海龙
- 作品数：11 被引量：40H指数：4
- 供职机构：天津医科大学总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金天津市应用基础与前沿技术研究计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 沉默LIMK1的表达抑制体外胶质瘤细胞的侵袭与迁移被引量：2
- 2015年
- 目的 研究LIM激酶1（LIMK1）小干扰RNA （siRNA）敲低后对人胶质瘤细胞系SNB19侵袭迁移能力的影响及机制. 方法 （1）免疫组化染色检测对照脑组织及胶质母细胞瘤组织中LIMK1蛋白的表达.（2）将SNB19分为3组：siRNA-LIMK1组（转染siRNA-LIMK1干扰片段）、siRNA-NC组（转染对照siRNA片段）、空白对照组（未转染）.采用实时定量（RT-PCR）法和Western blotting法检测3组细胞中mRNA和蛋白的表达情况.划痕实验和Transwell侵袭实验评价3组细胞的迁移和侵袭能力.免疫荧光法观察3组细胞的定位以及细胞片状伪足形态变化.Western blotting法检测3组细胞基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9以及丝切蛋白（cofilin）、磷酸化cofilin （p-cofilin）的表达. 结果 （1）免疫组化结果显示蛋白在对照脑组织呈弱阳性表达,而在胶质母细胞瘤中呈强阳性表达.（2）siRNA-LIMK1组细胞mRNA和蛋白较其他2组细胞均明显下降,差异有统计学意义（P＜0.05）.划痕实验和Transwell侵袭实验显示3组细胞创面愈合率、侵袭细胞数分别为34.33％±1.53％、75.67％±2.08％、78.33％±1.53％及40.33±5.03、136.67±5.13、143.33±2.52,差异均有统计学意义（F=608.59,P=0.000;F=515.52,P=0.000）;其中siRNA-LIMK1组创面愈合率、侵袭细胞数较其他2组明显下降,差异有统计学意义（P＜0.05）.免疫荧光结果显示LIMK1表达于细胞质特别富集于细胞前缘的片状伪足处,siRNA-LIMK1组细胞片状伪足较siRNA-NC组和空白对照组明显变小甚至不伸展.Western blotting结果显示,与siRNA-NC组和空白对照组比较,siRNA-LIMK1组MMP-2、MMP-9以及p-cofilin的表达量均明显下降,差异有统计学意义（P＜0.05）;而cofilin的表达量无明显变化,差异无统计学意义（P＞0.05）. 结论 沉默LIMK1的表达可有效抑制体外胶质瘤细胞系的侵袭和迁移,LIMK1可能成为脑胶质瘤的新的治疗靶点.
- 周华杨学军赵鹏飞张辰陈磊朱蒙于圣平周星辰海龙刘波李帅林雨
- 关键词：神经胶质瘤迁移RNA干扰
- 敲低S100A4表达对胶质瘤细胞系SNB19侵袭和迁移的影响被引量：5
- 2014年
- 目的观察siRNA敲低S100A4的表达后对胶质瘤细胞系SNB19侵袭和迁移能力的影响。方法 S100A4干扰RNA(siRNA)敲低SNB19细胞中S100A4的表达(n=3),同时设control组(空白对照组,n=3)和siRNA-NC组(阴性对照组,n=3),采用RT-PCR和western blot方法分别检测S100A4被有效敲低,划痕实验和Transwell实验分别检测细胞的迁移和侵袭能力的变化,western blot法检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和E-cadherin的表达变化,倒置相差显微镜观察细胞片状伪足变化情况。