李坤
- 作品数：76 被引量：30H指数：3
- 供职机构：中国农业科学院兰州兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项甘肃省中青年科技研究基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 一种抗塞内卡病毒猪源单链基因工程抗体及其制备方法和应用
- 本发明公开了一种抗塞内卡病毒猪源Fab基因工程抗体及其制备方法和应用。利用单个B细胞抗体技术，从感染和免疫SVA的猪外周血中分选特异性结合SVA的单个B细胞，然后扩增获得SVA抗体IgG的VH和VL基因，并将其插入含CH...
- 马雪青孙普卢曾军李坤李平花曹轶梅付元芳李冬张婧赵志荀袁红刘在新
- B细胞永生化方法的研究进展被引量：6
- 2018年
- B细胞永生化是一个历久弥新的研究课题,如何维持B细胞体外连续传代增殖并表达抗体的特性,对于研制治疗和诊断用抗体类药物和制品具有重要的意义。B细胞永生化的方法包括杂交瘤技术,EB病毒或SV40感染永生化以及遗传修饰法。永生化B细胞能快速有效的产生单克隆抗体,这种抗体能克服异源抗体产生的免疫排斥,是制备单克隆抗体的理想来源,成为研制治疗性单抗的重要方法。本文主要概述了B细胞永生化方法的研究进展与未来的发展方向,以供从事这方面研究的人员参考。
- 王省李坤卢曾军汪肖肖谯雨刘在新曹轶梅
- 关键词：B细胞单克隆抗体永生化
- A型塞内卡病毒全长感染性cDNA克隆及其构建方法及应用
- 本发明提供了A型塞内卡病毒SVA/HN/11/2017兰兽研全长感染性cDNA克隆及其构建方法及应用，属于病毒技术领域。本发明在对SVA/HN/11/2017兰兽研进行全基因组测定的基础上，在其基因组cDNA序列的5’端...
- 马雪青孙普李平花卢曾军刘在新曹轶梅白兴文付元芳张婧李坤
- 文献传递
- 猪圆环病毒3型研究进展
- 2023年
- 猪圆环病毒(PCV)是圆环病毒科圆环病毒属的单股环状闭合DNA病毒,是引起猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)的主要病原,目前包括4个基因型:PCV1、PCV2、PCV3和PCV4。其中,PCV3是近年来新发的一种严重危害养猪业的基因型,已经在全球范围呈现广泛流行趋势,引起了国内外学者的广泛关注。本文主要从病原学、流行病学、临床症状、致病机理、免疫反应和诊断方法对PCV3近年来研究情况进行了综述,为PCV3后期的各方面研究提供参考。
- 曹旭阳袁红孙普李坤杨宇轩邓欣雨焦云娟白兴文卢曾军权富生
- 关键词：病原学流行病学临床症状致病机理免疫反应
- 一种基于E2蛋白二聚体的猪瘟病毒管式化学发光抗体检测试剂盒及其应用
- 本发明提供了一种基于E2蛋白二聚体的猪瘟病毒管式化学发光抗体检测试剂盒及其应用，属于体外诊断产品技术领域。本发明提供的试剂盒包括猪瘟病毒管式化学发光抗体检测反应体系，其中包含的磁微粒混悬液中含有磁微粒偶联猪瘟病毒E2二聚...
