任军
- 作品数：29 被引量：26H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 人破伤风免疫噬菌体单链抗体库的构建及体外亲和筛选被引量：3
- 2013年
- 目的构建人破伤风免疫噬菌体单链抗体库,筛选抗破伤风毒素重链C端(TeNT-Hc)的特异性单链抗体(scFv)。方法利用RT-PCR从5名破伤风抗体滴度较高的健康献浆员外周血淋巴细胞中获得全套人破伤风抗体VH和VL基因,经过重叠PCR将VH和VL基因连接获得scFv片段。将scFv片段克隆至pCANTAB5E载体,电转化大肠TG1感受态菌,获得抗体库。以TeNT-Hc为抗原对抗体库进行3轮筛选,获得特异性人源性抗TeNT-Hc单链抗体。scFv由pET32a(+)表达载体表达,产物包涵体采用HisTrap FF预装柱纯化并透析复性。采用非竞争酶免疫实验法测定scFv亲和常数(affinity constant,KD值)。检测scFv抑制TeNT-Hc与神经节苷脂GT1b结合的体外中和活性,计算抑制率。结果构建库容量为1×108的人破伤风免疫噬菌体单链抗体库,经过筛选获得3株特异性较好的人源性抗TeNT-Hc单链抗体。原核表达结果显示,3株scFv均以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的40%～45%。包涵体经洗涤、纯化和复性后,scFv均保持了与TeNT-Hc的特异结合活性,1 L培养物经纯化后可获得4～6 mg scFv蛋白。亲和力测定结果,27G、22D和S-4-7H-scFv的KD值分别为(1.25×10-7),(2.31×10-7)和(1.97×10-7)mol/L。3株抗体对TeNT-Hc与神经节苷脂GT1b结合的抑制率分别为64.5%,58.6%和51.5%。结论人破伤风免疫噬菌体单链抗体库的构建及具有体外中和活性的特异性抗TeNT-Hc单链抗体的获得,为人破伤风基因工程中和抗体的制备奠定了良好基础。
- 王晗于蕊张晓鹏任军谢娜樊红艳张金龙房婷于长明陈薇
- 关键词：破伤风破伤风毒素单链抗体逆转录聚合酶链反应细菌噬菌体
- 联合疫苗应用现状及评价被引量：5
- 2009年
- 联合疫苗含有两种或多种免疫原(活的、灭活的病原体或者提纯的抗原),用于预防多种疾病或由同一病原体的不同亚型或血清型引起的疾病,可以避免常规免疫多次注射的问题。然而和单价疫苗相比,联合疫苗研发的复杂性大大增加,将多种免疫原混合到一起进行免疫时不同免疫原间可能因为物理、化学和免疫学机制而干扰其他免疫原的免疫反应,此外佐剂和防腐剂等非活性成分也可能对联合后的活性成分产生影响,这就对联合疫苗的评价提出了特别的要求。现就联合疫苗的研究应用现状、临床评价和发展前景等方面做一综述。
- 任军李建民陈薇
- 关键词：联合疫苗有效性安全性
- 利用SEC-HPLC测定鼠神经生长因子的纯度被引量：1
- 2013年
- 目的：建立检测鼠神经生长因子（mNGF）纯度的分子排阻高效液相色谱法（SEC-HPLC）。方法：利用TSK G3000 SWXL分析柱和Waters 2695/2487高效液相色谱系统检测mNGF标准品纯度，并对方法的专属性、线性、重复性、中间精密度、检测限及耐用性等指标进行评估。结果：空白溶剂在mNGF积分范围内无特异峰出现；样品浓度与吸收峰之间线性回归系数R2=0.9998；6次进样峰面积相对标准偏差（RSD）为1.18%；中间精密度分析RSD为0.45%；检测限为0.2μg；耐用性实验表明磷酸盐浓度在0.2~0.3 mol/L之间变动对检测结果无影响。结论：各项指标符合规定，SEC-HPLC法可用于检测mNGF的纯度。
