汀的耐受性,显著降低了对发酵培养基中的淀粉需求量,可重复利用。当发酵两阶段pH分别为7.5和5.5、发酵时间分别为48 h和10 h、洛伐他汀添加量3 g/L、转化培养基中淀粉浓度15 g/L时,中间产物Ⅰ对洛伐他汀转化率为64%,无锡他汀对中间产物Ⅰ的转化率为75%。连续发酵5批后,产物转化率仍能维持较高的水平。
- 曹艳辉方慧英诸葛斌张锡红诸葛健
- 关键词：AMYCOLATOPSIS转化率
- 来源于Thermomyces sp.的植酸酶基因在毕赤酵母中的组成型表达
- 2008年
- [目的]研究植酸酶基因在毕赤酵母中的组成型表达。[方法]用PCR方法从嗜热真菌(Thermomyces sp.)中扩增到去除信号肽和内含子后约1.4 kb的phyT基因编码区片段,并对该片段进行克隆与序列测定。[结果]序列相似性分析表明,克隆的植酸酶基因无信号肽和内含子,与报道的嗜热真菌Thermomyces lanuginosus植酸酶基因相似性最高,DNA序列相似性为95%。从验证后的转化子筛选得到了表达嗜热真菌植酸酶的重组毕赤酵母菌株p-phy T,SDS-PAGE分析显示其分子量约为45 kD,重组毕赤酵母成功表达植酸酶。与野生型菌株相比,结果显示重组植酸酶酶活性提高了12.6%,最适温度65℃,75℃仍有64%以上酶活活性;最适pH值为5.5。[结论]嗜热真菌植酸酶基因用组成型质粒能在毕赤酵母中表达。
- 张文荟沈微饶志明诸葛斌方慧英诸葛健
- 关键词：THERMOMYCES植酸酶重组毕赤酵母
- 耐高温酵母菌株的分离、鉴定及其酒精发酵初步研究被引量：28
- 2003年
- 从 38 1个自然样品中筛选得到 2株耐高温酵母THFY 4和THFY 1 6。THFY 4能够在51℃ ,含 30 %葡萄糖的培养基中生长 ;THFY 1 6能够在 45℃ ,30 %葡萄糖的培养基中生长。经初步鉴定 ,THFY 4为克鲁维属酵母 ,THFY 1 6为酵母属酵母。进一步的 37℃发酵实验证明 ,THFY 4在静置条件下的发酵性能很差 ,发酵 60h只能从 2 0 %的葡萄糖产生 4 88% (v v)的酒精 ;而THFY 1 6在相同的条件下从 2 0 %的葡萄糖中产生 1 1 44% (v v)酒精。以THFY 1 6为发酵菌种 ,以芭蕉芋糖化液为培养基进行酒精发酵 ,2 4h发酵结束 ,从含 1 6 1 %葡萄糖的糖液得到 9 43 % (v v)的酒精 ,达到理论产量的 91 0 %。
- 陈叶福王正祥王晨霞方慧英诸葛健
- 关键词：耐高温酵母酒精发酵