- 李坤包艳芳林密何莉袁红蒋韬卢曾军
- 猪C型凝集素受体8A骆驼单域抗体酵母展示文库的构建被引量：1
- 2018年
- 为构建猪C型凝集素受体8A（C-type lectin domain family 8，member A，CLEC8A）的单域抗体酵母展示文库，本文首先克隆出了猪CLEC8A基因编码区序列。通过SMART软件分析，鉴定出该受体胞外区基因序列，并插入原核表达载体pET28a（＋），在大肠杆菌BL21（DE3）中成功表达出了猪CLEC8A胞外区蛋白。表达的蛋白经201佐剂乳化后免疫双峰驼，间接ELISA监测抗体滴度，于六免后15d分离骆驼外周血淋巴细胞。提取总RNA，反转录成cDNA后经巢式PCR扩增获得骆驼WfH基因。纯化的VHH片段与线性化的pCTCON2载体混合后共转入酿酒酵母感受态细胞（EBY100），经细胞内同源重组，成功制备了针对猪CLEC8A受体的骆驼单域抗体酵母展示文库。经菌落计数及测序鉴定结果表明，文库大小约为1．6×10 7，文库重组率达90％，文库多样性丰富。流式细胞术初步鉴定酵母细胞表面成功展示出抗猪CLE8A的单域抗体，为后续文库筛选奠定基础。
- 魏国燕李坤卢曾军刘在新孙普白兴文李冬陈应理包慧芳李平花付元芳张婧马雪青曹轶梅
- 关键词：流式细胞术
- 猪源IFN-λ3在CHO-S细胞中的表达及其抗口蹄疫病毒活性分析
- 2022年
- 为了探究猪源IFN-λ3蛋白能否在CHO-S悬浮细胞中表达以及表达蛋白的抗口蹄疫病毒(FMDV)活性,根据NCBI上的猪源IFN-λ3序列,构建真核表达载体pcDNA3.4-IFNλ3-His,将其转染至CHO-K1贴壁细胞中,用间接免疫荧光试验和Western-blot验证重组质粒是否表达IFN-λ3蛋白。将pcDNA3.4-IFNλ3-His转染至CHO-S悬浮细胞中大量制备IFN-λ3蛋白,用AKTA蛋白纯化系统纯化蛋白,用SDS-PAGE和Western-blot方法鉴定纯化出的蛋白,用细胞毒性试验分析纯化蛋白是否具有细胞毒性,用实时荧光定量PCR、Western-blot和空斑试验三种方法研究纯化蛋白的抗FMDV活性。结果显示,重组质粒pcDNA3.4-IFNλ3-His在CHO-K1细胞中瞬时表达IFN-λ3,在CHO-S细胞中以分泌形式表达IFN-λ3;用AKTA系统能够纯化出纯度较高的IFN-λ3蛋白;纯化出的IFN-λ3对PK-15细胞无明显毒性,能够抑制FMDV RNA的复制、减弱病毒蛋白翻译活动以及降低子代病毒的生成。本研究为发展新型FMDV防控策略提供了新方向。
- 袁红白兴文李坤李平花孙普宋雅丽焦云娟刘在新卢曾军李冬包慧芳
- 关键词：口蹄疫病毒抗病毒活性
- 一种O型口蹄疫病毒突变株及其制备方法和应用
- 本发明提供了一种O型口蹄疫病毒突变株及其制备方法和应用，属于疫苗候选株技术领域。O型口蹄疫病毒突变株以rHN病毒株作为母本病毒株，将VP3蛋白的G–H环中以下氨基酸发生突变：第173位天冬氨酸突变为天冬酰胺，第174位缬...
- 白兴文刘在新卢曾军包慧芳李平花李冬孙普付元芳陈应理曹轶梅马雪青李坤张婧陈冬冬宫晓华
- 文献传递
- 一种O型口蹄疫疫苗候选株及其构建方法和应用
- 本发明公开了一种O型口蹄疫疫苗候选株及其构建方法和应用，属于生物制品技术领域。本发明利用口蹄疫病毒的反向遗传操作技术，以嵌合口蹄疫当前流行毒株O/XJ/CHA/2017L+P1基因感染性克隆为骨架，进一步用口蹄疫病毒O/...
- 李平花孙普查晶晶卢曾军袁红李冬包慧芳曹轶梅白兴文付元芳马雪青李坤赵志荀刘在新
- 一种口蹄疫O型PanAsia-2谱系储备疫苗毒株及其构建方法和应用
- 本发明提供了一种口蹄疫O型PanAsia‑2谱系储备疫苗毒株及其构建方法和应用，属于兽药生物制品技术领域。口蹄疫重组病毒rHN/TUR09/VP1以O/HN/CHA/93病毒株为骨架，嵌合O/TUR/5/2009的VP1...
- 李平花刘在新卢曾军黄书伦孙普查晶晶李冬白兴文曹轶梅马雪青李坤袁红付元芳
