徐美娟
- 作品数：111 被引量：224H指数：8
- 供职机构：江南大学生物工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：生物学化学工程轻工技术与工程医药卫生更多>>
- 一种耐低温α-乙酰乳酸脱羧酶在枯草芽孢杆菌中的高效表达被引量：5
- 2013年
- 从Bacillus subtilis L5-20染色体上克隆得到ALDC基因alsD,构建重组表达载体pMA5-alsD-His,将其转化到B.subtilis WB600中。SDS-PAGE结果显示ALDC在重组B.subtilisWB600中成功表达,其相对分子质量(Mr)为32×103。采用Ni柱亲和层析纯化重组ALDC,所得纯酶的比酶活为272.3 U/mg,总回收率为89.8%。该重组ALDC最适反应温度仅为25℃,在20～35℃范围内均表现出较高的活性。Ni2+对ALDC有一定的激活作用,Fe3+使ALDC活性完全丧失。经摇瓶培养,重组菌的ALDC酶活为27.0 U/mL,约为出发菌酶活的70倍。经5 L的发酵罐发酵放大试验,ALDC酶活最高可达75.9 U/mL。
- 李静静徐美娟张显饶志明
- 关键词：枯草芽孢杆菌Α-乙酰乳酸脱羧酶耐低温双乙酰酶学性质
- 微生物遗传育种学教学策略创新
- 2021年
- 为进一步提高微生物遗传育种学课程教学质量,激发学生的专业兴趣,文章从模块化教学方法、创新教学模式、多元化授课形式等方面探讨了该课程教学改革的必要性,阐述了对微生物遗传育种学课程融入思想政治教育的思考,讨论了如何为国家与社会培养出综合素质全面和具有创新能力以及国际化视野的综合型人才,为相关本科专业的教学改革实践与应用提供借鉴。
- 张显饶志明徐美娟杨套伟李华钟段作营陈献忠
- 关键词：教学改革发酵工程
- 定点突变提高枯草芽孢杆菌L-天冬酰胺酶的活力及稳定性被引量：10
- 2015年
- L-天冬酰胺酶可以催化L-天冬酰胺转化为L-天冬氨酸和氨。它可以通过降解食品原料中的L-天冬酰胺而降低高温烹制食品中丙烯酰胺的含量。由于食品预处理环境的复杂性,只有具有高酶活且稳定的酶才能满足食品生产中的应用。作者通过点突变提高来源于Bacillus subtilis B11-06的L-天冬酰胺酶(Bs AII)的酶活和热稳定性。通过序列比对和同源模拟选择5个点进行突变,构建6个突变菌株。酶活测定结果表明,突变体酶S299N_(ansz)和P348A_(ansz)的酶活较Bs AII分别提高28%和32%。其中P348A_(ansz)的热稳定性和p H稳定性较Bs AII均有明显提高。本研究表明,第299和348位氨基酸残基对酶的催化作用有较大影响,对该酶的催化机理的研究提供了一定的基础,并提高了该酶的工业应用潜力。
- 张显龙水清饶志明杨套伟徐美娟
- 关键词：L-天冬酰胺酶定点突变热稳定性
- 优化搅拌转速控制策略提高Bacillus subtilis RF1发酵生产核黄素的产量
- 通过恒定搅拌转速实验，发现在发酵初始阶段较低的搅拌转速有利于菌体生长和核黄素生成，而在发酵后期较高的搅拌转速有利于菌体生长和核黄素生成。在此分析基础上提出两阶段搅拌转速控制策略，即发酵前26h搅拌转速维持在600rpm，...
- 满在伟徐美娟饶志明
- 关键词：核黄素发酵生产搅拌转速优化设计
- 文献传递
- 以L-亮氨酸为底物一步法生物合成α-酮异己酸被引量：1
- 2021年
- α-酮异己酸是重要的有机合成和药物合成中间体,在食品、医药和化工行业中应用广泛。目前,α-酮异己酸的合成以化学法为主,需要高成本的催化剂或特殊的起始结构,导致α-酮异己酸生产成本较高。首次在食品安全性菌株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)168中异源表达了普通变形杆菌(Proteus vulgaris)来源的L-氨基酸脱氨酶,以重组枯草芽孢杆菌作为全细胞催化剂、L-亮氨酸为底物实现了α-酮异己酸的一步法生物合成。其次,针对全细胞催化条件进行优化,最优条件(全细胞催化剂20 g/L、L-亮氨酸浓度100 mmol/L、反应温度45℃、pH 10.0、MgCl 2浓度5 mmol/L)下,转化24 h,可获得3.66 g/L的α-酮异己酸,且重复转化3次后,固定化细胞比游离细胞的再利用率提高了37.3%。该研究成功实现了以食品安全菌株B.subtilis 168为宿主一步法生物合成α-酮异己酸,为α-酮异己酸以及其他重要α-酮酸的工业化安全合成提供了新策略。
- AL-ADEEB Abdulqader乔郅钠徐美娟杨套伟张显邵明龙饶志明
- 关键词：普通变形杆菌L-亮氨酸全细胞催化
- 重组钝齿棒杆菌全细胞转化生产L-瓜氨酸条件优化被引量：3
- 2017年
- 实现了精氨酸脱亚胺酶(ADI)首次在钝齿棒杆菌Corynebacterium crenatum SYPA 5-5中的高效表达。通过Ni-NTA亲和层析纯化得到纯化ADI,经SDS-PAGE测定其分子量约为46.8 k Da,酶学性质研究发现ADI的最适催化温度为37℃,最适pH为6.5,ADI在最佳催化条件下作用于L-精氨酸的米氏常数为12.18 mmol/L,最大反应速率为0.36μmol/(min·mL)。优化了重组菌全细胞转化产L-瓜氨酸的工艺条件,在最优条件下可一次转化300 g/L L-精氨酸,转化速率达8 g/(L·h)。进行重组菌5 L罐发酵并进行罐上全细胞转化300 g/L L-精氨酸,一批菌体可进行多次转化,累计产量达1 900 g以上。
- 刘倩妮徐美娟张荣珍王梅洲张显杨套伟饶志明
- 关键词：精氨酸脱亚胺酶钝齿棒杆菌
- 利用一株环境安全菌株以葡萄糖为底物高效合成2,3-丁二醇
- 本研究室从自然界中筛选出一株高产2, 3-丁二醇的菌株B10-127，结合16S rDNA序列分析及分子鉴定确定为Bacillus amyloliquefaciens。随后，研究了几种氮源对B.amyloliquefac...
