杨登科
- 作品数：19 被引量：38H指数：4
- 供职机构：第三军医大学大坪医院野战外科研究所更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 结核分枝杆菌Ag85B/IL-2融合蛋白的原核表达、纯化、鉴定及活性初步测定被引量：1
- 2006年
- 目的在大肠杆菌中表达结核分枝杆菌Ag85B/IL-2融合蛋白,并对其进行纯化、鉴定和活性初步测定.方法将构建的pGEX-Ag85B/IL-2重组菌BL21扩增后接种于LB培养基中,异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组融合蛋白的表达,筛选最适诱导剂浓度和最适诱导时间;梯度浓度尿素复性包涵体,经GST-Sepharose亲和层析、凝血酶切、阴离子交换层析和反相-高效液相(RP-HPLC)层析纯化Ag85B/IL-2融合蛋白,免疫印迹(Westernblot)鉴定,并测定其N-末端氨基酸序列和IL-2比活性.结果成功在大肠杆菌中高效表达带有GST的Ag85B/IL-2融合蛋白,占菌体总蛋白的30%,主要以包涵体形式表达,于诱导后6h表达量达最高峰.对包涵体复性,纯化获得纯度为98.32%的Ag85B/IL-2融合蛋白,Westernblot鉴定阳性,N-末端氨基酸测序与理论预期完全一致,IL-2比活性为2500u/mg.结论高效表达并纯化了Ag85B/IL-2融合蛋白,为进一步研究其在膀胱肿瘤免疫治疗中的作用奠定了基础.
- 杨登科靳风烁张勇
- 关键词：AG85BIL-2原核表达融合蛋白纯化
- Ag85B/IL-2融合蛋白在体外对PBMC增殖及Th1型细胞因子分泌的影响被引量：9
- 2006年
- 【目的】研究Ag85B/IL-2融合蛋白对人外周血单个核细胞(PBMC)增殖及Th1型细胞因子分泌的影响。【方法】MTT法测定不同浓度的Ag85B/IL-2融合蛋白在不同时相对人PBMC的增殖活性,ELISA法检测Ag85B/IL-2融合蛋白作用人PBMC不同时间后IL-12和IFN-γ的分泌水平,并与Ag85B和BCG作对比。【结果】以0.8μg/ml Ag85B/IL-2融合蛋白刺激组的人PBMC增殖活性为最强,此组在各时段均显著高于空白对照组(P<0.01,P<0.05);各浓度Ag85B/IL-2融合蛋白刺激48 h后的IL-12水平均显著高于空白对照组(P<0.01,P<0.05),以0.8μg/ml的浓度刺激PBMC 72 h时,IL-12的分泌达最高;0.8μg/ml和1.6μg/ml刺激组的IFN-γ浓度在各个时相点均显著高于空白对照组(P<0.01,P<0.05)。Ag85B/IL-2融合蛋白刺激PBMC分泌IL-12和IFN-γ的作用,均显著强于Ag85B和BCG(P<0.01)。【结论】Ag85B/IL-2融合蛋白具有促人PBMC增殖和Th1型细胞因子分泌的作用。
- 杨登科靳风烁张勇
- 关键词：白细胞介素2单核细胞细胞分裂细胞活素类
- 膀胱移行细胞癌中血管内皮生长因子表达与肿瘤细胞增殖的关系被引量：2
- 2002年
- 目的 探讨膀胱移行细胞癌 (TCC)中血管内皮生长因子 (VEGF)的表达与肿瘤细胞增殖的关系。方法 用鼠抗人VEGF单克隆抗体及Ki\|67抗原单克隆抗体对 75例TCC和 1 0例正常膀胱粘膜组织进行免疫组化染色。结果 TCC中VEGF表达和Ki 67指数(Ki 67LI)明显增高 ,且与肿瘤病理分级、临床分期和淋巴结转移呈正相关性。VEGF表达与Ki 67LI之间亦具有正相关性。结论 VEGF和Ki 67LI从血管生成和增殖活性两个不同的侧面反映了肿瘤细胞的生长浸润能力 ,联合检测VEGF和Ki 67LI对评估膀胱移行细胞癌生物学行为具有重要意义。
