李宏文
- 作品数：6 被引量：4H指数：1
- 供职机构：华中科技大学同济医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人源性Rab38荧光融合蛋白表达载体的构建及功能鉴定
- 2016年
- 目的构建人源性Rab38与EGFP融合蛋白表达载体pEGFP-Rab38,观察Rab38在人黑素细胞瘤细胞系A375中的细胞定位情况,为进一步研究Rab38在黑素代谢中的作用提供实验依据。方法收集A375细胞,提取总RNA并逆转录成cDNA。特异性引物PCR扩增Rab38片段并插入pEGFP-C3载体,随后转化至感受态大肠杆菌DH5α中,挑取单克隆菌落进行鉴定。将鉴定正确的重组表达载体转染A375细胞,检测细胞中Rab38和Tyrp1(酪氨酸酶相关蛋白1)的表达并观察Rab38的亚细胞定位。结果 pEGFP-Rab38重组质粒经菌液PCR、双酶切和测序鉴定正确;转染A375细胞后,激光共聚焦显微镜观察到Rab38定位于胞浆中,且大量聚集于细胞核周围;实时定量PCR和Western blot可检测出细胞中EGFP-Rab38融合蛋白的表达,且细胞中Tyrp1的表达明显升高。结论融合蛋白表达载体pEGFP-Rab38成功构建,观察了Rab38在细胞中的定位并初步研究了其对黑素合成关键蛋白Tyrp1的影响,为进一步研究Rab38在黑素代谢中的作用奠定了良好的基础。
- 李宏文刘晓丽张艳红邓云华张彩娥
- 关键词：重组质粒亚细胞定位
- 艾滋病误诊为Sweet综合征1例
- 2016年
- 患者男,52岁。口腔疼痛性溃疡2个月,全身散发水肿性红斑、斑块伴疼痛和瘙痒1周。皮肤科情况:颜面、躯干及四肢可见散在分布浸润性水肿性红斑及斑块,界清,部分融合,呈环状或类圆形,部分表面可见绿豆大丘疹,似水疱,部分皮疹破溃并结痂。鼻端、舌尖及舌背可见多个浅溃疡,基底潮红,上覆厚层黄白色伪膜样物。入院后按Sweet综合征对症治疗,皮损无改善,继续有新发皮损,发热加重。刮取患者舌部溃疡伪膜样分泌物镜检发现真菌菌丝,培养鉴定为白念珠菌。采用流式细胞术分析外周血发现淋巴细胞亚群Th/Ts(CD4^+/CD8^+)为0.00,HIV抗体初筛实验与确证实验均呈阳性。修正诊断:获得性免疫缺陷综合征。
- 陈露珠陈岚石小霞李宏文石娴邓云华陈兴平
- 关键词：获得性免疫缺陷综合征SWEET综合征
- 人源性Rab32荧光融合蛋白表达载体的构建及鉴定
- 2016年
- 目的构建人源性Rab32荧光融合蛋白表达载体p EGFP-Rab32,并观察Rab32在人黑素细胞瘤细胞系A375中细胞定位情况。方法收集并提取A375细胞中的总RNA,反转录成c DNA,以特异性引物扩增Rab32片段,经Xho I和Kpn I双酶切聚合酶链反应(PCR)产物和p EGFP-C3表达载体,酶切产物经胶回收、连接后转化至感受态大肠杆菌DH5a中,挑取单克隆菌落进行菌液PCR鉴定、酶切鉴定和测序分析,以确定表达载体构建正确。将构建的重组质粒转染A375细胞,Western blot检测细胞中Rab32表达水平,激光共聚焦显微镜观察其细胞定位。结果p EGFP-Rab32重组质粒经菌落PCR、双酶切和测序鉴定构建正确,转染A375细胞后,Western blot可检测出细胞中p EGFP-Rab32融合蛋白的表达,激光共聚焦显微镜观察到Rab32定位于细胞质中,且大量聚集于细胞核周围。结论p EGFP-Rab32融合蛋白表达载体成功构建,并观察了Rab32在细胞中的定位,为进一步研究Rab32在黑素代谢中的作用奠定了良好的基础。
- 李宏文张艳红邓云华张彩娥