- 杨套伟张显徐美娟饶志明许正宏
- 关键词：2,3-丁二醇细菌发酵葡萄糖
- 文献传递
- β-甘露聚糖酶基因在枯草芽孢杆菌中的克隆及表达被引量：11
- 2012年
- 从Bacillus subtilis JNA 3-10中克隆出β-甘露聚糖酶基因成熟肽链编码序列manA1和含信号肽的β-甘露聚糖酶基因manA2,在B.subtilis 168中克隆表达,分别筛选获得高效分泌表达β-甘露聚糖酶的重组菌株BPM1001(pMA5-manA1/B.subtilis 168)和BPM1002(pMA5-manA2/B.subtilis 168),结果表明菌株BPM1002总酶活力是菌株BPM1001的9.65倍,是原始菌株的13.1倍.在基因manA2下游引入His序列克隆出β-甘露聚糖酶基因manA3,获得枯草芽孢杆菌168重组菌株BPM1003.采用Ni-NTA柱纯化重组菌株BPM1003分泌表达的β-甘露聚糖酶,并研究其酶学性质,该酶促反应的最适pH为6.5,最适温度为65℃,在37℃条件下保存一个月酶活力依然保留有77.8%.5 L发酵罐放大实验结果表明魔芋粉对于产β-甘露聚糖酶具有明显的诱导作用,酶活力最高可达2 748.82 U/mL.
- 刘项羽徐美娟杨套伟张显饶志明
- 关键词：Β-甘露聚糖酶枯草芽孢杆菌信号肽重组菌株酶学性质
- 克雷伯氏菌甘油脱氢酶dhaD的克隆表达、纯化及酶学性质研究被引量：6
- 2008年
- 以克雷伯氏菌基因组DNA为模板,扩增得到编码甘油脱氢酶(GDH)的基因dhaD,将其克隆到大肠杆菌表达载体pET-28a(+)上,在E.coliBL21(DE3)中诱导表达,利用表达载体pET-28a(+)上的6.His-Tag标记选用Ni柱亲和层析法纯化表达具有活性的甘油脱氢酶(GDH),纯化后比酶活达到156U/mg,纯化倍数达4.6倍,回收率为67.4%。并初步研究了该酶的酶学性质,酶反应的最适pH为11.0,在pH7.0～12.0范围内稳定;酶反应的最适温度为30℃,稳定范围为25～45℃;酶动力学参数以甘油为底物的Km为0.54 mmol/L,Vmax为0.49μmol/ml·min。
- 徐美娟杨套伟饶志明沈微张传志诸葛斌方慧英诸葛健
- 关键词：克雷伯氏菌甘油脱氢酶纯化酶学性质
- 理性代谢工程改造促进谷氨酸棒杆菌高效合成L-谷氨酰胺被引量：1
- 2022年
- L-谷氨酰胺(L-glutamine,L-Gln)是人体液中含量最丰富的一种半必需氨基酸,具有多种营养和药理功能,被广泛应用于医药、食品添加剂、营养保健品、饲料等领域。目前,微生物发酵法是生产L-Gln的主要方法,发酵产酸效率低、副产物多、菌种性能欠缺等问题严重限制了其工业化应用。为解决这一问题,作者以实验室前期构建的L-Gln生产菌株CGQ03为出发菌株,通过强化谷氨酸脱氢酶表达及辅因子NADPH供应促进前体L-谷氨酸合成、增强辅因子ATP胞内含量、过表达溶氧相关蛋白VHb提高细胞携氧能力、增强关键酶谷氨酰胺合成酶催化活性及发酵工艺优化等策略提高了L-Gln产量。最终的基因工程菌CGQ08/pDXW10-glnASc-gdhCg在5 L发酵罐上补料分批发酵66 h,L-Gln的产量最高达(94.5±1.8)g/L,糖酸转化率为34.8%,生产强度为1.43 g/(L·h)。本研究为L-Gln及其相关化合物的工业化生产提供了借鉴。
- 乔郅钠吕青兰李翔飞王晴徐美娟饶志明
- 关键词：L-谷氨酰胺谷氨酸棒杆菌发酵工艺优化