- 杨登科李俊卿陈书奎胡伟张斌
- 关键词：膀胱肿瘤移行细胞癌血管内皮生长因子KI-67细胞增殖
- Cyclin E和p27^(kip1)在膀胱移行细胞癌中的表达及其意义被引量：1
- 2002年
- 目的 探讨CyclinE和p2 7kip1在膀胱移行细胞癌 (BTCC)中的表达 ,并评价其相关性和意义。方法 应用鼠抗人CyclinE和 p2 7kip1单克隆抗体对 65例BTCC和 12例正常粘膜进行免疫组化SP法染色。结果 CyclinE在BTCC中阳性表达率随着病理分级 (P <0 .0 5 )和临床分期 (P <0 .0 1)的升高而增高 ,有淋巴结转移组非常显著高于无淋巴结转移组 (P <0 .0 1) ;而p2 7kip1在BTCC中的阳性表达率随着临床分期和病理分级的增高而降低 (P <0 .0 5 ) ,有淋巴结转移组显著低于无淋巴结转移组 (P <0 .0 5 )。CyclinE和 p2 7kip1在BTCC中表达具有负相关性 (r =-0 .2 62 ,P <0 .0 5 )。结论 CyclinE对BTCC的分化、增殖、浸润和转移可能起促进作用 ;而p2 7kip1则对BTCC的分化、增殖、浸润和转移可能起抑制作用 :两者在细胞周期进展中的共同表达失调 ,可能是导致BTCC发生发展和向恶性表型转化的机制之一。
- 杨登科陈书奎胡伟李俊卿靳风烁
- 关键词：CYCLINEP27^KIP1膀胱移行细胞癌
- 腔内治疗前列腺增生并输尿管结石被引量：4
- 2005年
- 孔令军陈书奎杨登科冯志刚史彦彬闫俊岭焦湘
- 关键词：前列腺增生输尿管结石经尿道前列腺汽化电切术弹道碎石术
- 分支杆菌Ag85B蛋白对小鼠膀胱癌抑癌效应的研究被引量：5
- 2005年
- 目的:探讨分支杆菌Ag85B蛋白对小鼠膀胱癌的抑癌效应。方法:采用T739 可移植性膀胱癌模型,于移植瘤处局部注射分支杆菌Ag85B蛋白,并用卡介苗(BCG)和生理盐水(NS)作对照,观察治疗后各组的肿瘤重量和存活期。结果:分支杆菌Ag85B蛋白治疗组小鼠肿瘤瘤重(4.12±0.85) g,显著低于NS组(7.01±1.18) g(P<0.01),与BCG组(3.85±1.18) g比较差异无统计学意义(P>0.05),抑瘤率为41.23%;分支杆菌Ag85B蛋白治疗组小鼠存活天数为(28.75±2.71) d,显著长于NS组(23.50±2.45) d(P<0.05),与BCG组的(29.63±3.25) d比较差异无统计学意义(P>0.05),存活延长率为22.34%。结论:分支杆菌Ag85B蛋白对小鼠膀胱癌具有抑制作用,并能延长膀胱癌荷瘤鼠的生存期。
- 杨登科靳风烁江军张勇
- 关键词：分支杆菌膀胱肿瘤抑癌效应
- Ki-67和微血管密度在膀胱移行细胞癌中的表达及其相互关系被引量：2
- 2001年
- 目的 :探讨 Ki- 6 7抗原和微血管密度 (MVD)在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义 ,并评价两者的相互关系。方法 :利用鼠抗人 Ki- 6 7抗原单克隆抗体和鼠抗人 F 因子相关抗原 (F RAg)单克隆抗体对 6 5例膀胱移行细胞癌和 8例正常膀胱黏膜进行免疫组化染色。结果 :Ki- 6 7与 MVD在癌组织中表达均显著高于正常黏膜 (P<0 .0 1)。肿瘤中 Ki- 6 7指数和 MVD之间存在正相关性 ,两者的表达均与膀胱移行细胞癌的病理分级显著相关 , 级与 级、 级与 级之间存在显著差异 (P<0 .0 1) ;浸润性肿瘤组高于表浅肿瘤组 (P<0 .0 1) ;术后 2年随访复发组高于未复发组 (P<0 .0 1)。MVD与肿瘤大小有关 ,肿瘤直径大于 2 cm组 MVD高于肿瘤直径小于 2 cm组 (P<0 .0 5 )。结论 :Ki- 6 7的表达为膀胱移行细胞癌的恶性表型 ,且与膀胱肿瘤血管形成有关。Ki- 6 7指数和
