王玮
- 作品数：7 被引量：19H指数：3
- 供职机构：安徽农业大学动物科技学院更多>>
- 发文基金：国家级星火计划安徽省长三角科技联合攻关项目安徽省高等学校省级质量工程项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 猪链球菌2型安徽株溶血素基因的表达及其免疫原性分析
- 【目的】获得猪链球菌2型(Streptococcussuis serotype 2,SS2)溶血素基因(sly)的表达产物,并对其免疫原性进行分析鉴定。【方法】根据GenBank数据库中登陆号为DQ443533.1全长s...
- 吴华健毛天骄杨龙斌王玮李郁
- 关键词：猪链球菌2型溶血素基因免疫原性
- 文献传递
- 安徽地区猪源链球菌的生物学特性分析
- 引言 猪链球菌病是世界养猪业一种重要的细菌性传染病，能够引致猪链球菌病的链球菌种型繁多，不同种型之间生物学特性差异显著，不同地区或年限优势种型也呈动态过程。本研究通过对2009～2014年源自安徽地区临诊病例的猪源链球菌...
- 焦安心王玮李郁魏建忠孙裴
- 猪链球菌2型溶血素基因的表达及其免疫原性被引量：3
- 2019年
- 【背景】猪链球菌(Streptococcus suis,SS)是一种重要的人兽共患病原菌,有35种血清型,其中以猪链球菌2型(SS2)危害最为严重。研究发现,各种血清型SS分泌的溶血素(Suilysin,SLY)可能具有较好的免疫保护作用,因此,SLY作为SS基因工程亚单位疫苗的成分具有较大优势。【目的】获得SS2安徽强毒株(AH10-8株)溶血素基因(sly)的表达产物,并对其免疫原性进行测定分析。【方法】根据GenBank数据库中登录号为DQ443533.1的全长sly序列,设计合成一对分别带有Bam HI、XhoI酶切位点的特异性引物,利用PCR从AH10-8株中扩增sly基因,构建pET-30a-sly原核表达重组质粒,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中,进行IPTG诱导表达和His-Tag镍柱纯化蛋白,SDS-PAGE检测SLY,Western blotting鉴定SLY的反应原性;利用昆明鼠和斑马鱼进行SLY免疫攻毒保护试验,间接ELISA方法检测昆明鼠血清IgG抗体效价,观察比较病理组织变化及其免疫保护率。【结果】重组质粒pET-30a-sly在大肠杆菌中实现高效表达,获得大小为60kD的目的蛋白,与预期大小的SLY分子质量一致,能与SS2阳性血清发生特异性反应。SLY和AH10-8株灭活全菌体3次免疫昆明鼠后的血清IgG抗体效价分别为1:6 400、1:204 800 (以AH10-8株全菌体的超声裂解物为包被抗原)和1:102 400、1:51 200 (以SLY为包被抗原);SLY和AH10-8株灭活全菌体对昆明鼠和斑马鱼的免疫保护率分别为40%、80%和84%、92%;病理组织变化与攻毒对照组之间差异明显。【结论】成功表达的SLY具有良好的反应原性和免疫原性,可诱导机体产生保护性免疫反应,有望成为研制SS2新型疫苗的候选成分。
- 吴华健毛天骄杨龙斌王玮魏建忠孙裴李郁
- 关键词：猪链球菌2型溶血素基因原核表达免疫原性
- 猪链球菌2型安徽分离株多位点序列分型与毒力特征研究被引量：4
- 2019年
