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张文慧: 作品数：18 被引量：27H指数：3; 供职机构：扬州大学动物科学与技术学院更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金江苏高校优势学科建设工程资助项目更多>>; 相关领域：农业科学医药卫生生物学环境科学与工程更多>>

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miRNA-31通过靶向Stra8调控鸡SSC减数分裂: Stra8是在哺乳动物生殖细胞中有丝分裂转变为减数分裂时表达的特异性基因,在哺乳动物和鸟类的减数分裂发生中起关键作用.因此,cSSCs(鸡精原干细胞)中Stra8通路的研究可以更深入地了解鸟-类精子发生.miRNA也是S...; 王颖洁左其生张文慧何娜娜孙长花张亚妮李碧春; 关键词：精原干细胞减数分裂

CRISPR/Cas技术可有效介导家鸡基因敲除被引量：8: 2016年; 本研究旨在家鸡上建立一种高效、稳定的基因组定点编辑技术体系,实现目的基因定点敲除,为后续家鸡基因编辑提供操作依据。基于NCBI数据库提供的CDS序列克隆C2EIP(chr2,Expression In PGC)基因全长,并根据基因序列中APM的位置设计特异性gRNA1、gRNA2和gRNA3,并构建cas9/gRNA载体;将设计好的cas9/gRNA转染状态良好的DF-1,利用Luciferase SSA重组检测法、T7E1酶切法以及TA克隆测序法检测gRNA在DF-1细胞中基因的敲除效率。Luciferase SSA重组检测结果表明,只有cas9/gRNA3载体具有基因敲除活性,荧光活性比对照组高两倍,T7E1酶切结果显示cas9/gRNA3基因的敲除活性为27%,TA克隆测序结果表明,30个测序菌液中有8个菌液出现不同数目的碱基缺失或增加,初步估计基因敲除效率为26%。通过本研究在家鸡中初步建立了cas9介导的基因敲除技术,该技术能够稳定的在鸡的细胞DF-1上介导基因敲除。; 左其生王颖洁赵瑞丰程少泽汪怡临靳锴王飞纪艳芹路镇宇张文慧张亚妮李碧春; 关键词：基因敲除

GST pull-down联合质谱分析技术筛选鸡NOS2的互作蛋白被引量：2: 2020年; 为了筛选NOS2在鸡雄性生殖细胞形成过程中的互作蛋白,通过克隆NOS2序列,构建pGEX-6p-NOS2原核表达载体且诱导表达NOS2蛋白,采用GST pull-down联合质谱分析技术筛选与鸡NOS2相互作用的蛋白质。结果显示:经GST pull-down质谱分析鉴定到316个与鸡NOS2相互作用的候选蛋白质,其中12个高评分蛋白具有相同的功能注释,参与精子运动调控,且主要分布在细胞质、细胞核等细胞组分中,可能通过与其它蛋白质、核酸等分子结合而参与MAPK、Notch等信号通路;质谱分析还发现GOT1蛋白与NOS2互作最为明显,该蛋白参与Notch信号通路,后续将作为重点候选互作蛋白以探究其与NOS2蛋白的互作方式。该结果为进一步探究NOS2在鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化中的调控机制奠定了实验基础。; 周鑫琦王颖洁张文慧张文慧; 关键词：NOS2 蛋白质相互作用

睾酮诱导鸡胚胎干细胞向雄性生殖细胞分化的研究被引量：4: 2015年; 试验旨在探讨睾酮对鸡胚胎干细胞(ESCs)向雄性生殖细胞分化过程中的诱导作用效果。首先对睾酮的适宜诱导浓度进行筛选,再联合支持细胞和维甲酸(RA)对传至2代的ESCs进行诱导,通过形态学观察、实时荧光定量PCR及免疫细胞化学对诱导结果进行检测。结果表明:单独使用睾酮诱导,未出现精原干细胞(SSCs)样细胞;睾酮与支持细胞联合诱导时,在第6天有少许类胚体出现,至第12天,有少量SSCs样细胞;睾酮联合支持细胞和RA诱导过程中,诱导第2天出现类胚体,诱导第12天后出现类SSCs样细胞。实时荧光定量PCR结果显示,睾酮+支持细胞组中,ESCs标记基因Nanog、Sox2表达量均呈持续下调趋势,Dazl、integrinβ1、Stra8表达量持续上调;睾酮+支持细胞+RA共同诱导组中,各标记基因与ESCs向生殖细胞分化过程中各基因表达的趋势一致,并且Dazl的表达量明显高于对照组。睾酮单独诱导不能使ESCs向雄性生殖细胞分化,但有促进支持细胞和RA诱导效果的作用,该结果为进一步研究雄性生殖细胞的形成和调控机制提供理论基础。; 张晨蒋一秀王颖洁赵瑞丰王曼张文慧靳锴汪怡临张亚妮李碧春; 关键词：鸡胚胎干细胞雄性生殖细胞分化睾酮

鸡胚胎干细胞向精原干细胞分化过程中关键lncRNA的筛选: 本文旨在探索鸡胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ESC)向精原干细胞(Spermatogonia stem cell,SSC)分化过程中关键lncRNA 及靶基因,并探究其作用机制,为ESC 体外向SS...; 李东纪艳芹王颖洁王飞路镇宇何娜娜靳锴汪怡临程少泽王曼张文慧张晨赵瑞丰张亚妮李碧春; 关键词：胚胎干细胞原始生殖细胞精原干细胞靶基因