- 关键词：融合蛋白细胞定位
- 先天性厚甲症一家系的KRT基因突变分析被引量：4
- 2014年
- 目的检测一先天性厚甲症(PC)家系的致病基因KRT6a、KRT6b、KRT16、KRT17,以期找到其可能的致病突变。方法常规收集该家系成员外周静脉血,同时采集同地区100名健康自愿者外周血作为正常对照。分别提取DNA,运用聚合酶链反应(PCR)扩增基因KRT6a、KRT6b、KRT16、KRT17的全部外显子及其侧翼内含子序列,产物纯化后直接行DNA测序,比对分析其基因突变位点和类型。结果 PC患者KRT6a基因第1号外显子存在错义突变c.521T>C(p.Phe174Ser),而正常家系成员和正常对照组均无此突变,KRT6b、KRT16和KRT17基因也未发现致病突变。结论该PC家系的患者存在一个错义突变——KRT6a基因第1号外显子c.521T>C(p.Phe174Ser)。该突变是导致PC发病的分子基础。
- 刘小丽李宏文陈露珠石娴张彩娥邓云华陈兴平
- 关键词：突变分析
- 野生型和突变型ABCB6红色荧光融合蛋白表达载体的构建
- 2016年
- 目的 ABCB6基因突变与多种疾病相关,尤其是遗传性泛发型色素异常症。为进一步研究ABCB6在色素代谢中的作用,构建野生型和突变型ABCB6红色荧光蛋白融合蛋白表达载体p DsRed-wt-ABCB6和p DsRed-L356P-ABCB6,并观察ABCB6在人黑素细胞瘤细胞系A375中细胞定位情况。方法以前期构建的p IRES2-Zs Green1-ABCB6表达载体为基础构建野生型和突变型ABCB6蛋白与红色荧光蛋白融合表达载体p DsRed-wt/L356P-ABCB6,将构建的质粒转染A375细胞,Western blot检测细胞中ABCB6的表达水平,激光共聚焦显微镜观察ABCB6在细胞中的定位。结果 p DsRed-wt/L356P-ABCB6质粒经菌落PCR、双酶切和测序鉴定正确,转染A375细胞后,Western blot检测细胞中ABCB6表达量显著增高,激光共聚焦显微镜观察到野生型和突变型ABCB6均定位于细胞质中。结论 p DsRed-wt/L356P-ABCB6融合蛋白表达载体成功构建,观察了ABCB6在细胞中的定位,为进一步研究ABCB6的功能及其在相关疾病中致病机制奠定了良好的基础。
- 李宏文陈露珠邓云华张彩娥
- 关键词：融合蛋白细胞定位
- Hailey-Hailey病四个家系的ATP2C1基因突变分析
- 2016年
- 目的检测Hailey-Hailey病(HHD)4个家系的致病基因ATP2C1,鉴定其突变位点和突变类型。方法采集4个HHD家系成员共9例患者和6名正常人,与100名无关健康对照者外周静脉血各2 ml,提取全基因组DNA。运用聚合酶链反应(PCR)扩增ATP2C1基因的全部28个外显子及其侧翼内含子序列,扩增产物纯化后进行DNA直接测序,BLAST比对分析其突变位点和突变方式。结果在9例HHD患者中共检出了3个ATP2C1基因致病突变:c.888_889ins T(p.296Tfs X2)、c.1330del C(p.443Qfs X33)和c.2416C>T(p.Arg806X)。在4个HHD家系的6名正常者和100名健康对照者中均未发现上述突变。结论在9个HHD家系患者中存在2个移码突变(c.888_889ins T和c.1330del C)及1个无义突变(c.2416C>T),其中2个移码突变为首次报道。这些突变的发现有助于HHD的诊断,并丰富了HHD相关ATP2C1突变数据库。
- 梅爱华李宏文王婷梅刘冬先邓云华
- 关键词：突变分析ATP2C1基因DNA测序
