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田玉玲

作品数：1 被引量：0H指数：0
供职机构：山东大学附属济南市中心医院更多>>
发文基金：中国博士后科学基金山东省自然科学基金更多>>
相关领域：医药卫生更多>>

合作作者

文献类型

  • 1篇中文期刊文章

领域

  • 1篇医药卫生

主题

  • 1篇凋亡
  • 1篇源性
  • 1篇内源
  • 1篇内源性
  • 1篇结肠
  • 1篇结肠癌
  • 1篇抗凋亡
  • 1篇基因
  • 1篇基因治疗
  • 1篇RNA干扰
  • 1篇BAG-1基...
  • 1篇肠癌

机构

  • 1篇山东大学

作者

  • 1篇胡三元
  • 1篇孙念峰
  • 1篇徐伯栋
  • 1篇田爱玲
  • 1篇田玉玲

传媒

  • 1篇中华实验外科...

年份

  • 1篇2012
共 1 条 记 录，以下是 1-1
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排序方式：
抗凋亡Bag-1基因RNA干扰载体构建及内源性筛靶研究
2012年
目的构建Bag-1短发卡RNA（shRNA）干扰载体并通过内源性筛靶实验检测Bag-1基因mRNA和蛋白的表达，筛选出最佳的干扰靶序列。方法应用干扰技术构建Bag-1shRNA干扰载体，在细胞转染预实验中将构建好的带有绿色荧光蛋白的质粒转染Lovo细胞，通过观察绿色荧光蛋白来判断转染的效率，分别应用逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）和Westernblot法检测Bag-1在LoVo细胞中的表达。在shRNA干扰序列筛选实验中，通过定量PCR和Westernblot法来检测构建的干扰载体在LoVo细胞中的表达。结果重组质粒分别经双酶切分析，琼脂糖凝胶电泳鉴定可见清晰地切出与Bag-1及pGPHl／GFP／Neo载体大小相符的片段并与DNAMarker相符。用带绿色荧光基因的pGPHl／GFP／Neo-shNC质粒转染LoVo细胞，在转染后的第24、48及72小时分别观察到逐渐增强的绿色荧光蛋白的表达。分别应用RT—PCR和Westernblot法检测Bag-1在LoVo细胞中的表达，可见Bag-1在LoVo细胞中的mRNA和蛋白表达水平均较高。在Bag-1有效shRNA干扰序列筛选实验中，综合定量PCR及Westernblot内源筛靶结果，筛选出Bag-1-homo-825作为最佳干扰靶序列。结论成功构建针对小鼠Bag-1基因的特异性shRNA质粒，获得稳定转染的结肠癌Lovo细胞株，结果证明所构建的pGPHl／GFP／Neo—Bag-1-homo-825作为最佳干扰靶序列，显著抑制Lovo细胞Bag-1mRNA和蛋白的表达。
孙念峰田爱玲徐伯栋田玉玲胡三元
关键词：RNA干扰BAG-1基因基因治疗结肠癌
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