高苗
- 作品数：3 被引量：20H指数：1
- 供职机构：中国农业科学院烟草研究所更多>>
- 发文基金：云南省烟草专卖局(公司)科技项目湖北省烟草公司科技项目国家烟草专卖局基金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 裂解性噬菌体对烟草青枯雷尔氏菌的控制及对土壤微生物种群多的影响
- 由青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)侵染引起的烟草青枯病是烟草上主要的病害之一,裂解性噬菌体(Ralstonia phagy)∈RS-1分自中国农业科学院烟草研究所即墨试验农场烟草青枯病病圃土壤...
- 王凤龙高苗申莉莉钱玉梅余广宏王耀峰杨金广
- 关键词：烟草青枯雷尔氏菌噬菌体
- 一株裂解性青枯雷尔氏菌噬菌体的分离及生物学特性分析被引量：20
- 2015年
- 【目的】分离并纯化出一株裂解性青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)噬菌体,并测定其各项生物学特性,为开发新的抗烟草青枯病制剂提供依据。【方法】取烟草青枯病重病田中健康烟株的根际土壤制成土壤悬浮液,并通过在青枯雷尔氏菌菌液中加入过滤后的土壤悬浮液富集噬菌体,用双层平板法验证噬菌体的存在后挑取单个最大噬菌斑进行反复纯化,直到得到单一清晰的噬菌斑。纯化后的单个噬菌斑加入对数早期的青枯雷尔氏菌菌液中进行增殖培养,将增殖液按常规方法进行噬菌体颗粒浓缩后,取20μL浓缩液用磷钨酸染色并通过电子显微镜观察噬菌体的形态特征;同时将浓缩液进行SDS-PAGE电泳,观察蛋白条带大小和数量;用λ噬菌体DNA提取试剂盒提取噬菌体增殖液中的噬菌体核酸进行琼脂糖凝胶电泳,确定其基因组片段大小;最后用常规方法测定噬菌体的滴度、最佳感染复数、一步生长曲线,并通过比较加入噬菌体液前后青枯雷尔氏菌菌液的OD600值变化测定其对温度、p H、紫外线、氯仿的敏感性。【结果】分离并纯化出了一株裂解性青枯雷尔氏菌噬菌体,命名为∈RS-1,噬菌斑为圆形,清晰透明,边缘光滑,直径1—2 mm,经电镜观察其形态为蝌蚪状,头部为二十面体的立体对称,直径约为94 nm,并有一带伸缩尾鞘的长尾大约为27 nm×100 nm,按照国际病毒分类委员会分类标准,其属于有尾噬菌体目(Caudovirales),肌尾噬菌体科(Myoviridae)的裂解性噬菌体,核酸性质为ds DNA;噬菌体浓缩液经SDS-PAGE分析至少可以观察到25条蛋白条带,相对分子质量在10—100 k D,说明其蛋白外壳至少含有25个结构蛋白;将提取的DNA进行琼脂糖凝胶电泳显示其条带大于48 kb,符合肌尾噬菌体科基因组大小范围(31—317 kb);生物学特性的测定显示该噬菌体对青枯雷尔氏菌的最佳感染复数为0.01;其吸附和感染青枯雷尔氏
- 高苗杨金广刘旭刘伟孙航军申莉莉钱玉梅杨清林余广宏李锡宏王凤龙
- 关键词：青枯雷尔氏菌噬菌体生物学特性
- 一株大肠埃希菌烈性噬菌体ΦTRI-1的分离及特性分析
- 2015年
- 通过在E.coli菌液中加入土壤悬浮液共培养获得噬菌体,利用双层平板法反复纯化4次后得到单一清晰的噬菌斑。将单个噬菌斑加入对数早期的E.coli菌液中增殖培养后利用核酸抽提试剂盒提取总核酸,并分别用DNaseⅠ和RNase A对总核酸进行消化,利用限制性内切酶HindⅢ和EcoRⅠ对其进行酶切;增殖后的噬菌体液进行噬菌体颗粒浓缩,取浓缩液负染后置于电子显微镜下确定噬菌体的形态特征,并进行SDSPAGE电泳分析,确定其蛋白条带;同时测定其他生物学特性,包括滴度、最佳感染复数、一步生长曲线以及其对温度、pH、紫外线、氯仿的敏感性等。结果表明：分离并纯化出1株E.coli烈性噬菌体,命名为ΦTRI-1,形态特征：头部为二十面体的立体对称,直径约为60 nm,有一长尾,长约200 nm;其核酸属于双链DNA,按照国际病毒分类委员会分类标准,其属于有尾噬菌体目（Caudovirales）,长尾噬菌体科（Siphoviridae）的烈性噬菌体。生物学特性测定结果显示ΦTRI-1对E.coli的最佳感染复数为0.1,潜伏期约为20 min,爆发期约为60 min,裂解量约为38;ΦTRI-1在40℃时活性最高,在20-70℃活性均较强,80℃时活性丧失;其酸碱耐受力较强,在偏碱环境下活性相对更高;对紫外线有一定的耐受能力;对氯仿敏感,浓度5%的氯仿即可致其失活。分离到的噬菌体属于有尾噬菌体目,长尾噬菌体科,综合其各项生物学特性可知其潜伏期短,裂解能力强,环境适应能力强,具有很好的杀菌效果,具有开发为抗E.coli菌剂的潜力。
- 高苗杨金广孙航军刘旭刘伟王凤龙
- 关键词：ESCHERICHIACOLI噬菌体生物学特性
