饶志明
- 作品数：199 被引量：622H指数：11
- 供职机构：江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：生物学化学工程轻工技术与工程医药卫生更多>>
- 提高天冬氨酸β-脱羧酶在酸性环境中催化活力的分子改造被引量：1
- 2018年
- 克隆了德阿昆哈假单胞菌(Pseudomonas dacunhae)来源的L-天冬氨酸β-脱羧酶基因(Asd),实现其在Escherichiacoli中的异源表达,但该酶在酸性环境中活性较低,不利于工业生产.为通过定点突变技术提高该酶在酸性环境中的活力,选择底物通道区域内的5个氨基酸残基作为突变位点,构建6个突变体,随后分析突变体的酶学特性.结果表明,相比于野生型Asd,大多数突变体的比酶活显著下降,只有突变体N34D比酶活(71.67 U/mg)比野生型(65.95 U/mg)略高;另外,突变体N34D在3.5
- 汪芳杨套伟周俊平徐美娟张显饶志明
- 关键词：酶学性质定点突变
- 大肠杆菌苹果酸脱氢酶基因mdh的克隆、高效表达及酶学性质被引量：2
- 2011年
- 以大肠杆菌基因组DNA为模板,扩增得到苹果酸脱氢酶（mdh）编码基因mdh,构建了重组菌pET-28a-mdh/BL21并成功表达了mdh,大小约36 000。选用Ni柱亲和层析法纯化具有活性的苹果酸脱氢酶（mdh）,纯化后比酶活达到112.5 U/mg,纯化倍数达2.62倍,回收率为59%。并对该酶的酶学性质进行了初步研究,其中反应最适pH值为6.0,在pH值2.0~6.0范围内稳定;反应最适温度为37℃,在42℃以下酶的稳定性较好。K＋对酶有明显的激活作用,Cu2＋对酶有抑制作用,Hg2＋和Zn2＋对酶有很强的抑制作用。醇类对酶的活力影响不大,丙三醇可显著提高酶的热稳定性。酶动力学参数以草酰乙酸为底物的Km为0.235 mmol/L,Vmax为0.47μmol/（L.min）。
- 李倩徐美娟夏海锋饶志明
- 关键词：大肠杆菌克隆表达苹果酸脱氢酶纯化酶学性质
- 重组钝齿棒杆菌Corynebacterium crenatum中PHB积累及辅酶水平调节对L-精氨酸产量的影响
- 棒杆菌(Corynebacterium crenatum)SYPA 5是一种L-精氨酸工业生产菌株,为本研究的出发菌株,聚羟基丁酸酯(PHB)则是一种在C:N较高时在细胞内形成的聚合物,在极端条件下可作为细胞的碳源和能源...
- 秦敬儒徐美娟饶志明
- 关键词：L-精氨酸钝齿棒杆菌聚羟基丁酸酯
- 文献传递
- 人甲状旁腺激素-血清白蛋白融合蛋白的构建及在毕赤酵母中的表达被引量：4
- 2007年
- 利用重叠PCR技术拼接PTH和HSA基因,并将构建好的融合基因插入到载体pUC19测序后插入表达载体pPIC9K中,在启动子AOXⅠ和α交配因子信号肽的作用下,分泌表达融合蛋白PTH-HSA。重组质粒pPIC9K/PTH-HSA经SalI线性化后,电击转化毕赤酵母KM71,经G418筛选得到的转化子。PCR鉴定后,用甲醇诱导表达,蛋白电泳分析表明融合基因得到表达;Westernblot分析表明发酵液上清中表达的融合蛋白PTH-HSA具有HSA的抗原性:用酶标法测定发酵上清中融合蛋白的甲状旁腺激素活性为318IU/ml。
- 王俊沈微饶志明诸葛健
- 关键词：人甲状旁腺激素融合蛋白毕赤酵母
- 产谷胱甘肽重组巴斯德毕赤氏酵母发酵条件的研究被引量：4
