张星亮
- 作品数：10 被引量：50H指数：3
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- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 线粒体自噬受体Nix蛋白的原核表达及其纯化
- 2015年
- 目的获得可用于蛋白晶体筛选的高纯度及构象均一的Nix蛋白。方法将Nix截断基因构建到原核载体并转化大肠杆菌。异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达后通过GST柱亲和纯化目标蛋白。TEV酶切除GST标签后采用凝胶过滤层析进一步纯化。结果 Nix截断基因成功构建到p GEX-4T-2并诱导表达了目标蛋白。通过GST亲和层析得到了可溶性的携带GST标签的Nix（2∽135）蛋白。切除GST标签的Nix（2∽135）通过凝胶过滤层析得到了构象均一的单体蛋白。结论采用原核表达、亲和层析和凝胶过滤层析可获得纯度高且构象均一的单体Nix蛋白。
- 熊英环林千文吴湘涛张星亮
- 关键词：凝胶过滤层析
- PVP和PKP术式骨水泥注射量与术后椎体高度及疼痛评分的相关性分析被引量：10
- 2015年
- 目的回顾性对比分析椎体成形术（PVP）及椎体后凸成形术（PKP）治疗脊柱压缩性骨折的中期临床疗效，分析术中骨水泥用量与术后椎体高度及疼痛评分的相关性。方法选择2008～2012年胸腰椎压缩性骨折患者共372例，共472个椎体，按术式不同，分为PVP及PKP两组。对472个椎体的术中骨水泥注射量与术后椎体高度，及骨水泥注射量与术后疼痛VAS评分的相关性进行了分析，同时对比了两组患者的骨水泥渗漏发生率及术后2年的椎体高度、疼痛VAS评分。结果患者的骨水泥注射量与术后的椎体高度没有明确的相关性；骨水泥注射量与术后第2天VAS评分没有明确相关性；术后2年椎体COBB角及VAS，PVP组要高于PKP组；骨水泥渗漏发生率两组无差异；骨水泥渗漏多发生于椎体前方。结论行PVP或PKP手术患者术中所注射的骨水泥量与术后的椎体高度和术后的VAS评分并不相关，这对我们在术中把握骨水泥注射量有所帮助。术后2年，单从椎体COBB角和疼痛VAS评分。PKP组要更有优势。
- 胡莉琼熊英环孟庆奇张星亮
- 关键词：PVPPKPCOBB角椎体压缩性骨折
- β-Ogg1与H-Ras可溶性原核表达纯化及其相互作用的鉴定
- 2015年
- 目的获得外源表达的可溶性β-Ogg1和H-Ras蛋白并鉴定其相互作用。方法将β-Ogg1、H-Ras基因构建到含有GST标签的p GEx-4T-2-TEV和6*His标签的p ET-28a-TEV原核表达载体上,转化至大肠杆菌BL21(DE3)。采用SDSPAGE检测表达产物,GST介导的Pulldown方法鉴定蛋白相互作用。结果成功构建了β-Ogg1和H-Ras基因原核表达载体并转化大肠杆菌。在8-oxo G小分子作用下,β-Ogg1与H-Ras有直接相互作用。结论采用原核表达和亲和层析纯化得到可溶性GST_β-Ogg1(25-424)和6*His_H-Ras融合蛋白,并初步证实β-Ogg1和H-Ras存在直接相互作用。
- 张星亮谭建新
- 关键词：H-RAS原核表达
- α-OGG1与ACO2蛋白的表达纯化及其相互作用鉴定被引量：1
- 2015年
- [目的]原核表达纯化获得可溶性α-OGG1,ACO2蛋白并初步鉴定其相互作用.[方法]将α-OGG1,ACO2基因构建到pGEX-4T-2-TEV和pET-28a-TEV表达载体上,转化至BL21(DE3)大肠杆菌.IPTG诱导表达融合蛋白,通过Ni柱和GST柱亲和层析法纯化目标融合蛋白;采用SDS-PAGE检测表达产物;采用GST-Pulldown方法鉴定蛋白与蛋白的相互作用;采用双质粒共转化,表达纯化α-OGG1,ACO2蛋白复合体.[结果]成功克隆并构建了α-OGG1及其N-半段、C-半段基因和ACO2基因的原核表达载体,并转化至大肠杆菌表达.通过Ni柱和GST柱亲和层析法得到可溶性表达的6×His_α-OGG1(1-326)和GST_ACO2(29-780)蛋白,SDS-PAGE检测结果表明2个蛋白条带均与理论大小相符.GSTPulldown实验结果证实α-OGG1与ACO2直接相互作用.通过共转化、表达纯化得到了α-OGG1与ACO2的复合物.[结论]采用原核表达和亲和层析纯化得到了可溶性6×His_α-OGG1,GST_ACO2融合蛋白及两者的复合体,并初步证实α-OGG1与ACO2存在直接相互作用.