- 张金龙任军付玲宋晓红陈俭勤吕鹏侯利华
- 关键词：鼠神经生长因子纯度
- 人源抗破伤风毒素单链二硫键稳定抗体的重组设计与表达被引量：3
- 2013年
- 目的构建人源抗破伤风毒素重链C端单链二硫键稳定抗体原核表达载体,并进行原核表达和生物学特性鉴定。方法采用PCR定点突变的方法,获得二硫键稳定的抗破伤风毒素重链C端(TeNT-Hc)单链抗体基因(27G-scdsFv)。连接pET22b(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)工程菌,IPTG诱导表达,SDS-PAGE、Western blot法鉴定表达产物。ELISA检测27G-scdsFv体外抗原特异结合活性和抗体相对稳定性;非竞争酶免法检测抗体亲和力。采用免疫荧光法检测27G-scdsFv体外中和活性。结果测序结果显示获得正确的27G-scdsFv基因。原核表达scdsFv以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的50%。复性后的27G-scdsFv保持了与TeNT-Hc的特异结合活性,亲和力较其scFv形式略有提升,KD=0.93×10-7mol/L,1 L培养物可获得5 mg scdsFv蛋白。27G-scdsFv的稳定性较scFv形式明显增强。27G-scdsFv在体外可以明显抑制TeNT-Hc与神经元细胞的结合。结论成功构建人源抗破伤风毒素重链C端单链二硫键稳定抗体原核表达载体,并获得有活性的目的蛋白,为27G-scdsFv的进一步生物学功能研究奠定基础。
- 王晗于蕊张晓鹏任军谢娜樊红艳张金龙房婷于长明陈薇
- 关键词：原核表达
- 结核分枝杆菌Rv3881c抗原鼠单克隆抗体的制备及初步鉴定
- 2011年
- 目的:制备抗结核分枝杆菌Rv3881c抗原鼠mAb。方法:采用杂交瘤技术,获得了11株针对结核分枝杆菌Rv3881c抗原鼠mAb杂交瘤细胞株,对其中的5株进行了小鼠腹水的制备及相关鉴定。结果:5株mAb的腹水效价达到1∶32 000～1∶512 000,将这5株mAb进行了纯化,纯化后纯度大于90%,抗体亚类(型)均为IgG1/κ型,ELISA结果显示制备的mAb与结核分枝杆菌Rv3881c抗原可发生特异反应。结论:制备了抗结核分枝杆菌Rv3881c抗原鼠mAb,为结核分枝杆菌Rv3881c生物学功能的研究奠定基础。
- 刘树玲李浩任军付玲李建民侯利华徐俊杰陈薇
- 关键词：结核分枝杆菌杂交瘤MABELISA
- 一种抗鼠疫杆菌F1抗原的单克隆抗体及其应用
- 本发明公开了一种抗鼠疫杆菌F1抗原的单克隆抗体，以及所述抗体在制备鼠疫治疗药物中的应用。本发明公开的抗体具有特异的抗原结合性、低免疫原性以及良好的动物保护功能。
- 陈薇李建民张金龙任军李冰宋小红于婷刘树玲
- 文献传递
- 前列腺干细胞抗原与热休克蛋白70羧基端结构域的融合表达及纯化
- 2012年
- 目的构建前列腺干细胞抗原(prostate stem cell antigen,PSCA)及热休克蛋白70(heat-shock protein,HSP70)羧基端结构域的重组表达质粒,对重组融合蛋白进行诱导、表达及纯化,为肿瘤疫苗的研究奠定基础。方法克隆人HSP70羧基端基因及PSCA基因,构建重组表达载体pET21-PSCA-HSPC,重组融合蛋白经(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPTG)进行诱导表达,利用单克隆抗体进行Western blot鉴定,最后进行蛋白纯化。结果成功构建了重组表达质粒pET21-PSCA-HSPC;SDS-PAGE结果显示目的蛋白以可溶性形式存在,经镍柱亲和层析、苯基柱疏水及凝胶过滤柱纯化后,重组融合蛋白纯度在95%以上。结论该研究成功实现了PSCA与HSP70羧基端结构域的可溶性表达。