- 2007年
- 考察了培养基组成及培养条件对重组巴斯德毕赤氏酵母(Pichia pastoris)x-33(pGAPZA-gsh 1)合成谷胱甘肽(GSH)的影响。优化后的培养基组成为:甘油30g/L、蛋白胨40g/L、酵母膏9g/L、半胱氨酸0.36 g/L、KH_2PO_4 3g/L;培养条件为:自然pH、摇床转速200r/min、装液量为30mL/250mL、接种量为10%。在此优化条件下重组酵母的GSH产量是98.5mg/L,为优化前的2.33倍,生物量最大值达到19.6g/L。在5L发酵罐上进行放大实验,发酵结束后GSH产量、重组菌的生物量分别为97.9mg/L,18.7g/L与摇瓶发酵结果基本吻合。
- 饶志明艾丽静沈微方慧英诸葛健
- 关键词：谷胱甘肽摇瓶发酵罐
- 转录调控因子ALsR表达强度对枯草芽孢杆菌合成乙偶姻和2,3-丁二醇的影响被引量：2
- 2020年
- 转录调控因子ALs R是枯草芽孢杆菌中赖氨酸家族的转录调控因子,负责调控丙酮酸到乙偶姻和2,3-丁二醇合成途径中乙酰乳酸合成酶和乙酰乳酸脱羧酶的表达.为探究枯草芽孢杆菌生产乙偶姻和2,3-丁二醇过程中ALs R的最适表达强度,选取5个不同强度的启动子来调控ALs R的表达,首先以绿色荧光蛋白(GFP)作为报告基因表征了不同强度启动子的转录活性,然后使用这些不同强度的启动子来调控ALs R的表达,研究ALs R的表达强度对枯草芽孢杆菌乙偶姻和2,3-丁二醇发酵的影响.结果发现,在使用表达水平较强的组成型启动子Pals SD调控ALs R表达时,细胞的发酵周期延长8 h,细胞密度有所下降,乙偶姻和2,3-丁二醇产量也有一定程度的下降.当使用较弱的启动子Psrf A、Pbdh A、Pzwf、Pals R调控ALs R表达时,ALS和ALDC酶活分别提高1.15-2.25倍和2.4-4.8倍,此时比较适于乙偶姻和2,3-丁二醇的合成,乙偶姻和2,3-丁二醇的产量分别提高了9.24%-19.63%和7.16%-14.91%,同时副产物乳酸和乙酸的产量分别降低了5.45%-18.18%和19.46%-31.21%,其中在启动子Pbdh A调控ALs R表达时,即ALS和ALDC酶活分别提高1.9倍和4.1倍,此时最适于乙偶姻和2,3-丁二醇的发酵生产,乙偶姻和2,3-丁二醇的产量分别提高了19.6%和14.9%,副产物乳酸和乙酸的产量也显著下降.本研究发现过量地表达转录调控因子ALs R会对细胞的生长造成影响,不利于乙偶姻和2,3-丁二醇的发酵,而适度强化表达转录调控因子ALs R不会对细胞的生长造成影响,可以有效地提高乙偶姻和2,3-丁二醇的产量,降低发酵过程中的副产物乙酸和乳酸的积累.(图5表4参34)
- 刘会灵刘栓英潘龙泽张显徐美娟邵明龙杨套伟饶志明
- 关键词：乙偶姻启动子枯草芽孢杆菌
- 嗜热真菌植酸酶基因的克隆及其在巴斯德毕赤酵母中高效表达
- 2009年
- 根据已报道的植酸酶基因序列设计一对引物,用PCR方法从嗜热真菌(Thermomyces sp.)中扩增获得不含信号肽和内含子的植酸酶基因(phyT),对该1.4kb的片段进行克隆与序列测定。序列分析表明该基因与已报道的嗜热疏绵霉(Thermomyces lanuginosus)的植酸酶基因相似性最高,DNA和氨基酸水平相似性分别达到95%和99%。将phyT基因插入毕赤酵母表达载体pPIC9K中,构建重组质粒pPIC9K-phyT并电转化毕赤酵母(Pichia pastoris GS115)。植酸酶基因成功在毕赤酵母中表达并对重组酶酶学性质进行了研究。诱导表达酶活结果显示与野生型菌株相比,活性提高了67.8%,最适温度65℃,75℃处理20min后仍有70%以上酶活活性。最适pH为6.0。SDS-PAGE分析显示其分子量约55ku以上。