结果 siRNA技术可显著下调SNB19细胞中S100A4 mRNA和蛋白的表达水平,siRNA-NC组和siRNA-S100A4组的mRNA较control组的表达量分别是0.97±0.07和0.21±0.04(P<0.01),三个组的蛋白相对表达量分别为78.12%±2.63%、77.16%±3.00%和37.95%±2.71%(P<0.01);干扰成功后,siRNA-S100A4组与control组相比,细胞的迁移和侵袭能力分别降低了46%和55%,MMP-9和MMP-2的蛋白表达水平分别下调了62%和68%,E-cadherin的表达水平上调了154%,细胞片状伪足较对照SNB19细胞相比明显变小,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论敲低S100A4表达可降低胶质瘤细胞系SNB19的侵袭和迁移能力,提示S100A4可能成为抗胶质瘤侵袭迁移治疗的有效靶点。
- 赵鹏飞杨学军张辰陈磊周华朱蒙王垒垒赵恺于圣平林雨海龙刘波周星辰李帅
- 关键词：S100A4胶质瘤RNA干扰迁移
- NOTCH通路依赖PI3K/AKT通路调控胶质瘤干细胞增殖和自我更新能力被引量：4
- 2018年
- 目的探讨NOTCH通路对胶质母细胞瘤细胞增殖和自我更新能力调控及其潜在机制。方法体外培养LN-229、U118-MG和A172胶质瘤干细胞球;MTT实验和单细胞成球实验分别检测胶质瘤干细胞增殖和自我更新能力;靶向AKT1慢病毒载体shRNA和PI3K抑制剂LY294002抑制PI3K/AKT信号通路活性,检测NOTCH通路功能是否依赖PI3K/AKT通路;Western blot检测NOTCH通路和PI3K/AKT通路活性;BLISS独立模型评价NOTCH抑制剂DAPT和LY294002的相互作用。结果 LN-229、U118-MG和A172体外培养形成胶质瘤干细胞球;DAPT抑制NOTCH通路活性同时降低PI3K/AKT通路活性,且NOTCH通路对PI3K/AKT通路的调控不依赖于PTEN介导;DAPT抑制胶质瘤干细胞增殖和体外单细胞成球能力;ShAKT1和LY294002抑制PI3K/AKT通路活性,同时显著减弱DAPT对胶质瘤干细胞增殖和体外单细胞成球能力的抑制作用(P<0.05),DAPT和LY294002联合使用产生拮抗作用。结论NOTCH通路依赖于PI3K/AKT通路调控胶质瘤干细胞增殖和自我更新能力。
- 张欣林雨海龙李涛张辰
- 关键词：胶质瘤干细胞NOTCH信号通路
- ADAM12基因表达沉默对CD133阳性胶质瘤细胞自我更新能力的影响被引量：4
- 2016年
- 目的研究解整合素-金属蛋白酶12(a disintegrin and metalloprotease 12,ADAM12)基因表达沉默抑制CD133阳性(CD133+)胶质瘤细胞的自我更新能力。方法采用sh RNA重组慢病毒转染技术沉默胶质瘤U87细胞系ADAM12基因表达分为ADAM12基因表达干扰序列组(sh RNA-ADAM12)、阴性对照组(sh RNA-NC)及空白对照(sh RNA-C)组。通过Western blotting以及Real-time PCR验证各组细胞ADAM12表达情况;采用悬浮培养得到胶质瘤细胞球以富集CD133+的胶质瘤细胞;并通过免疫荧光染色技术检测ADAM12与CD133在细胞球与贴壁细胞的表达情况;通过神经肿瘤球形成实验检测三组细胞的自我更新能力;利用Western blotting分别检测三组细胞成球后未分化或分化相关蛋白CD133、GFAP及TUBB3以及Notch通路靶基因Hes1的蛋白表达情况。