孙晓辉
- 作品数：14 被引量：53H指数：3
- 供职机构：山东农业大学更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金山东省科技发展计划项目公益性行业(农业)科研专项更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 番茄褪绿病毒RT-PCR检测技术的优化及河南分离物的鉴定被引量：2
- 2016年
- 为获得高效、灵敏和稳定的番茄褪绿病毒(Tomato chlorosis virus,ToCV)RT-PCR检测体系,选取文献报道的和重新设计的共9套ToCV的RT-PCR引物,经过一系列测试和比较,筛选出了灵敏度、特异性均较高的引物组合,并对反应条件、参数进行了优化,确定了最优反应条件。应用优化的ToCV RT-PCR检测体系对从河南设施蔬菜生产区采集的疑似感病番茄样品进行检测,扩增产物测序后经BLAST比对发现,河南分离物的CP和HSP70基因序列与GenBank上注册的ToCV典型分离物序列的相似性均达94%以上,通过对ToCV病毒粒子的电镜观察而进一步确定ToCV已在河南侵染设施番茄。
- 冯佳孙晓辉高利利刘灵芝乔宁刘永光竺晓平
- 关键词：RT-PCR多重PCR
- 同时检测番茄黄化曲叶病毒及伴随的越南番茄黄化曲叶卫星DNAβ的方法及其专用引物组
- 本发明公开了一种同时检测番茄黄化曲叶病毒及伴随的越南番茄黄化曲叶卫星DNAβ的方法及其专用引物组。本发明提供的引物组，由引物对TY和引物对β组成；所述引物对TY由名称为TY‑F的引物和名称为TY‑R的引物组成；所述TY‑...
- 竺晓平刘灵芝梁元存耿超孙晓辉冯佳高利利
- 文献传递
- 辣椒轻斑驳花叶病毒寿光分离物的RT-PCR检测及其序列分析被引量：1
- 2017年
- 以山东寿光地区感染辣椒轻斑驳花叶病毒的辣椒为试材,采用试剂盒提取感病辣椒的总RNA并进一步反转录成cDNA,参照已报道的PMMoV检测引物合成特异性引物PMMoV-F和PMMoV-R;以获得的cDNA为模板进行PCR扩增,研究了辣椒轻斑驳花叶病毒寿光分离物。结果表明:得到分子量约是576bp的条带,纯化后进行基因测序;通过测序结果分析比对可知,PMMoV寿光分离物序列与诸多地区的分离物同源性较高,可达到99%~100%。
- 唐玉海乔宁孙晓辉
- 关键词：RT-PCR
- 河南省侵染番茄的两种双生病毒鉴定与针对性双重PCR检测技术体系的建立
- 双生病毒是世界范围内广泛发生的一类具有孪生颗粒形态的植物单链DNA病毒,至今已在多个国家和地区的多种作物上造成毁灭性危害.2014年8月份从河南省郑州市中牟县、新乡市、焦作市马村区、安阳市汤阴县保护地栽培番茄植株上采集到...
- 刘灵芝孙晓辉冯佳高利利竺晓平谢丙炎
- 同时检测番茄黄化曲叶病毒及伴随的越南番茄黄化曲叶卫星DNAβ的方法及其专用引物组
- 本发明公开了一种同时检测番茄黄化曲叶病毒及伴随的越南番茄黄化曲叶卫星DNAβ的方法及其专用引物组。本发明提供的引物组，由引物对TY和引物对β组成；所述引物对TY由名称为TY-F的引物和名称为TY-R的引物组成；所述TY-...
- 竺晓平刘灵芝梁元存耿超孙晓辉冯佳高利利
- 番茄褪绿病毒RT-PCR检测技术的优化及河南分离物的分子鉴定
- 番茄是我国最主要的蔬菜之一,国内各地均有种植,随着栽培面积的不断扩大,病害发生的种类也不断增多.据报道,我国的春番茄每年因病毒病减产30％以上,夏、秋番茄损失更为严重,有的年份或有的地块几乎绝收.番茄褪绿病毒(Tomat...
