吕小婷
- 作品数：3 被引量：10H指数：2
- 供职机构：福建农林大学动物科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金福建省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 番鸭呼肠孤病毒σNS蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：7
- 2015年
- 为制备番鸭呼肠孤病毒(MDRV)YB株σNS蛋白的多克隆抗体,首先经RT-PCR扩增了σNS基因的完整编码序列,并成功构建了重组表达质粒pET-YB-σNS。将其转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后,SDS-PAGE显示成功高效表达出分子质量约为58ku的融合蛋白。该融合蛋白以包涵体和可溶性蛋白两种形式存在,表达时的最佳诱导时间、IPTG诱导浓度、诱导温度分别为4h、1mmol/L和37℃。通过对包涵体和可溶性蛋白进行尿素洗涤纯化和(或)Ni 2+柱亲和层析纯化,得到了高纯度的重组蛋白。分别对纯化前、后的重组蛋白进行Western-blot分析,结果显示两者均可以与MDRV阳性血清发生特异性反应,表明它们具备良好的反应原性。将纯化后的可溶性σNS蛋白免疫家兔,制备的多克隆抗体ELISA效价达1∶32 000。上述研究结果为后续MDRVσNS蛋白功能研究奠定了基础。
- 朱二鹏崔龙萍吕小婷余深翼周五朵吴异健吴晓平吴宝成
- 关键词：番鸭呼肠孤病毒原核表达纯化多克隆抗体
- 番鸭呼肠孤病毒σNS基因真核表达载体的构建及其在DF-1细胞中的表达被引量：1
- 2016年
- 为实现番鸭呼肠孤病毒（MDRV）YB株σNS蛋白的真核表达,首先经PCR扩增了σNS基因的完整编码序列（CDS）,连接到携带有flag标签的真核表达载体pCI-neo-flag,双酶切鉴定及序列测定表明成功构建了重组表达质粒pCI-flag-σNS,使用ViaFect转染试剂将其转染至DF-1细胞,采用半定量RT-PCR法检测σNS基因的转录水平,Western-blot分析σNS蛋白的表达。RT-PCR结果显示,σNSmRNA水平在转染后0~36h逐渐递增,48h时出现下降;Western-blot鉴定结果显示,重组σNS蛋白与flag鼠单克隆抗体和MDRV-σNS兔多克隆抗体均能发生特异性反应;以上结果均表明MDRV-YBσNS基因在DF-1细胞中得到了正确的表达,为后续蛋白功能研究奠定了基础。
- 朱二鹏吕小婷余深翼周五朵吴异健吴晓平吴宝成
- 关键词：番鸭呼肠孤病毒真核表达蛋白免疫印迹
- 番鸭呼肠孤病毒σA蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备被引量：6
- 2016年
- 为实现番鸭呼肠孤病毒（MDRV）σA蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备,采用RT-PCR扩增了MDRV-YB株σA基因的完整编码序列（CDS）,双酶切并连接至表达载体p ET-32a（＋）中,将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）,IPTG诱导蛋白表达,并对表达产物进行SDS-PAGE分析;随后对重组σA蛋白进行Ni2＋柱亲和层析纯化,用Western-blot鉴定纯化后重组蛋白的活性;最后以纯化后的包涵体蛋白为抗原免疫新西兰兔,制备多克隆抗体,并用ELISA法检测其效价,Western-blot鉴定其特异性。SDS-PAGE分析表明,成功表达出分子质量约为64.2 ku的融合蛋白,且主要以包涵体形式存在;其IPTG诱导最佳时间、浓度和温度分别为6 h、1.2 mmol/L和24~27℃;经Ni2＋柱纯化获得了高纯度重组σA蛋白;Western-blot结果显示,纯化前、后的重组蛋白均可以与MDRV阳性血清发生特异性识别,说明纯化后的重组σA蛋白依然保留良好的反应原性;ELISA测得多抗血清的效价大于1∶32 000,Western-blot鉴定进一步证实制备的多克隆抗体可与重组σA蛋白发生特异性反应,为MDRVσA蛋白生物学功能研究奠定了基础。
- 吕小婷廖加磊孙雪宁胡万荣朱二鹏吴异健吴宝成
- 关键词：番鸭呼肠孤病毒原核表达多克隆抗体