结果慢病毒转染技术可显著下调U87胶质瘤细胞ADAM12的m RNA及蛋白的表达量,sh RNA-ADAM12组与sh RNA-NC组较sh RNA-C组m RNA的相对表达量为0.22±0.03与0.98±0.06(F=425.37,P<0.01);三组ADAM12蛋白的相对表达量分别为28.72%±2.36%、69.21%±3.92%及69.04%±3.57%(F=145.42,P<0.01);免疫荧光染色显示细胞球中ADAM12与CD133表达量明显高于普通细胞;神经肿瘤球形成实验结果显示,三组成球数分别为45.5±2.3、104.2±5.8以及109.6±6.2,与sh RNA-NC组及sh RNA-C组相比,sh RNA-ADAM12组的成球能力明显降低,差异具有统计学意义(F=147.03,P<0.01)。sh RNA-ADAM12组与sh RNA-C组相比,GFAP与TUBB3蛋白表达量分别上调约166%与146%,CD133与HES1的蛋白表达量分别下调了54%与50%,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论 ADAM12基因表达沉默可能通过抑制Notch通路活性降低CD133+胶质瘤细胞的自我更新能力。
- 刘波杨学军张辰于圣平林雨海龙周星辰李帅李涛王伟程铖杨亦寒
- 关键词：解整合素-金属蛋白酶12自我更新
- MRI联合^(18)F-FDG PET和^(11)C-MET PET对颅内肿胀性脱髓鞘病变与胶质瘤的鉴别诊断作用被引量：4
- 2017年
- 目的探讨MRI联合^(18)F-脱氧葡萄糖(^(18)F-FDG)PET和^(11)C-蛋氨酸(^(11)C-MET)PET显像对颅内肿胀性脱髓鞘病变与胶质瘤的鉴别诊断价值。方法纳入经病理学直接证实或内科保守治疗间接证实的14例颅内肿胀性脱髓鞘病变患者和17例胶质瘤患者,采用MRI观察病变与周围正常脑组织界限,T1WI、T2WI和扩散加权成像(DWI)信号强度,强化征象(包括环状强化和开环状强化等),占位效应,周围脑水肿,病变中心静脉扩张,胼胝体受累,病变中心坏死,灰质受累情况;^(18)F-FDG PET和^(11)C-MET PET显像对代谢程度进行视觉分析。结果 MRI显示,颅内肿胀性脱髓鞘病变患者占位效应0级8例(8/14)、Ⅰ级4例(4/14)、Ⅱ级1例(1/14)、Ⅲ级1例(1/14),周围脑水肿Ⅰ度12例(12/14)、Ⅱ度2例(2/14);胶质瘤患者占位效应0级2例(2/17)、Ⅰ级6例(6/17)、Ⅱ级7例(7/17)、Ⅲ级2例(2/17),周围脑水肿Ⅰ度7例(7/17)、Ⅱ度10例(10/17),组间差异均有统计学意义(Fisher确切概率法:P=0.032,0.024)。^(18)F-FDG PET和^(11)C-MET PET显像对颅内肿胀性脱髓鞘病变与胶质瘤的鉴别诊断差异无统计学意义(Fisher确切概率法:P=0.182,0.081)。结论 MRI显示的占位效应和周围脑水肿可以用于鉴别诊断颅内肿胀性脱髓鞘疾病与胶质瘤,PET-CT对症状类似胶质瘤的颅内肿胀性脱髓鞘病变无明确诊断价值。
- 杨亦寒蔡莉马海文王颖白宇明浩朗于圣平任炳成林雨张凯海龙王伟程铖李涛杨学军
- 关键词：脱髓鞘疾病神经胶质瘤
- NSC23766、Y-27632对3D水凝胶中胶质瘤细胞侵袭迁移及整合素表达的影响被引量：4
- 2017年
