刘加秀
- 作品数：11 被引量：5H指数：2
- 供职机构：青岛大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金山东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 盐诱导激酶2通过调控转化生长因子-β/上皮-间充质转化通路抑制三阴性乳腺癌迁移和侵袭的机制被引量：2
- 2023年
- 目的分析和验证盐诱导激酶2(SIK2)在三阴性乳腺癌(TNBC)中的表达并探究其对TNBC细胞迁移侵袭能力的影响及机制。方法利用Ualcan在线分析工具探索SIK2在TNBC中表达情况,结合8对TNBC组织标本运用荧光定量PCR技术进行验证。构建SIK2重组过表达质粒(GV703-SIK2)并包装重组慢病毒。分别感染TNBC细胞株MDA-MB-231和HCC1937,经嘌呤霉素筛选构建SIK2稳定过表达细胞株和阴性对照细胞株。用蛋白质印迹法(Western blot)检测转染后TNBC细胞株中SIK2表达水平,通过划痕实验和Transwell小室实验观察SIK2过表达对TNBC细胞迁移侵袭能力的影响;采用Western blot分析SIK2过表达后对上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、锌指转录因子SNAI1蛋白(Snail)、锌指转录因子SNAI2(Slug)、磷酸化SMAD家族成员2(p-SMAD2)蛋白、磷酸化SMAD家族成员3(p-SMAD3)蛋白表达水平的影响。组间比较采用t检验。结果SIK2 mRNA在TNBC组织中表达明显低于其配对癌旁组织(t=2.199,P<0.05)。SIK2过表达组MDA-MB-231、HCC1937细胞SIK2蛋白表达水平(2.105±0.148、0.942±0.204)明显高于其对照组(0.053±0.007、0.024±0.007),差异有统计学意义(t=24.030、7.792,P<0.01)。划痕实验结果显示SIK2过表达组MDA-MB-231、HCC1937细胞划痕愈合率[(61.700±5.126)%、(58.360±14.380)%]均明显低于其对照组[(87.870±1.097)%、(91.410±7.486)%],差异有统计学意义(t=8.645、3.530,P<0.05)。Transwell小室实验结果显示SIK2过表达组MDA-MB-231、HCC1937细胞穿过小室数量[(111.700±15.310)、(101.700±14.220)个]明显低于其对照组[(183.000±19.970)、(187.000±15.100)个],差异有统计学意义(t=4.909、7.125,P<0.01)。SIK2过表达组E-cadherin表达水平(0.754±0.186)明显高于对照组(0.298±0.066),差异有统计学意义(t=3.995,P<0.05);而Vimentin、Snail、Slug、p-SMAD2蛋白、p-SMAD3蛋白的表达水平(0.595±0.144、0.429±0.179、0.609±0.125、0.198±0.090、0.659±0.088)均明显低于对
- 王硕刘相萍赵娴宫明凯刘加秀周泉王海波
- 关键词：三阴性乳腺癌上皮-间充质转化迁移
- 富血小板血浆-80℃深低温短期保存后细胞因子的变化
- 2024年
- 目的分析富血小板血浆(PRP)-80℃深低温短期保存以后,其内P-选择素、血管内皮生长因子(VEGF)、血小板源生长因子(PDGF)浓度及其pH值等重要指标的变化,为PRP低温储存提供理论依据。方法取30例健康供者血液制备的PRP,每份样本分装成5份,每份留取0.5 mL,分别为A组(新鲜组)和B~E组(分别冻存5、10、15、20 d)。测定各组PRP的pH值;ELISA法测定各组PRP中P-选择素、PDGF和VEGF的水平;血管形成实验检测A组和E组对HUVEC细胞血管形成能力的影响。结果各组pH值比较差异无显著性(P>0.05);各组PRP中P-选择素、PDGF、VEGF的浓度比较,差异均无显著性(P>0.05);A组和E组中HUVEC血管形成数量比较差异无显著意义(P>0.05)。结论-80℃深低温保存PRP对其pH值、P-选择素、VEGF和PDGF浓度变化无显著影响,可延长PRP临床应用时间。
- 蔺锡桐刘加秀张树超
- 关键词：富血小板血浆P选择素血管内皮生长因子类血小板源性生长因子氢离子浓度