- 为了解安徽地区猪链球菌2型(SS2)临床分离株毒力基因分布、分子分型特征及其与致病性的相关性,本研究收集了58株源自临床患病猪的SS2,应用PCR技术检测其毒力基因:胞外蛋白因子基因(epf)、溶菌酶释放蛋白基因(mrp)和溶血素基因(sly),应用多位点序列分型方法(MLST)对其进行基因分型,并分析其与动物致病性之间的相关性。结果显示,58株分离菌,epf^+/mrp^+/sly^+型为44.83%(26/58),epf^+/mrp^-/sly^+型为25.86%(15/58),epf^-/mrp^+/sly^+型为18.97%(11/58),epf^-/mrp^-/sly^+和epf^-/mrp^-/sly^-型均为5.17%(3/58)。共分出10种ST型,其中ST1 26株(44.83%),ST7 18株(31.03%),ST28 6株(10.34%),ST117、ST156和ST308均为1株,各占1.72%,另有4种新发现的ST型,即ST958 2株(3.45%),ST957、ST959、ST970各1株(1.72%);分为4种克隆复合物(ST1 complex、ST27 complex、ST87 complex、ST188 complex)。ST1以epf^+/mrp^+/sly^+型为主(69.23%),其中23株(88.46%)分离自全身感染病猪;ST7以epf^+/mrp^-/sly^+型为主(55.56%),其次为epf^+/mrp^+/sly^+型(38.89%),其中13株(72.22%)分离自全身感染病猪。通过对斑马鱼、昆明鼠感染试验和LD50的测定,筛选出的6株强毒菌株分为ST1型(2株)和ST7型(4株)。结果表明,epf^+/mrp^+/sly^+是安徽地区SS2的优势毒力基因型,其次为epf^+/mrp^-/sly^+型。获得10种ST型,其中4种为首次发现,并且ST1和ST7为优势型。具有ST1/epf^+/mrp^+/sly^+遗传特征的菌株在临床上均倾向于导致全身感染。本研究结果揭示了安徽地区SS2毒力基因型、MLST遗传特征与毒力、动物临床症状之间的相关性,为开展SS2流行病学研究,区分不同菌株间毒力差异的研究提供参考依据。
- 张燎原陈章汪清峰王玮孙裴魏建忠李郁
- 关键词：猪链球菌2型溶血素基因多位点序列分型
- 猪流行性腹泻病毒S蛋白主要抗原表位区的原核表达及间接ELISA检测方法的建立
- 引言 猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的一种以腹泻、呕吐、脱水和哺乳仔猪高致死...
- 华耀王玮李郁孙裴魏建忠
- 2014-2015年安徽地区猪流行性腹泻病毒分子特征和遗传进化分析
- 为分析2014-2015年安徽地区猪流行性病毒(PEDV)的变异情况,本研究设计合成3对特异性引物,利用RT-PCR方法对2014-2015年分离的15株PEDV毒株的S基因全序列进行扩增,克隆和测序,并对其进行遗传进化...
- 华耀王玮李郁孙裴魏建忠
- 关键词：猪流行性腹泻病毒S基因分子特征遗传进化分析
- 猪流行性腹泻病毒S蛋白主要抗原表位区的原核表达及间接ELISA检测方法的建立被引量：12
- 2016年
- 【目的】建立一种快速、特异、敏感的检测血清中猪流行性腹泻病毒(PEDV)抗体的方法。【方法】利用生物学软件对PEDV S蛋白进行抗原位点分析,选择S蛋白的主要抗原表位区进行原核表达。采用SDS-PAGE和Western-blot对重组蛋白进行鉴定及抗原性分析。用纯化的重组蛋白作为包被抗原,经过条件优化、特异性和重复性试验,建立一种针对血清中PEDV抗体的间接ELISA检测方法。【结果】表达了重组S蛋白,重组的S蛋白能与PEDV阳性血清发生特异性反应,并建立一种基于重组S蛋白的间接ELISA检测方法。组内及组间变异系数均小于10%,重复性较好。建立的间接ELISA检测方法分别与商品化PEDV抗体检测试剂盒和Western-blot鉴定结果相比,两者符合率分别为86.67%和88.89%。【结论】建立的间接ELISA方法可以用于PEDV抗体的检测。
- 华耀王玮李郁孙裴魏建忠
- 关键词：猪流行性腹泻病毒S基因原核表达
