张德宁
- 作品数：3 被引量：15H指数：2
- 供职机构：中国水产科学研究院黄海水产研究所更多>>
- 发文基金：国家科技部农业科技成果转化资金国家高技术研究发展计划中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 三疣梭子蟹GST基因的cDNA克隆及表达分析被引量：1
- 2015年
- 取健康三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)‘黄选1号’80日龄幼蟹,体重(32.66±6.27)g。通过RT-PCR及Smart-TM Race技术,克隆了三疣梭子蟹谷胱甘肽S-转移酶(glutathiones-transferase,简称GST)基因c DNA全长序列(Gen Bank登录号:KF781517)。GST基因全长1 010 bp,编码一个由216个氨基酸组成的多肽,预测理论等电点PI为5.294,分子量为24.59 k D。氨基酸序列中含有GST基因家族特有GST-N结构域和GST-C结构域。同源性及系统进化分析表明,三疣梭子蟹GST基因与中华绒螯蟹(Eriocheir sinesis)和脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)的同源性分别为78%和63%。实时荧光定量PCR结果表明,GST基因在肝胰腺、鳃、肌肉、血淋巴、心脏和眼柄中均有分布,在肝胰腺中表达量最高(P<0.05),其次是鳃(P<0.05),在心脏中表达最少。三疣梭子蟹肌肉注射低、中、高3个剂量组的磺胺嘧啶后,GST基因表达较对照组都有表达,均呈现先升高后降低再升高的趋势。同时,随着药物浓度的增加,低、中、高3个剂量组峰值出现的时间越晚,分别为6 h、24 h和48 h。本实验结果表明,磺胺嘧啶可以诱导三疣梭子蟹GST基因表达,GST基因可能参与三疣梭子蟹的药物代谢反应。
- 冯艳艳李健张德宁刘萍吕建建高保全
- 关键词：三疣梭子蟹GST实时荧光定量PCR磺胺嘧啶
- 三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)CYP2基因的cDNA克隆及表达分析被引量：3
- 2014年
- 通过RT-PCR及Smart?TM Race技术,首次克隆了三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)CYP2基因cDNA全长序列。该基因cDNA全长1662bp,编码一个由492个氨基酸组成的多肽,预测理论等电点为6.348,分子量大小为56.68kD。氨基酸序列中含有CYP基因家族所特有的K螺旋保守序列(ExxR)和血红素结合区(FxxGxxxCxG)。经氨基酸序列比对及系统进化树分析发现,与岸蟹(Carcinus maenas)的同源性最高,达到75%。实时荧光定量PCR结果表明,CYP2基因在肝胰腺、鳃、肌肉、血淋巴、心脏和眼柄中均有分布,在肝胰腺中表达量最高。肌肉注射磺胺嘧啶后,三疣梭子蟹高、中、低三剂量组CYP2基因表达较对照组都有上调,并具有时间差异性,低剂量组表达量逐渐降低,趋于对照组,中剂量组和高剂量组表达量先升高后降低,6h后同一时间点,均是高剂量组表达最高,低剂量组最低。表明磺胺嘧啶可诱导三疣梭子蟹CYP2基因,CYP2基因可能参与三疣梭子蟹的药物代谢反应。
- 冯艳艳李健张德宁刘萍葛倩倩吕建建高保全
- 关键词：三疣梭子蟹基因克隆实时荧光定量PCR磺胺嘧啶
- 三疣梭子蟹生长相关SNP位点的鉴定被引量：11
- 2015年
- 为了发掘三疣梭子蟹（Portunus trituberculatus）与生长相关的SNP,本研究基于三疣梭子蟹比较转录组学数据,筛选出生长相关候选基因片段19条,利用该基因序列设计引物进行PCR扩增,得到总长为17 387 bp的DNA片段;通过直接测序法发现74个SNP位点,分布频率为0.43/100 bp,其中转换突变的比例为80%,颠换突变的比例为20%,转换的比例远远大于颠换,符合＂transition bias＂原理。C/T（G/A）突变所占比例为60%,G/T（C/A）突变占20%,A/T突变占9.33%,G/C突变占10.67%,C/T（G/A）突变所占比例最大。内含子上突变发生的频率为1.34/100 bp,外显子上仅为0.17/100 bp,说明外显子上的碱基更加保守。通过飞行质谱法,在三疣梭子蟹生长性状分离群体中成功分型了10个SNP位点;通过卡方检验和多元方差分析的方法进行性状关联分析,发现3个SNP位点与生长性状显著相关（P〈0.05）,并且comp58070-R31位点与生长性状极显著相关（P〈0.01）;一般线性模型的多元方差分析显示,comp58070-R31位点与体重、全甲宽、甲宽3个性状极显著相关（P〈0.01）,与体长、体高2个性状为显著相关（P〈0.05）;comp46623-F49位点与甲宽显著相关（P=0.05）;comp49193-R333位点与甲宽显著相关（P〈0.05）。通过对SNP位点的多态性分析发现,三疣梭子蟹SNP标记观测杂合度（Ho）范围为0.162 8～0.833 3,期望杂合度（He）范围为0.189 6～0.591 2,并且显示SNP标记的信息量低于微卫星标记。该研究的结果将有助于推进三疣梭子蟹分子标记辅助育种进程。
- 张德宁吕建建刘萍冯艳艳高保全李健
- 关键词：三疣梭子蟹生长性状转录组SNP