- 张星亮熊英环
- 关键词：蛋白表达蛋白纯化
- 线粒体自噬受体Bnip3的载体构建及蛋白表达纯化被引量：2
- 2015年
- [目的]获得可用于蛋白晶体筛选的高纯度Bnip3蛋白。[方法]将Bnip3截断基因构建到原核表达载体上并转化大肠杆菌。IPTG诱导表达后通过GST柱纯化目标蛋白。TEV酶切除GST标签后采用凝胶过滤层析纯化Bnip3蛋白。[结果]Bnip3截断基因重组体成功构建并诱导表达目标蛋白。通过GST亲和层析得到可溶性的携带GST标签的Bnip3（1~111）和Bnip3（1~152）蛋白。切除GST标签的Bnip3（1~152）通过凝胶过滤层析得到构象均一的二聚体蛋白。[结论]采用原核表达、亲和层析和凝胶过滤层析可获得构象均一的高纯度二聚体Bnip3蛋白。
- 张玲莉张星亮
- 关键词：凝胶过滤层析
- PM2．5对哮喘急性期小鼠脾脏CD4＋T淋巴细胞分化的影响被引量：11
- 2015年
- 目的探讨PM2．5对哮喘急性期小鼠脾脏CD4^＋T淋巴细胞分化的影响。方法1．用卵蛋白（OVA）致敏和激发建立哮喘急性期小鼠模型；2．用智能总悬浮颗粒物（TSP）中流量采样器采集湛江市区PM2．5，制备PM2．5干粉；3．无特殊病原体（SPF）级6—8周龄雌性Balb／c小鼠64只，按随机数字表法随机分为阴性对照组（NC组）、哮喘对照组（AC组）、致敏小鼠不同剂量PM2．5处理组（SP组）及哮喘小鼠不同剂量PM2．5处理组（AP组）。SP组和AP组依据PM2．5剂量的不同各分3个亚组，每组8只。实验第0、7及14天致敏AC组、SP组和AP组，NC组用9g／L盐水腹腔注射作为对照；实验第17天用气管滴注法予SP1组／AP1组、SP2组／AP2组及SP3组／AP3组50μL低、中、高浓度的PM2．5混悬液，NC组和AC组滴注50μL 9g／L盐水作为对照；实验第21天至第23天AC组和AP组用OVA溶液雾化激发。末次激发24h后处死小鼠，无菌条件下取脾，流式细胞术（FCM）分别检测脾脏CD4^＋T淋巴细胞中调节性T淋巴细胞（Treg）、1型辅助性T淋巴细胞（Th1）、Th2及Th17的百分率。结果1．成功建立OVA诱导哮喘急性期小鼠模型；2．对比脾脏CD4^＋T淋巴细胞中Treg百分率显示：SP组[（12．28±0．73）％、（11．93±0．81）％及（11．70±1．14）％f及AC组f（12．18±1．00）％]较NC组[（13．50±0．39）％]降低（P〈0．05），AP3组[（10．58±0．65）％]较AC组及AP1组[（11．91±0．79）％]降低（P〈0．05）；3．对比脾脏CD^＋T淋巴细胞中Th1／Th2比值显示：SP1组[（7．74±1．21）％]较NC组[（5．52±1．06）％]升高（P〈0．05），SP2组[（6．30±0．58）％]较SP1组降低（P〈0．05），SP3组[（4．87±0．82）％]较SP2组降低（P〈0．05），AC组[（3．69±0．47）％]较NC组、SP3组降低（P〈0．05）；AP3组[（2．92±0．57）％]较AC组降低（P〈0．05）；4．对比脾脏CD4^＋T淋巴细胞中
- 钟巨斌林千文谭建新张星亮
- 关键词：PM2.5哮喘小鼠CD4^+T淋巴细胞
- 镁螯合酶CHLI和CHLD亚基的表达纯化及其稳定复合体的鉴定
- 2016年
