尹可欣
- 作品数：4 被引量：0H指数：0
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治专项国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 中试规模纯化重组鼠疫rF1-V融合蛋白及其免疫原性分析
- 2016年
- 重组F1-V融合蛋白(rF1-V)是目前在进行临床研究的鼠疫亚单位疫苗的主要成分。本研究摸索了rF1-V的可溶表达条件,并对条件进行了优化和放大,确定的中试发酵工艺为:在重组菌对数生长期中期加入50μmol/LIPTG,25℃诱导表达5h。通过硫酸铵分级沉淀、离子交换、疏水相互作用层析和凝胶过滤四步纯化,最终得到纯度为99%、回收率大于20%且各项检测指标合格的蛋白。在此基础上,将蛋白使用氢氧化铝佐剂进行吸附,在小鼠体内进行了免疫原性研究。ELISA测定两次皮下免疫后血清的抗体滴度。比较融合蛋白免疫组(rF1-V)与单一抗原免疫组(rF1、rV)以及联合抗原免疫组(rF1+rV)之间体液免疫反应的差异。结果显示:20μgrF1-V免疫剂量组诱导的抗F1抗体滴度明显高于其他组,抗V抗体滴度与其他组相比没有显著差异。表明本工艺制备的rF1-V抗原有望作为鼠疫亚单位疫苗的主要组分。
- 房婷任军张金龙尹可欣杨秀旭于蕊张晓鹏于长明
- 关键词：鼠疫耶尔森菌免疫原性亚单位疫苗
- 基于鞭毛蛋白佐剂的鼠疫炭疽联合疫苗初步研究
- 鼠疫和炭疽均属于自然疫源性烈性传染病，严重威胁着人类的健康安全。这两类疾病的病原体鼠疫耶尔森氏菌和炭疽芽胞杆菌均被美国列为反恐重点病原体，最高优先级A类病原体。此外，我国存在大范围的鼠疫和炭疽的高发地，近年来国内鼠疫、炭...
- 尹可欣
- 关键词：疫苗免疫鼠疫炭疽
- 文献传递
- 应用噬菌体随机肽库技术筛选鼠疫耶尔森菌F1抗原中和性表位
- 2015年
- 目的:筛选鼠疫耶尔森菌F1抗原的中和性表位,构建基于鞭毛蛋白佐剂的重组表位疫苗。方法:利用鼠疫菌F1抗原的中和抗体F2H5筛选噬菌体随机12肽库,对得到的阳性克隆采用ELISA进行特异性鉴定,采用竞争抑制ELISA确定具有竞争性的噬菌体单克隆并对其DNA测序,重组表达并纯化获得肽序列与截短型鞭毛蛋白Fli Cdel的融合蛋白,并通过Western印迹和ELISA鉴定重组蛋白与F2H5的结合。结果:获得了2株能够与F1抗原竞争结合F2H5的噬菌体单克隆12-1和12-14,其中12-14的竞争能力较强;通过序列比对,并没有发现这2株噬菌体克隆的插入肽序列与F1抗原序列存在一致性,但这2个插入肽序列与Fli Cdel的重组蛋白在Western印迹和ELISA结果中均显示出能够被抗F1的单克隆抗体识别。结论:F1中和性抗体筛选出的肽序列与截短的鞭毛蛋白融合表达后能够被F2H5特异性识别,为进一步对重组表位抗原进行免疫保护评价奠定了基础。
- 尹可欣迟象阳任军房婷刘树玲刘炬杨秀旭李建民于长明
- 关键词：鼠疫耶尔森菌F1抗原噬菌体随机肽库表位
- 鼠疫耶尔森菌F1-V融合蛋白改构体的构建、原核表达及纯化
- 2015年
- 目的：通过基于结构的基因突变获得鼠疫耶尔森菌F1抗原突变体（F1mut）,克隆、表达并纯化F1mut-V融合蛋白。方法：通过3轮PCR,将编码F1抗原分子N端1~14位氨基酸的基因序列移到3＇端,测序无误后将F1mut基因与V基因的5＇端连接,构建改构的融合基因F1mut-V,将其克隆到原核表达载体p ET-32a后转化大肠杆菌BL21（DE3）,经IPTG诱导后,目的蛋白为可溶性表达,通过硫酸铵分级沉淀、阴离子交换层析、疏水相互作用层析和凝胶过滤层析纯化,用SDS-PAGE和Western印迹分析纯化产物。结果：重组F1mut-V在大肠杆菌中为可溶性表达,表达量占全菌蛋白的25%以上,纯化后目的蛋白的纯度达95%,经Western印迹检测,与抗V、F1抗体均有特异性结合。结论：重组F1mut-V有望成为新一代亚单位疫苗的有效成分。
- 房婷尹可欣任军张晓鹏于蕊宋小红杨秀旭于长明
- 关键词：鼠疫耶尔森菌F1抗原突变体