- 目的观察分别及联合抑制Rac及Rho通路后3D水凝胶中恶性胶质瘤细胞的侵袭迁移运动形式与整合素表达的变化。方法应用脂质体介导pCMVLifeAct—TagGFP2质粒转染U87细胞．将转染后细胞分为NSC23766处理组、Y-27632处理组、NSC23766和Y-27632联合处理组、空白对照组．前3组分别加入100nmol／mLNSC23766、10nmol／mLY-27632、100nmol／mLNSC23766＋10nmol／mLY-27632，空白对照组加入等量培养基。将4组细胞在水凝胶中进行3D培养，共聚焦显微镜观察4组中类圆形细胞、梭形细胞的组成及间质运动和变形虫运动形式的转换；将接种了4组细胞的水凝胶注入细胞趋化载玻片中，于活细胞工作站观察4组细胞的侵袭迁移运动形式并计算运动速度、运动距离：免疫荧光染色观察4组细胞整合素αVβ3的表达。结果3D水凝胶培养的U87细胞具有类梭形、类圆形2种形态，相应地表现为间质运动和变形虫样运动形式。与空白对照组比较，NSC23766处理组中类圆形细胞所占比例较高，Y-27632处理组中梭形细胞所占比例较高，差异均有统计学意义（P〈0．05）。NSC23766处理组细胞的间质-变形虫运动（MAT）转换率为50．0％，Y-27632处理组变形虫一间质运动（AMT）转换率为42．8％。趋化实验结果显示NSC23766处理组、空白对照组、Y-27632处理组、NSC23766和Y-27632联合处理组细胞的运动速度和运动距离依次降低，差异有统计学意义（P〈0．05）。免疫荧光染色检测显示Y-27632处理组细胞整合素αVβ3表达显著高于其他3组．空白对照组细胞整合素αVβ3表达显著高于NSC23766处理组和联合处理组。结论3D水凝胶可以作为U87细胞培养及三维形态观察的良好基质，Racl与RohA通路靶向抑制剂的联合应用可作为控制脑胶质瘤播散的策略。
- 黄玉宝童鹿青张辰海龙李涛王伟于圣平谢祎杨学军
- 关键词：神经胶质瘤3D模型水凝胶靶向治疗
- ABL2基因表达沉默对胶质瘤细胞迁移和侵袭的影响被引量：6
- 2015年
- 目的 研究非受体酪氨酸激酶ABL2基因表达沉默对胶质瘤细胞迁移和侵袭能力的影响及机制. 方法 免疫组化染色检测正常脑组织和经病理证实的胶质母细胞瘤组织标本（分别来自天津医科大学总医院神经外科自2012年9月至2014年8月期间的癫痫、胶质瘤手术患者）中ABL2的表达.将携带ABL2抑制物核苷酸序列（shRNA-ABL2）、阴性对照核苷酸序列（shRNA-NC）的重组慢病毒转染体外培养的SNB19胶质瘤细胞,分别作为shRNA-ABL2组、shRNA-NC组,同时设不做任何处理的空白对照组,转染后48 h实时荧光定量PCR检测3组细胞ABL2 mRNA的表达;Western blotting检测3组细胞ABL2、皮层肌动蛋白、Y-421位点酪氨酸磷酸化的皮层肌动蛋白（pY-421 cortactin）的表达;划痕实验和Transwell实验评价各组细胞的迁移和侵袭能力;免疫荧光染色检测ABL2、皮层肌动蛋白在SNB19细胞中的定位情况. 结果 免疫组化染色显示ABL2在正常脑组织中表达较低,在胶质母细胞瘤中表达则较高.与shRNA-NC组、空白对照组比较,转染后shRNA-ABL2组细胞ABL2 mRNA和蛋白、pY421 cortactin蛋白的表达降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）;划痕实验显示shRNA-ABL2组细胞迁移数（72.33 ±7.64）少于shRNA-NC组、空白对照组（187.67±5.03、190.33±7.23）,Transwell实验显示shRNA-ABL2组穿膜细胞数低于shRNA-NC组、空白对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）.免疫荧光染色结果显示ABL2与皮层肌动蛋白在细胞前端伪足处共定位. 结论 ABL2在胶质母细胞瘤组织中表达较正常脑组织高.沉默ABL2表达可能通过调节pY-421 cortactin的水平来抑制胶质瘤细胞的迁移和侵袭.
