刘晓青
- 作品数：41 被引量：42H指数：2
- 供职机构：中国农业科学院生物技术研究所更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程更多>>
- 多策略叠加提高甲基对硫磷水解酶在毕赤酵母中分泌表达量的方法
- 本发明公开了一种多策略叠加提高甲基对硫磷水解酶在毕赤酵母中分泌表达量的方法，属于提高酶蛋白在毕赤酵母中分泌表达量的领域。本发明通过单因素实验发现分别在其N端融合蛋白质标签、内质网驻留信号突变或酸稳定性突变均可在一定程度上...
- 田健伍宁丰初晓宇黄璐王平江湖刘晓青
- 热稳定性提高的酸性普鲁兰酶突变体及其编码基因和应用
- 本发明公开了一种热稳定性提高的酸性普鲁兰酶突变体及其编码基因和应用。本发明选择野生型酸性普鲁兰酶的6个位点进行定点突变，从中筛选出3个热稳定性提高的单点突变体。本发明进一步在单点突变的基础上进行组合突变，获得热稳定性和催...
- 初晓宇伍宁丰田健吕金芝常美会刘晓青
- 漆酶突变体及其应用
- 本发明公开了漆酶突变体及其应用。本发明将氨基酸序列为SEQ ID No.1所示的野生型漆酶13B22分别进行D511E、V435I、I88L、H436E、G430S、V378I、I424F、N367D、I129L、W50...
- 关菲菲田健黄火清宝雅茹罗会颖姚斌伍宁丰刘晓青张若晗
- 嗜热几丁质酶Chi304突变体及其在降解几丁质中的应用
- 本发明公开了嗜热几丁质酶Chi304突变体及其在降解几丁质中的应用。本发明通过基因共识设计氨基酸序列为SEQ ID No.1所示的几丁质酶Chi304的系列单点突变体，最终成功筛选得到酶活和热稳定性提高的单点突变体Y16...
- 关菲菲伍宁丰田健刘晓青张岩田晓倩
- 促进水稻生长和提高幼苗耐寒能力的砖红色微杆菌及其应用
- 本发明公开了具有促进水稻生长和提高幼苗耐寒能力的砖红色微杆菌及其应用。本发明公开了具有促进作物生长或提高作物耐寒能力的砖红色微杆菌(<I>Microbacterium testaceum</I>)JG117‑15，其微生...
- 刘晓青赵金彤关菲菲伍宁丰田健许国顺宝雅茹
- 文献传递
- 嗜热几丁质酶Chi304突变体及其制备方法和应用
- 本发明公开了嗜热几丁质酶Chi304突变体及其制备方法和应用。本发明通过基因共识设计氨基酸序列为SEQ ID No.1所示的几丁质酶Chi304的系列单点突变体，最终成功筛选得到酶活和热稳定性提高的单点突变体Y166F以...