- 张文荟诸葛斌沈微饶志明方慧英诸葛健
- 关键词：嗜热真菌植酸酶重组毕赤酵母热稳定性
- 一株产灵菌红素粘质沙雷氏菌的筛选、鉴定及发酵条件被引量：16
- 2012年
- 利用贫营养条件,从土壤样品中筛选到一株产红色素的菌株。经形态学、生理生化实验进行菌株初步鉴定,并经16S rDNA测序分析确定该菌株为粘质沙雷氏菌属,将其命名为:Serratiamarcescens JNB5-1。该菌株所产红色素经全波长扫描及LC-MS确定为灵菌红素。对Serratiamarcecens JNB5-1产灵菌红素做初步发酵研究,在蔗糖2 g/dL,牛肉膏1.5 g/dL,CaCl21 g/dL,脯氨酸0.75 g/dL,MgSO4.7H2O 0.02 g/dL,FeSO4.7H2O 0.006 g/dL的培养基中发酵72 h后,其发酵产量可达4.139 g/L。
- 李子武张显徐美娟夏海锋饶志明
- 关键词：灵菌红素发酵条件
- Halogranum amylolyticum TNN58全基因组测序及PHBV代谢途径分析
- 2018年
- 解淀粉盐颗菌TNN58(Halogranum amylolyticum TNN58)是一株极端嗜盐古菌,它可以利用葡萄糖积累3HV摩尔分数高达20%的PHBV。首次通过鸟枪法对H.amylolyticum TNN58进行了全基因组测序,利用Velvet软件进行组装,得到32个支架序列,整个基因组大小约为4.71Mb,测序深度为218X。通过对基因组数据进行分析,发现该菌株PHA合酶由pha E和pha C两个亚基组成,存在4条3-HV的供应途径,同时发现该菌株不存在乙醛酸循环途径,但存在甲基天冬氨酸循环途径作为乙酸盐的回补利用途径。本研究的结果为揭示H.amylolyticum TNN58的PHBV合成机制和后续的功能基因组学研究的提供了数据。
- 赵有玺薛燕芬薛燕芬马延和
- 关键词：PHBV基因组
- 氧甲基转移酶编码基因ploy(A)加尾促进粘质沙雷氏菌合成灵菌红素能力研究
- 2021年
- 粘质沙雷氏菌能在30℃高效合成灵菌红素,但在37℃甚至更高温度则丧失合成能力。研究表明,在37℃甚至更高温度下,粘质沙雷氏菌中灵菌红素合成关键酶氧甲基转移酶(O-methyltransferase,PigF)的表达量显著下降。因此,通过人工在pigF基因3′端添加6条不同的poly(A/T)尾来提高pigF基因mRNA稳定性,并观察其对粘质沙雷氏菌中PigF表达量及灵菌红素合成的影响。结果发现,添加“AAAAAA”可以保护mRNA免受降解,从而使得pigF转录水平提高71%。其次,添加“AAAAAA”后,PigF比酶活力提高了41.8%。最后通过摇瓶发酵,实验结果表明,与30℃培养的原始菌株相比,工程改造的JNB5-1/pigF FP菌株的灵菌红素产量达到6.21 g/L,提高了15.9%。该研究表明,通过引入poly(A/T)尾提高了PigF的表达量,进而提高了粘质沙雷氏菌合成灵菌红素的能力。
- 孙杨王丽君杨套伟付维来易敢峰饶志明
- 关键词：粘质沙雷氏菌灵菌红素
