乔小改
- 作品数：6 被引量：32H指数：3
- 供职机构：四川农业大学更多>>
- 发文基金：四川省科技支撑计划教育部“新世纪优秀人才支持计划”长江学者和创新团队发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 人工感染猪流行性腹泻病毒的哺乳仔猪的病理学观察被引量：18
- 2015年
- 为观察猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染的哺乳仔猪的病理学变化,选取60头健康的哺乳仔猪,随机均分为A、B两组。A组仔猪经口接种PEDV细胞毒,B组作为空白对照,观察不同发病阶段A组仔猪的临床症状、剖检变化、组织切片的病理学变化。结果显示,A组仔猪潜伏期表现比较正常,仅肠道有轻微的卡他性炎症,肠道上皮细胞肿胀。前驱期仔猪出现呕吐和腹泻,肠道和淋巴结充血严重。典型症状期仔猪出现严重的腹泻、脱水、粪便恶臭等猪流行性腹泻的典型症状,严重的陆续死亡;个别组织器官出现严重病变,如肠上皮细胞脱落、肺泡融合、脾白髓萎缩、肾出现蛋白管型等。耐过仔猪生长缓慢。结果表明,A组仔猪出现典型的猪流行性腹泻的病理学变化,且病理演变过程具有一定的规律性,其致病机理可能与对肠道、肺的组织嗜性和对淋巴结、脾的免疫抑制性有关。
- 卓秀萍朱玲乔小改陈正礼王英智刘鹏娟徐志文
- 关键词：哺乳仔猪猪流行性腹泻病毒病理学观察
- 猪嵴病毒和猪星状病毒及猪环曲病毒多重RT-PCR检测方法的建立及临床应用被引量：8
- 2015年
- 根据猪嵴病毒(PKV)3D基因、猪星状病毒(PAstV)ORF2基因和猪环曲病毒(PToV)M基因的序列,设计了3对引物,通过反应体系和条件的优化,首次建立了检测猪嵴病毒、猪星状病毒和猪环曲病毒的多重RT-PCR。本研究建立的多重RT-PCR对PKV、PAstV和PToV的最低检出限分别为1.51×104、1.19×103、1.26×104 copies/μL,同时也具有较强的特异性和良好的重复性。用该方法检测了40份来自四川省部分猪场的仔猪腹泻病样。结果显示,PKV、PAstV、PToV的阳性检出率分别为75.0%、30.0%和22.5%。与单一RT-PCR检测结果一致。本方法的建立对PKV、PAstV、PToV的鉴别诊断和混合感染检测具有重要的应用价值。
- 顾凡周远成黄剑波樊毅赵洲乔小改朱玲刘书亮徐志文
- 关键词：多重RT-PCR
- 猪伪狂犬病毒Fa株侵染对PK-15细胞microRNAs表达谱的影响
- 2016年
- 【目的】分析猪伪狂犬病毒Fa株(PRV-Fa)侵染对猪肾传代细胞PK-15 microRNAs(miRNAs)表达谱的影响。【方法】利用Illumina高通量测序技术,鉴定感染和非感染PRV-Fa的PK-15细胞的miRNAs;筛选并利用实时荧光定量RT-PCR(RT-q PCR)验证差异表达miRNAs;对差异miRNAs进行靶基因预测和Gene ontology(GO)分析。【结果】在感染和未感染PK-15细胞中分别检测到384个和405个miRNAs,其中感染PRV-Fa后差异表达的miRNAs共127个(60个上调,67个下调)。荧光定量结果显示差异miRNAs的表达趋势与高通量测序结果一致。GO分析显示,miRNAs广泛参与信号传导、细胞代谢、免疫反应、基因表达等生物学进程,其中miR-10b、miR-16、miR-18a、miR-19b、miR-20a、miR-145-5p、miR-146a、miR-181a、miR-499-5p等miRNAs与免疫相关。在靶基因调控网络图中,ssc-miR-30a-5p与ssc-miR-30d处于关键位置。研究鉴定出5个新的病毒编码miRNAs,其中PRV-miR-LLT2与PRV-miR-LLT4靶向PRV早期蛋白基因EPO。【结论】伪狂犬病毒Fa株感染对PK-15细胞编码miRNAs有显著影响。
- 刘鹏娟乔小改李萍黄剑波卓秀萍方和俊邓益超徐志文朱玲
- 关键词：猪伪狂犬病毒MICRORNASPK-15细胞
- 副猪嗜血杆菌毒力菌株和猪支气管败血波氏杆菌毒力菌株双重PCR检测方法的建立及应用被引量：6
- 2015年
- 为建立一种能同时检测副猪嗜血杆菌(Hps)毒力菌株和猪支气管败血波氏杆菌(Bb)毒力菌株快速、准确的诊断方法,依据毒力血清型Hps OMP P2和Bb DNT基因序列分别设计合成引物,通过优化反应条件,成功建立了同时检测Hps毒力菌株和Bb毒力菌株的双重PCR方法。本试验建立的双重PCR法特异性强,重复性好,最低可检测核酸质量浓度分别达到1.79×10-3 g/L及8.3×10-3 g/L。使用该方法对来自四川地区部分猪场的36份猪呼吸综合征(PRDC)病料进行检测,结果检出率分别是33.33%和5.56%,与单一PCR结果一致,但高于细菌分离鉴定的准确率。试验结果表明该方法具有临床实用性,为四川地区Hps和Bb的诊断和预防奠定基础。
- 覃娟娟顾凡蔡雨涵乔小改刘鹏娟李萍朱玲徐志文
- 关键词：副猪嗜血杆菌猪支气管败血波氏杆菌毒力菌株双重PCR
- 基于microRNA表达谱的伪狂犬病毒及其基因缺失株与PK-15细胞互作的研究
- 伪狂犬病毒(PRV)属于α疱疹病毒，严重危害猪，每年给养殖业带来重大的经济损失。gE是PRV的重要毒力基因，与gI形成的功能复合体对病毒在细胞间扩散和对神经系统的侵染有重要作用。目前gE基因缺失疫苗被广泛用于PRV的防控...
- 乔小改
- 关键词：伪狂犬病毒基因缺失株肾上皮细胞
- 文献传递
- 伪狂犬病毒SL株gL基因的克隆、原核表达、抗体制备及亚细胞定位
- 2014年
- 通过PCR从伪狂犬病毒(PRV)SL株基因组中扩增出gL基因,将产物亚克隆至原核表达载体pET-32a(+)中,测序验证后将重组质粒转化至E.coli Rosseta,进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE检测显示诱导表达蛋白约33 000,同预期大小相符,通过Western blot检测可知重组蛋白具有较好的抗原性。使用Ni 2+-Agarose His标签蛋白纯化试剂盒纯化重组蛋白,纯化后的重组蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,经琼脂扩散试验测定,效价达1∶8。通过免疫荧光技术进行PRV gL亚细胞定位检测,结果显示最早可在感染后4h的细胞质中检测到特异性荧光,并随着PRV的复制gL表达增加。试验结果为进一步研究gL基因的功能和PRV的致病机理提供了重要依据。
- 乔小改年阳阳朱玲徐志文郭万柱周远成易悦
- 关键词：伪狂犬病毒原核表达抗体制备亚细胞定位