- 董磊张晓鹏易绍琼任军侯利华付玲于长明陈薇
- 关键词：前列腺干细胞抗原热休克蛋白
- 军事医学人才评价三维模型初步构建被引量：1
- 2014年
- 该文基于军事医学人才评价相关概念和评价系统的科学认识,构建了以评价目标、评价主体、评价客体组成的军事医学人才评价三维模型,着重分析了评价模型各维度的关键影响因素,探讨了评价模型的特征和规律,初步讨论了评价模型的应用。
- 李攀赵东升任军王松俊
- 关键词：军事医学三维模型
- 抗鼠疫耶尔森菌荚膜抗原F1嵌合抗体的制备及活性分析被引量：1
- 2013年
- 目的在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中表达抗鼠疫耶尔森菌荚膜抗原F1嵌合抗体,并对其活性进行分析。方法将具有保护活性的鼠源单克隆抗体(mAb)的轻、重链可变区基因,分别与人κ型轻链恒定区、IgG1重链恒定区基因融合后构建轻重链嵌合抗体基因,克隆到T载体上进行序列测定确证。然后分别构建含有嵌合轻、重链基因的表达载体pcDNA3.1-L和pcDNA3.1-H。构建完成的表达载体电转化CHO-S细胞,G418筛选获得稳定表达细胞株。扩大培养、收集上清用MabSelect Sure亲和层析填料纯化。纯化后的抗体进行SDS-PAGE、ELISA、Western blot分析以及小鼠体内保护活性评价。结果 PCR鉴定及测序结果表明pcDNA3.1-H和pcDNA3.1-L构建完成,序列正确;Dot blot结果表明获得表达量高的稳转株细胞;SDSPAGE及Western blot法证明抗体纯化获得成功,ELISA结果表明该抗体具有结合与F1抗原的活性;小鼠体内攻击实验表明其保护活性与鼠mAb大致相同。结论成功在CHO-S细胞中表达了具有中和活性的抗F1人-鼠嵌合抗体。
- 张金龙任军于婷宋小红付广成刘树玲张章李冰李建民
- 关键词：鼠疫F1嵌合抗体中国仓鼠卵巢细胞
- 应用噬菌体随机肽库技术筛选鼠疫耶尔森菌F1抗原中和性表位
- 2015年
- 目的:筛选鼠疫耶尔森菌F1抗原的中和性表位,构建基于鞭毛蛋白佐剂的重组表位疫苗。方法:利用鼠疫菌F1抗原的中和抗体F2H5筛选噬菌体随机12肽库,对得到的阳性克隆采用ELISA进行特异性鉴定,采用竞争抑制ELISA确定具有竞争性的噬菌体单克隆并对其DNA测序,重组表达并纯化获得肽序列与截短型鞭毛蛋白Fli Cdel的融合蛋白,并通过Western印迹和ELISA鉴定重组蛋白与F2H5的结合。结果:获得了2株能够与F1抗原竞争结合F2H5的噬菌体单克隆12-1和12-14,其中12-14的竞争能力较强;通过序列比对,并没有发现这2株噬菌体克隆的插入肽序列与F1抗原序列存在一致性,但这2个插入肽序列与Fli Cdel的重组蛋白在Western印迹和ELISA结果中均显示出能够被抗F1的单克隆抗体识别。结论:F1中和性抗体筛选出的肽序列与截短的鞭毛蛋白融合表达后能够被F2H5特异性识别,为进一步对重组表位抗原进行免疫保护评价奠定了基础。
- 尹可欣迟象阳任军房婷刘树玲刘炬杨秀旭李建民于长明
- 关键词：鼠疫耶尔森菌F1抗原噬菌体随机肽库表位