脂代谢通路对鸡雄性生殖细胞分化的调控机制的研究: [目的]探索家鸡雄性生殖细胞分化过程中脂代谢相关基因以及信号通路的调控机制,以期为完善体外诱导体系提供依据.[方法]采用流式细胞分选法获得纯度较高的胚胎干细胞(embryonicstem cell,ESC)、原始生殖细胞...; 左其生张蕾连超肖天荣王颖洁汤贝贝王飞纪艳芹路镇宇赵瑞峰张文慧张亚妮李碧春; 关键词：RNA-SEQ 雄性生殖细胞视黄酸脂代谢

鸡Dazl基因启动子活性检测及其诱导剂的初步筛选被引量：1: 2016年; 论文旨在确定Dazl基因核心启动子活性调控区,并比较不同诱导剂的诱导效率,筛选出最佳基因诱导剂。用PCR技术扩增不同长度的Dazl基因启动子,插入到pEGFP-N1和/或pGL3-basic载体中,构建重组载体;再将这些重组载体分别转染DF-1细胞系和GC-1细胞系,使用双荧光素酶报告基因检测系统测定其转录活性,确定Dazl基因启动子核心活性区域;添加单因素或多因素诱导因子,比较不同诱导剂以及诱导剂组合对鸡Dazl基因启动子活性的影响大小。如皋黄鸡Dazl基因的-932bp^-186bp区域在DF-1和GC-1两种细胞中,都有不同程度的启动活性,而-186bp^-39bp启动子活性几乎完全丧失;诱导剂筛选结果表明,FSH+E2组和Am80组、E2组能够显著提高Dazl基因启动子的活性,RA组、ATRA组、FSH组和睾酮组都不同程度地提高了启动子的活性,而睾丸提取液和BMP4对启动子活性没有显著影响。通过体外诱导实验筛选出如皋黄鸡Dazl基因最适诱导剂,为鸡ESCs体外向雄性生殖细胞分化的细胞诱导剂进一步筛选奠定了基础。; 金晶朱睿王颖洁左其生王曼张文慧张亚妮李碧春; 关键词：核心启动子

成纤维生长因子8(FGF8)对鸡胚胎干细胞向精原干细胞分化的研究: 精原干细胞(SSCs)的形成为精子的发生提供了基础.成纤维细胞生长因子家族对SSCs的形成至关重要,FGF8调控SSCs生成的功能需要深入研究. 目的：本试验旨在研究FGF8对鸡胚胎干细胞(ESCs)向精原干细...; 王曼金晶张文慧李婷婷左其生张亚妮李碧春; 关键词：鸡胚胎干细胞精原干细胞细胞分化

鸡蛋开窗法对嵌合体鸡制备效率的影响: 2015年; 将受体种蛋分为3组,分别经换壳法、钝端开窗法和赤道面开窗后,比较3种开窗方法对孵化率的影响;分离培养鸡胚胎干细胞(ESCs),体外培养传代后用线性化的质粒p EGFP-N1转染鸡ESCs,比较显微注射时3种不同的处理方法对孵化率的影响;对获得的嵌合体鸡分别提取血液和组织DNA后进行PCR检测。结果表明:赤道面开窗法的孵化率显著高于换壳法和钝端开窗法(P<0.01);开窗后,显微注射经转染的ESCs组孵化率显著低于其他2组(P<0.01);PCR检测结果显示,有四只嵌合体鸡的部分器官表达了EGFP基因,其中两只鸡的性腺发生EGFP基因的嵌合。表明赤道面开窗后,对受体鸡胚下腔显微注射经转染的ESCs可以生产嵌合体鸡,产生嵌合体鸡的效率为4.17%。; 王颖洁张文慧左其生李东张蕾汤贝贝连超肖天荣张亚妮李碧春; 关键词：开窗法显微注射

小鼠DAZL基因启动子核心区域分析及甲基化对其启动活性的影响: 2016年; 旨在确定小鼠DAZL启动子基本活性区,并分析启动子区域甲基化对其启动子活性的影响,探究小鼠DAZL的表达调控机制。采用PCR法扩增不同长度的小鼠DAZL启动子,插入到p EGFP-N1和p GL3-Basic载体,构建重组载体。将重组载体转染GC-1细胞系,并通过添加适量DNA甲基化转移酶抑制剂(5-azacytidine,5-aza-C)逆转各试验组启动子片段的甲基化水平,然后利用双荧光素酶报告基因检测系统检测DAZL活性变化。双荧光素酶活性检测结果表明,小鼠Dazl启动子基本活性区域为5’侧翼区-370^-36 bp,在-370^-166 bp区域存在不可或缺的重要调控元件;经5-aza-C处理后,各缺失片段载体转染的GC-1细胞DAZL的启动子活性与对照组相比均有不同程度的提升,但差异不显著。本试验确定了小鼠DAZL启动子基本活性区域,证明降低小鼠睾丸DAZL启动子区域甲基化水平,有助于DAZL在生殖细胞中特异性表达,为进一步探究DAZL生物学功能和调控机制提供参考。; 王颖洁张文慧朱睿左其生李东王飞路镇宇纪艳芹王曼张亚妮李碧春; 关键词：DAZL 启动子甲基化基因活性

张文慧

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