葛林
- 作品数：29 被引量：30H指数：3
- 供职机构：天津医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市应用基础与前沿技术研究计划重点项目国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 重组原核质粒GST-hTudor-SN-SN（1～4）的构建及表达
- 2010年
- 目的 将人类Tudor-SN（tudor staphylococcal nuelease）蛋白SN（1～4）基因片段分别定向连入pGEX-4T-1质粒,使Tudor-SN蛋白sN各功能片段与（;＂蛋白在大肠埃希菌BL21细胞内融合表达.方法 以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,PCR法扩增出目的 基因,利用EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切法将目的 片段连接纠pGEX-4T-1载体卜,再将构建成功的GST-hTudor-SN-SN（1～4）重组质粒转化人大肠埃希菌BL-21内,IPTG诱导表达后再以考马斯亮蓝染色法检测GST融合蛋白的表达.结果 以单/双酶切和基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误,考马斯亮监染色法观察到GST融合蛋白的正确表达.结论 重组原核GST.hTudor-SN-SN（1-4）质粒成功构建和表达.
- 苏超朱梦瑜高星杰王鑫廷张桂敏付晓葛林杨洁
- 关键词：PGEX-4T-1重组质粒融合蛋白
- 脂蛋白脂肪酶基因突变的研究被引量：9
- 2004年
- 目的:筛查国人脂蛋白脂肪酶(LPL)基因的突变,并探讨其与高甘油三酯血症的关系。方法:对高甘油三酯血症组(48例)和正常甘油三酯对照组(121例)的各扩增片段进行分析,电泳图谱异常者进行PCR产物测序。对于频率较高的多态性位点,引入限制性核酸内切酶位点利用PCR-RFLP进行鉴定。结果:在高甘油三酯血症人群中,检出2例内含子3受位剪接点上游6bp的C→T转换的突变杂合子,1例外显子5Pro207→Leu突变杂合子,在全部样品中检出1例Ser447→stop突变纯合子,50例Ser447→stop杂合子。结论:天津地区人群中存在着LPL基因突变,除Ser447→stop外,内含子3和外显子5的突变多与高甘油三酯血症相关,可能是高甘油三酯血症的遗传易感因子。
- 赵郁穆云翔杨宇虹刘新宇葛林解用虹
- 关键词：高甘油三酯血症杂合子LPL剪接PCR产物
- hnRNP A1的增强型绿色荧光标记及细胞应激定位分析
- 2014年
- 目的构建包含有核不均一核糖核蛋白(hnRNP)A1蛋白编码区序列的真核表达质粒pEGFP-C1-hnRNP A1,并对增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的hnRNP A1蛋白进行细胞应激共定位分析。方法提取HeLa细胞总RNA,以针对hnRNPA1-3′非翻译区的特异性片段为反转录引物,反转录出包含hnRNP A1编码区序列的cDNA,并以其为模板,降落PCR法扩增出带EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切位点的目的基因,利用双酶切法分别酶切目的基因片段和线性pEGFP-C1,在T4-DNA连接酶的催化下将两者连接构建成pEGFP-C1-hnRNP A1重组质粒,然后将重组质粒转染入HeLa细胞内,以激光共聚焦荧光显微镜观察EGFP-hnRNP A1的荧光表达情况,Western印迹法检测EGFP与hnRNP A1的融合表达情况,最后进行细胞原位杂交及细胞免疫荧光检测在氧化应激状态下EGFP-hnRNP A1蛋白与poly(A)+mRNA(应激颗粒的标记成分)及DPC1a(加工体的标记蛋白)的应激共定位。结果以单/双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒无误,激光共聚焦荧光显微镜观察和Western印迹结果检测到绿色荧光融合蛋白的表达;EGFP-hnRNP A1蛋白与poly(A)+mRNA呈现共定位,但与DPC1a无共定位关系。结论重组pEGFP-C1-hnRNPA1质粒成功构建并表达,应激状态下EGFP标记的hnRNPA1参与应激颗粒的构成。
- 高星杰宋娟葛林付雪孙晓明张纬何津岩姚智杨洁
- 关键词：绿色荧光蛋白质类HNRNPPEGFP-C1
- 人类p100蛋白与G3BP蛋白之间的结合与功能研究
- 目的：p100蛋白是一种多功能蛋白,是基因转录和pre-mRNA剪接加工的双重调控因子,由4个重复的葡萄球菌核酸酶同源性结构域SN片段和随后的Tudor-SN (TSN)结构域构成。本课题小组在前期的工作中利用p100蛋...
