- microRNA-136影响静脉平滑肌细胞增殖和迁移的作用机制
- 2016年
- 目的探讨microRNA-136(miR-136)对静脉平滑肌细胞增殖、迁移的影响及其作用机制。方法建立大鼠颈总动脉自体移植静脉模型,并于体外培养静脉平滑肌细胞。采用CCK(cell counting kit)-8和EDU(5-Ethynyl-2’-deoxyuridine)实验检测细胞增殖情况,Transwell和细胞划痕实验检测细胞迁移情况,荧光定量PCR检测移植1、2、4周后和体外培养静脉平滑肌细胞中miR-136的相对表达量,免疫印迹法检测Steap3蛋白质表达量,免疫荧光法检测蛋白Steap3在细胞内的定位情况。通过microRNAs专业网站预测筛选可能的下游基因,并利用双荧光素酶报告基因验证。结果荧光定量PCR结果显示,移植1、2周后移植静脉miR-136的相对表达量分别为0.46±0.33、0.37±0.30,显著低于对侧未处理静脉(P值分别<0.05、0.01);移植4周后移植静脉miR-136的相对表达量为1.39±0.82,与对侧未处理静脉的差异无统计学意义(P>0.05);处于增殖状态的静脉平滑肌细胞中miR-136的相对表达量为0.11±0.01,显著低于处于非增殖状态的细胞(P<0.05)。CCK-8实验结果显示,阴性对照(NC)+血清组的光密度(D)值为0.96±0.03,显著高于NC组的0.62±0.02和模拟物+血清组的0.76±0.08(P值均<0.05)。EDU实验结果显示,NC+血清组EDU标记的阳性细胞百分比为(52.71±2.57)%,显著高于NC组的(13.91±3.43)%和模拟物+血清组的(32.56±3.26)%(P值均<0.01)。Transwell实验结果示,NC+血清组细胞迁移数为(53.13±16.36)个/视野,显著多于NC组的(8.09±5.44)个/视野和模拟物+血清组的(8.08±0.85)个/视野(P值均<0.05);细胞划痕实验结果显示,NC+血清组细胞24h迁移率为(45.40±1.17)%,显著高于NC组的(19.27±0.31)%和模拟物+血清组的(22.36±5.55)%(P值均<0.01)。免疫印迹法检测结果显示,NC+血清组的Steap3蛋白质相对表达量为0.91±0.07,显著高于NC组的0.52±0.10和模拟物+血清组的0.15±0.01(P值均<0.01)。免疫荧光染色结果显示,Steap3蛋白质主要定位于细胞�
- 杨立国刘萃萃谭娟娟马江伟张立葛广豪刘化进严志强乔增勇
- 关键词：新生内膜增生增殖迁移
- Sirtuin在低氧诱导人脐带间充质干细胞增殖中的作用被引量：3
- 2017年
- 目的探讨低氧对人脐带间充质干细胞(h UC-MSCs)中Sirtuin(SIRT)蛋白表达影响及与细胞增殖的关系。方法组织块贴壁法分离和培养h UC-MSCs;流式细胞仪鉴定细胞表面标志物;CCK-8法测定低氧与常氧下不同时间点h UC-MSCs的增殖能力;流式细胞仪检测低氧与常氧下细胞周期的变化;免疫荧光与Western blotting测定低氧与常氧下细胞SIRT蛋白定位与表达。结果成功分离h UC-MSCs;细胞CD90、CD105、CD29、CD44高表达,CD14、CD19、CD34、CD45、HLA-DR无表达;CCK-8测定低氧培养24、48、72 h细胞的增殖能力均高于常氧培养(P均<0.05);在低氧下培养24、48 h后S期细胞比率高于常氧培养(P均<0.05);免疫荧光检测SIRT1、6位于细胞核内,SIRT2定位于胞浆,SIRT3、4、5定位于线粒体。Western blotting测定SIRT1在低氧培养24、48 h蛋白表达量均高于常氧条件(P均<0.05),常氧培养72 h的SIRT1表达量高于24 h及48 h(P均<0.05);SIRT2表达量在低氧培养24 h高于常氧培养(P<0.05),48 h后低于常氧培养,72 h后高于常氧培养(P<0.05);低氧培养24、48、72 h后SIRT5的表达量均高于常氧处理(P均<0.05),常氧与低氧培养细胞48 h和72 h后均高于24 h时SIRT5的表达(P均<0.05)。结论低氧处理24、48、72 h均可以促进h UC-MSCs的增殖。低氧诱导SIRT1、2与5表达改变提示SIRT1、2、5可能参与了低氧对h UC-MSCs增殖的调控。
- 王凯民谭娟娟严志强李志强
- 关键词：人脐带间充质干细胞低氧增殖SIRTUIN