- 冯佳孙晓辉高利利刘灵芝乔宁刘永光竺晓平
- 山东省辣椒主要病毒种类的分子检测与鉴定被引量：30
- 2017年
- 【目的】鉴定山东省辣椒上的主要病毒种类,明确该地区辣椒上的主要病毒病原。【方法】2014—2015年,在山东省临沂、日照、青岛、烟台、潍坊、淄博、济宁、菏泽、聊城、德州共10个市(区)采集253份疑似感病的辣椒植株叶片,提取叶片总RNA和总DNA,利用双生病毒的通用引物(PA/PB)、马铃薯卷叶病毒属通用引物(POL-F/POL-R)及已报道侵染辣椒的主要病毒的检测引物对样品进行PCR、RT-PCR分子检测与鉴定,将扩增得到的目的条带经凝胶回收试剂盒回收纯化后连接到pMD18-T载体上,再送至公司进行克隆测序。分别将所得的PMMoV、PeVYV和BWYV序列在NCBI上利用BLAST进行检索,利用DNAStar软件中的Megalign将所得序列与Gen Bank中已登录的世界各地有代表性的序列进行同源性比对,利用软件MEGA 5.05的Clustal W法进行多序列比对分析以及邻接法(neighbor-joining,NJ)构建系统进化树,系统进化树中各分支置信度(Bootstrap)进行1 000次重复分析。【结果】PMMoV、CMV总检出率分别为61.66%、60.08%;TMGMV、BBWV-2、BWYV、TMV发生也比较普遍,检出率为41.90%、34.78%、33.20%和24.90%;PCV-2、ToMV、TYLCV、PVY、MABYV、PeVYV、PCV-1、ChiVMV、AMV发生侵染现象较少,检出率分别为11.86%、9.88%、9.09%、6.72%、5.53%、3.56%、3.16%、0.79%和0.40%;未检测到Ca CV、PSV、Chi RSV、TSWV和To MMV。通过对病毒复合侵染现象进行分析发现,病毒复合侵染率高达89.92%,其中3种病毒复合侵染现象最多,所占比例达28.63%,4种病毒复合侵染率为25.00%,2种病毒复合侵染率为21.77%,5种病毒复合侵染率为13.31%,一个辣椒样品最多可同时感染6种病毒,侵染率为1.21%;对山东省10个地区的辣椒病毒检测,结果表明在辣椒上检出病毒种类最多的为临沂、济宁,检测到12种病毒,其次是烟台、聊城,检测到11种病毒,潍坊、菏泽检测到9种病毒,青岛、德州检测到8种病毒,日照检测到7种病毒,淄博检�
- 王少立谭玮萍杨园园代惠洁孙晓辉乔宁竺晓平
- 关键词：辣椒病毒病辣椒轻斑驳病毒复合侵染
- 甜瓜黄斑病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法被引量：1
- 2023年
- 为建立检测甜瓜黄斑病毒(melon yellow spot virus, MYSV)的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR(qPCR)方法。基于MYSV核衣壳蛋白基因保守序列设计qPCR特异性引物对,针对引物退火温度、引物浓度、特异性和敏感性进行系列优化。结果显示,优化后的qPCR方法最适退火温度为61.3℃,最适引物浓度为0.65μmol·L-1,特异性强,灵敏度高,比PCR高100倍。以携带目的基因片段的重组质粒为标准品,构建的qPCR标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,相关系数为0.999 7。实验样品验证表明建立的qPCR方法可用于MYSV的定量检测。
- 孙晓辉潘睿婧刘永光王丹石朝鹏乔宁孙作文竺晓平
- 关键词：实时荧光定量PCR病毒检测
- 山东葫芦科蔬菜上病毒病种类检测及黄瓜花叶病毒分离物的亚组鉴定被引量：8
- 2016年
- 为了检测和鉴定山东地区葫芦科蔬菜上病毒病种类,从山东诸地11个蔬菜种植区采集了867个葫芦科蔬菜疑似感病样品。利用黄瓜花叶病毒、黄瓜绿斑驳花叶病毒、西瓜花叶病毒、烟草花叶病毒、小西葫芦黄花叶病毒、南瓜花叶病毒、甜瓜黄斑病毒、瓜类褪绿黄化病毒、李属坏死环斑病毒及甜瓜坏死斑点病毒等特异性引物对疑似感病样品分别进行RT-PCR检测,各病毒检出率分别为34.8%,10.4%,20.0%,41.7%,27.0%,7.8%,2.6%,1.7%,0,0.9%。表明除PNRSV外,其他9种病毒在山东各地均有发生,且CMV和TMV发病率较高,2种或2种以上病毒复合侵染也很普遍。同时为明确山东地区CMV分离物的株系分化状况,选取11个地区有代表性的CMV阳性样品,测定其外壳蛋白(Coat protein,CP)和RNA3核苷酸序列并进行序列比对和进化分析,结果显示侵染山东地区葫芦科蔬菜的CMV分离物均属于IB亚组,与韩国分离物As(AF013291)相似性最高,未发现其他株系。
- 孙晓辉王树森高利利乔宁刘永光赵静竺晓平
- 关键词：黄瓜花叶病毒亚组
- 番茄LeGlyI基因的克隆与功能分析
- 番茄(SolanumlycopersicumL.)属于全球范围内的重要经济作物，在自然条件下,番茄生长发育过程中易遭受各种非生物胁迫的不良影响。重金属、土壤酸化、高温低温、干旱等各种非生物胁迫能够对番茄生长发育以及产量品...
- 孙晓辉
- 关键词：番茄非生物胁迫铝胁迫氧化胁迫