- 关菲菲伍宁丰田健刘晓青张岩田晓倩
- 文献传递
- 来源于枯草芽孢杆菌的漆酶cotA基因克隆与表达及其酶学性质研究被引量：6
- 2015年
- 漆酶作为一种含铜离子的多酚氧化酶,在环境保护、生物能源、食品工业和纸浆漂白等工业中有重要的应用价值。从枯草芽孢杆菌168菌株中克隆漆酶cot A基因,全长1 542 bp,编码513个氨基酸,外加一个终止密码子。将该基因在大肠杆菌Transetta(DE3)菌株中通过微好氧发酵法进行异源表达和纯化,获得的重组酶蛋白Cot A的最适反应温度为60℃,最适p H为4.5。该酶在60℃具有较好的热稳定性,保温90 min后仍有71.70%的剩余酶活。最适反应条件下,重组酶对ABTS的Km为63.9±5μmol/L,kcat为39.1±1/s,最大反应速率为0.005μmol/L·min·mg,且在最适反应条件下,微好氧发酵法获得的重组酶蛋白Cot A的比活(557.8 U/mg)是低温诱导法(0.2 U/mg)的2 655.4倍。因此,通过微好氧发酵法可以显著提高重组漆酶Cot A的比活力。
- 余小霞刘晓青田健伍宁丰
- 关键词：漆酶基因克隆
- Pseudomonas stutzer S12过氧化氢酶基因的表达及酶学特性研究被引量：1
- 2021年
- 商品过氧化氢酶目前大部分来源于动物肝脏和黑曲霉发酵,但是这些酶通常热稳定性不好、酶活力低且售价高。为了解决这一问题,从垃圾渗滤液中筛选出来一株高产过氧化氢酶的菌株Pseudomonas stutzeri S12,通过全基因组测序和基因鉴定发现了该菌株中编码过氧化氢酶的基因katE,将其在E.coli BL21(DE3)中异源表达和纯化。KatE的最适温度为35℃,最适pH为8.0,酶比活可达到1349 U·mg^(-1),该酶在10~40℃范围内的酶活力较高,具有较为广泛的温度适应性。KatE具有较好的热稳定性,50℃处理5 h还剩余70%的酶活,60℃孵育2 h后剩余酶活仍有50%。其动力学性质V_(max)为16666μmol·L^(-1)·min^(-1),K_(m)为100.5 mmol·L^(-1)。该酶在中低温条件下酶活较好,热稳定性较好,且酶活力较高,为开发新型商品过氧化氢酶提供了新的材料。
- 赵书雪刘晓青伍宁丰田健
- 关键词：过氧化氢酶酶学特性异源表达
- 低温过氧化氢酶及其制备方法和应用
- 本发明公开了低温过氧化氢酶及其制备方法和应用。本发明从天山土壤宏基因中分离得到过氧化氢酶基因，其多核苷酸序列为SEQ ID No.1所示，编码502个氨基酸和一个终止密码子。本发明过氧化氢酶的最适温度是10‑20℃，并且...
- 刘晓青伍宁丰关菲菲田健许国顺
- 文献传递
- 基于结构基础的嗜热细菌贝斯其热解纤维素菌木聚糖酶Cb Xyn10C的热稳定性分子改良
- 2023年
- 【背景】作为降解木聚糖的核心酶种,木聚糖酶可以有效促进木质纤维素的消化水解,在动物养殖领域应用广泛。来源于嗜热细菌贝斯其热解纤维素菌(Caldicellulosiruptor bescii)的GH10家族木聚糖酶Cb Xyn10C最适温度为85℃,在80℃条件下具有良好的热稳定性,具有饲料工业应用潜力。【目的】为满足饲料制粒尤其是水产饲料加工过程的工艺要求,进一步提高木聚糖酶Cb Xyn10C的热稳定性并阐明其耐热机理。【方法】以Cb Xyn10C晶体结构为基础,采用刚性氨基酸引入、疏水作用网络重排2种策略对其热稳定性进行理性设计,获得在100℃条件下比活提高的单点突变体后,通过有益突变位点叠加策略进一步提升酶的热稳定性,最后采用分子动力学模拟技术分析其热稳定性提高的分子机制。【结果】共获得了4个稳定性提高的单点突变体A45P、T69P、F309V和A325P,其中突变体A45P效果最优。随着在A45P基础上另外3个突变位点的叠加,酶的热稳定性在不损失酶活的前提下得到了逐步提升。获得的四点突变体A45P/F309V/A325P/T69P的耐热性最好,其最适反应温度和熔解温度Tm值较野生型分别提高了5℃和6.8℃。分子动力学模拟技术分析发现4个位点的突变引入了新的氢键作用力且优化了疏水作用网络,进而导致酶的结构构象更加稳定。【结论】本研究不仅提高了木聚糖酶在饲料工业中的应用价值,而且对基于酶蛋白结构的稳定性分子改造提供了理论支持。
- 张经纬刘晓青田健罗会颖姚斌涂涛
- 关键词：木聚糖酶热稳定性