- 葛林
- 关键词：P100G3BP蛋白质相互作用
- 文献传递
- G3BP与p100蛋白间的结合研究
- G3BP(Ras-GTPase Activating Protein SH3 Domain Binding Protein)是一种广泛地存在于细胞胞浆中的蛋白质,可以与GAP(the Ras-GTPase-activat...
- 葛林姚智杨洁
- 文献传递
- 脂蛋白脂酶基因突变Pro207Leu致高乳糜微粒血症被引量：2
- 2004年
- 以PCR SSCP和DNA测序确定 1例 17岁女孩的脂蛋白脂酶 (LPL)基因为杂合子突变(Pro2 0 7Leu) 。
- 穆云翔赵郁杨宇虹葛林刘新宇解用虹
- 关键词：脂蛋白脂酶基因突变
- 天津市部分高校高知人群血脂水平的分析被引量：2
- 2003年
- 目的 :了解天津市部分高级知识分子的血脂状况并为进一步的防治工作提供依据。方法 :测定380名相关人员的血甘油三酯 (TG)和血总胆固醇 (TC)水平 ,并与正常参考标准进行比较分析。结果 :(1)该市部分高级知识分子的血脂水平(TG:1.80±1.12mmol/L,TC:5.46±0.94mmol/L)高于血脂异常防治对策小组推荐的正常参考标准(TG<1.7mmol/L,TC<5.2mmol/L)。(2)只有28.7%(109人)两项指标都在合适水平;TG和TC超过正常参考标准的人员分别达总体的42.6%和60.8 %。结论:该市部分高级知识分子的血脂水平令人堪忧。
- 葛林王金和赵郁步天栩程佩兰解用虹
- 关键词：血脂总胆固醇甘油三酯
- 一种针对人Tudor-SN蛋白T73位点的应激磷酸化抗体制备方法
- 一种针对人Tudor-SN蛋白T73位点的应激磷酸化抗体。本发明是以多功能人源Tudor-SN蛋白为研究对象，首先通过近红外双色激光成像及质谱分析方法确定在受到外界环境氧化应激时人Tudor-SN蛋白73位点苏氨酸发生磷...
- 杨洁高星杰苏超张毅葛林何津岩
- 文献传递
- pEGFP-C2-人类p100蛋白SN和TD片段质粒构建
- 2007年
- 目的:分别构建含有人类p100蛋白SN片段和TD片段基因的真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C2-p100-SN和pEGFP-C2-p100-TD。方法:利用EcoRI和BamHI限制性内切酶对已构建好的质粒PSG5-p100-SN和PSG5-p100-TD进行双酶切以获得目的片段p100-SN和p100-TD基因片段,回收纯化后连接到质粒pEGFP-C2上。结果:通过对重组质粒进行菌落PCR鉴定以及酶切鉴定均能从PCR产物和酶切产物中观察到p100-SN和p100-TD片段。结论:成功构建了可以在真核细胞内表达绿色荧光蛋白和目的蛋白的融合蛋白的重组质粒pEGFP-C2-p100-SN和pEGFP-C2-p100-TD,可为有关人类p100蛋白功能及作用机制研究奠定基础。
- 步天栩葛林洪敬欣姚智杨洁
- 关键词：绿色荧光蛋白质粒
- 重组真核质粒pERFP-C1-hTudor-SN-SN(1～4)的构建和表达
- 2011年
- 目的:将人类Tudor-SN蛋白SN(1～4)基因片段分别定向连入pERFP-C1质粒,使Tudor-SN蛋白SN各功能片段与红色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达。方法:以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,PCR法扩增出目的基因,利用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切法将目的片段连接到pERFP-C1载体上,再将构建成功的pERFP-C1-Tudor-SN-SN(1～4)重组质粒转染入HeLa细胞内,在荧光显微镜下观察红色荧光蛋白的表达。结果:以单/双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误,荧光显微镜下观察到红色融合蛋白的表达。结论:重组pERFP-C1-h Tudor-SN-SN(1～4)质粒构建及表达成功。
- 付晓朱梦瑜高星杰钱宝鑫王保亚赵虹葛林杨洁
- 关键词：发光蛋白质类重组融合蛋白质类HELA细胞