- 为明确植物光合作用中镁离子螯合酶CHLI与CHLD亚基形成复合物CHLI-CHLD这一重要过程的机制,首先需要获得可溶性CHLI和CHLD蛋白并确定其复合体装配。通过分子克隆技术构建截断的CHLI和CHLD重组体表达质粒。将其分别转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,添加异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达。通过Ni琼脂糖树脂(Ni sepharose 6 Fast Flow)和谷胱甘肽琼脂糖树脂(Glutathionsepharose 4 Fast Flow)亲和层析纯化可溶性重组蛋白。采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和TEV酶切试验验证目标蛋白。采用GST-Pulldown试验鉴定CHLI与CHLD的相互作用。通过凝胶过滤层析和SDSPAGE测定复合体中CHLI与CHLD蛋白的比例。结果表明:成功构建了截断的CHLI和CHLD重组体表达质粒p ET-28a-CHLI(13-357),p ET-28a-CHLD(20-676)及p GEX-4T-2-CHLD(20-767);在18℃,0.2mmol·L-1 IPTG条件下诱导16h后,成功获得了可溶性的CHLI(13-357),CHLD(20-676)和GST-CHLD(20-676)重组表达蛋白;CHLI与CHLD存在直接相互作用且需要Mg2+和ATP;稳定复合体CHLI-CHLD的亚基比例为1∶1。综上表明原核表达及纯化镁离子螯合酶CHLI与CHLD亚基蛋白,在Mg2+和ATP存在的条件下通过凝胶过滤层析可获得1∶1的稳定复合体CHLI-CHLD。
- 张星亮彭熹邓翔刘扬崔香淑
- 关键词：原核表达及纯化蛋白复合物
- 镁螯合酶CHLI的结构研究
- 光合作用是通过合成一些有机化合物将光能转变为化学能的过程,对自然界的生态平衡和人类的生存都具有重大意义。高等植物的光合作用主要发生在叶绿体中。而叶绿素是其中一类与光合作用有关的最重要的色素,它是光合作用中捕获光的主要成分...
- 张星亮余琳刘扬刘玉洁吴玮陈忠周
- 文献传递
- 胸腰椎压缩性骨折患者围术期综合护理路径研究被引量：26
- 2016年
- 目的分析脊柱压缩性骨折患者临床治疗路径及围术期护理方法。方法选取该院2014年1—12月收治的72例脊柱压缩性骨折患者作为临床研究对象,根据患者病情实施病椎单侧或双侧球囊后凸成形术。并于围术期给予二组患者临床综合护理举措,强化患者手术治疗效果。结果二组患者经临床手术治疗后,临床症状均有效缓解,随访1年,均未见不良反应情况。二组患者术后VAS评分同Oswestry功能障碍指数、活动能力评分对比差异无统计学意义(P>0.05)。结论脊柱压缩性骨折患者临床治疗中,根据患者具体病情实施单侧及双侧PKP术治疗,可获得相对满意的临床疗效,同时治疗过程中,通过定向辅以临床综合护理举措,能够显著强化患者预后生活质量,值得临床进一步应用推广。
- 冷观琴谢菲袁李梅张星亮
- 关键词：外科微创手术护理
- 脱落酸受体PYL3复合物结构和功能研究
- <正>脱落酸(ABA)在植物响应生物或非生物胁迫方面起着重要的作用,例如调控植物生长和发育等。近年来,脱落酸受体PYR/PYL/RCAR(PYLs)结构和调控机制相继被报道。但是,目前还不清楚这些已经报道的分子机制是否适...
- 邓增钦张星亮张琦刘扬王峥吴玮龙加福陈忠周
- 文献传递