- 陈磊朱蒙于圣平张辰赵鹏飞周华海龙刘波李帅周星辰林雨杨学军
- 关键词：神经胶质瘤皮层肌动蛋白
- Notch1通路活化对胶质瘤干细胞迁移和侵袭能力的影响被引量：7
- 2016年
- 目的观察Notch1通路活化对胶质瘤干细胞（GSCs）迁移和侵袭能力的影响并探讨其潜在机制。方法将U87胶质瘤细胞置于干细胞培养基中悬浮培养，使用免疫磁珠法分选获得CD133阳性的胶质瘤细胞，免疫荧光染色检测CD133及巢蛋白鉴定GSCs。将携带Notch1抑制物核苷酸序列（shRNA-Notch1）、阴性对照核苷酸序列（shRNA-NC）的重组慢病毒转染至体外培养的U87来源的GSCs中，分别作为shRNA-Notch1组、shRNA-NC组，同时设不做处理的空白对照组，在成球后行通过荧光定量PCR检测3组细胞Nowh1 mRNA的表达；Western blotting检测3组细胞Notch1、Hesl、Akt、pAkt、mTOR、pmTOR蛋白的表达；Transwell细胞迁移和侵袭实验观察3组细胞迁移和侵袭能力的强弱。结果免疫荧光染色检测显示肿瘤细胞球阳性表达神经干细胞标志物CD133和巢蛋白。与shRNA-NC组和空白对照组相比，shRNA-Notch1组GSCs的Notch1 mRNA和蛋白、pAkt、mTOR、pmTOR蛋白表达降低，差异有统计学意义（P〈0．05），而Akt蛋白水平没有明显变化，差异无统计学意义（P〉0．05）。Transwell迁移及侵袭实验均显示与shRNA-NC组和空白对照组相比．shRNA-Notch1组穿膜的细胞数目降低，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论抑制Notch1通路活性后可能通过PI3K通路来调节GSCs的迁移和侵袭能力。
- 周星辰海龙张辰刘波李帅林雨王伟李涛杨亦寒程铖于圣平杨学军
- 关键词：胶质瘤干细胞NOTCH1细胞迁移细胞侵袭
- 钙调蛋白抑制剂N-（6-氨基己基）-5-氯-1-萘磺酰胺通过逆转上皮-间充质转化抑制胶质母细胞瘤细胞的侵袭、迁移被引量：2
- 2018年
- 目的探讨钙调蛋白（CaM）抑制剂N-（6-氨基己基）-5-氯-1-萘磺酰胺（w-7）通过逆转上皮-间充质转化（EMT）抑制胶质母细胞瘤（GBM）细胞侵袭、迁移能力。方法细胞计数试剂盒（CCK-8）检测w-7对U87、U251胶质瘤细胞存活率的影响。Transwell侵袭实验检测对照组和w-7处理组穿过小室底膜的U87、U251细胞数目。划痕愈合实验检测各组U87、U251细胞相对迁移距离。Western blot法检测各组U87、U251细胞中上皮标志物（E-钙黏蛋白）和间质标志物（N-钙黏蛋白、波形蛋白）以及转录因子（ZEB1蛋白）的相对表达水平。倒置显微镜下观察各组U87、U251细胞形态变化。免疫荧光检测各组胶质瘤细胞N-cadherin的表达差异。结果w-7处理组穿过小室底膜的U87、U251细胞数少于对照组（P=0．001）；w-7处理组U87、U251细胞愈合速率低于对照组，24h后差异均有统计学意义（P=0．001、0．006）。w-7处理组中U87、U251细胞E-钙黏蛋白的相对表达水平高于对照组（P=0．001），而N-钙黏蛋白、ZEB1、波形蛋白相对表达水平低于对照组（P=0．001）。与对照组比较，w-7处理组U87、U251细胞形态呈椭圆形、圆形改变，细胞迁移能力减弱。结论CaM抑制剂w-7能够通过逆转EMT抑制GBM细胞的侵袭、迁移能力。
- 苑锋李涛刘沛东童鹿青易立海龙陶震楠马海文解杨刘宇恒杨学军
- 关键词：钙调蛋白胶质母细胞瘤上皮-间充质转化迁移
- 胶质瘤侵袭迁移靶向治疗被引量：4
- 2019年
- 恶性胶质瘤是临床最为常见的原发性中枢神经系统肿瘤,属于难治性肿瘤之一,患者多预后不良。具有高度侵袭性的胶质瘤细胞可以逃避手术最大切除,以及同步放射治疗和药物化疗,是导致治疗难以奏效和复发的主要原因。回顾本实验室相关研究结果并结合文献,阐述胶质瘤侵袭迁移的相关分子机制及靶向治疗研究进展。
- 李涛海龙杨学军
- 关键词：神经胶质瘤肿瘤侵润细胞运动分子靶向治疗