- 杨登科陈书奎张斌李俊卿郝斌程云芳
- 关键词：KI-67免疫组化膀胱肿瘤微血管密度预后
- Cyclin E和p27^(kip1)在膀胱移行细胞癌中表达及与Ki-67表达的关系
- 2002年
- 目的 探讨细胞周期调控基因蛋白cyclinE和p2 7kip1在膀胱移行细胞癌 (BTCC)中的表达及与Ki -6 7表达的关系。方法 采用免疫组化SP法 ,观察 6 5例BTCC中三种指标的表达情况 ,并用 12例正常黏膜作对比。结果 cyclinE在BTCC中阳性表达率随着病理分级 (P <0 0 5 )、临床分期和Ki- 6 7指数 (P <0 0 1)的升高而增高 ,有淋巴结转移组非常显著高于无淋巴结转移组 (P <0 0 1) ;而p2 7kip1在BTCC中的阳性表达率随着临床分期、病理分级和Ki- 6 7指数的增高而降低 (P <0 0 5 ) ,有淋巴结转移组显著低于无淋巴结转移组 (P <0 0 5 )。结论 cyclinE对BTCC的分化、增殖、浸润和转移可能起促进作用 ,而p2 7kip1则对BTCC的分化、增殖、浸润和转移可能起抑制作用。两者在细胞周期进展中的共同表达失调 ,可能是导致BTCC发生发展和向恶性表型转化的机制之一。联合检测cyclinE、p2 7Kip1和Ki- 6 7的表达对BTCC的生物学行为评价和判断预后具有重要意义。
- 杨登科陈书奎胡伟靳风烁李俊卿
- 关键词：膀胱移行细胞癌CYCLIN
- 分枝杆菌Ag85B多克隆抗体的研制被引量：2
- 2004年
- 目的 在原核系统中表达并纯化GST Ag85B融合蛋白 ,制备兔抗Ag85B多克隆抗体。方法 首先构建编码结核分枝杆菌Ag85B分泌蛋白的重组表达质粒pGEX Ag85B ,将此质粒转入大肠杆菌 ,诱导表达融合蛋白并加以纯化 ;然后将纯化的蛋白免疫家兔 ,提取家兔的抗血清 ,纯化制备多克隆抗体并进行鉴定。结果 成功构建了原核表达质粒pGEX Ag85B ,转化入大肠杆菌BL2 1中诱导表达并成功纯化 ,用纯化的GST Ag85B融合蛋白成功制备了兔抗Ag85多克隆抗体。
- 张勇靳风烁李黔生江军李彦锋杨登科
- 关键词：多克隆抗体AG85B膀胱肿瘤融合蛋白
- 结核分枝杆菌Ag85B/GST融合蛋白表达载体构建及在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2004年
- 目的 构建结核分枝杆菌Ag85B/GST融合蛋白表达质粒 ,并在大肠杆菌 (E .coli)中诱导表达。方法 以质粒pUC18/Ag85B为模板 ,用PCR法扩增结核杆菌Ag85B基因 ,扩增的Ag85B上游含有EcoRⅠ酶切位点 ,下游含有SalⅠ酶切位点 ;将Ag85B基因定向插入质粒pGEX 4T 1中 ,构建原核表达质粒pGEX Ag85B并转化E .coliBL2 1,筛选阳性重组子 ,限制性内切酶切鉴定和DNA序列测定 ,异丙基硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导表达 ,SDS PAGE和Westernblot鉴定结果。结果 成功构建原核表达质粒pGEX Ag85B并表达出Mr 约 5 6 0 0 0大小的Ag85B/GST融合蛋白 ,表达量占总菌体的 30 %。
- 杨登科靳风烁张勇江军闫天中
- 关键词：结核杆菌AG85B质粒