- 甘露糖对乳癌细胞增殖及表柔比星化疗敏感度影响被引量：1
- 2021年
- 目的探讨甘露糖对乳癌细胞增殖及表柔比星(EPI)化疗敏感性的影响。方法免疫印迹法测定乳癌细胞(BT-549、HCC1937、T-47D、MCF-7)和正常乳腺细胞(MCF-10A细胞)代谢甘露糖的关键蛋白磷酸甘露糖异构酶(MPI)的表达。将MCF-7和T-47D细胞随机分为对照组(含体积分数0.10胎牛血清的普通培养液)、甘露糖组(25 mmol/L甘露糖)、葡萄糖组(25 mmol/L葡萄糖)、EPI组(1μmol/L EPI)、甘露糖联合EPI组(1μmol/L EPI+25 mmol/L甘露糖)和葡萄糖联合EPI组(1μmol/L EPI+25 mmol/L葡萄糖),各组分别加入含相应药物培养液,于有氧条件和乏氧条件下培养,采用噻唑蓝(MTT)比色法测定甘露糖及甘露糖联合EPI对细胞生长活性的影响,免疫印迹法检测对照组、甘露糖及葡萄糖组T-47D细胞凋亡相关蛋白Caspase-3、Caspase-8、Bax和Bcl-2的表达。结果 MCF-10A、BT-549、HCC1937、T-47D和MCF-7细胞中MPI表达差异有统计学意义(F=392.680,P<0.05)。与MCF-10A细胞相比,T-47D细胞MPI表达量相对较低,MCF-7细胞表达相对较高,差异有统计学意义(t=25.449、32.857,P<0.05)。有氧条件下,甘露糖组T-47D细胞增殖率较对照组明显降低(t=33.338,P<0.05),MCF-7细胞增殖率与对照组比较差异无显著性(P>0.05);甘露糖联合EPI组T-47D细胞增殖率显著低于EPI单药组,差异有统计学意义(t=22.901,P<0.05);甘露糖联合EPI组与对照组相比MCF-7细胞增殖率差异无统计学意义(P>0.05)。乏氧条件下,甘露糖组T-47D细胞和MCF-7细胞增殖率较对照组显著降低(t=24.538、35.158,P<0.05),甘露糖联合EPI组T-47D和MCF-7细胞增殖率低于EPI单药组(t=37.986、54.622,P<0.05)。与空白对照组相比较,各加药组T-47D细胞Caspase-3、Caspase-8、Bax、Bcl-2蛋白表达差异无显著性(P>0.05)。结论甘露糖能抑制乳癌细胞增殖,并增加乳癌细胞对EPI敏感性,MPI表达较低的乳癌细胞对甘露糖更敏感。
- 衣俊羽王圆媛刘相萍聂卫红刘加秀王海波
- 关键词：甘露糖乳房肿瘤表柔比星
- Wiskoot-Aldrich综合征蛋白家族成员3对乳腺癌细胞增殖、迁移侵袭及伪足形成的影响被引量：2
- 2021年
- 目的观察Wiskoot-Aldrich综合征蛋白家族成员3(WASF3)对乳腺癌细胞增殖、迁移侵袭及伪足形成的影响。方法利用免疫蛋白印迹(Western blot)法检测乳腺癌细胞(BT-549、HCC-1937、BT-474、MDA-MB-231、MCF-7、T-47D)及乳腺正常细胞(MCF-10A)中WASF3蛋白的表达量;获取WASF3互补脱氧核糖核苷酸(cDNA),构建过表达及干扰的重组载体SB-16-WASF3和pHB-U6-MCS-PGK-PURO-shWASF3(pHB-shWASF3)。重组干扰质粒经慢病毒包装,感染MDA-MB-231细胞,经抗性筛选建立WASF3基因静默的稳转细胞株。经实时荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)及Western blot法验证WASF3的静默及过表达效率;通过克隆形成实验和迁移侵袭实验分别验证细胞克隆形成能力和迁移侵袭能力的变化;过表达载体SB-16-WASF3转染MDA-MB-231细胞,经WASF3抗体和鬼笔环肽(Phalloidin)双染色,观察WASF3过表达对细胞伪足形成的影响。采用单因素方差分析,组内进一步两两比较采用LSD-t检验,两两比较采用t检验。结果Western blot结果显示,不同乳腺癌细胞WASF3蛋白的相对表达量分别为1.07±0.00、0.54±0.11、0.60±0.14、1.36±0.02、0.65±0.05和0.79±0.18,均高于乳腺正常细胞(0.38±0.01,t=134.864、21.289、24.883、55.397、8.892、37.363,P值均<0.05),差异均有统计学意义;且MDA-MB-231和BT-549细胞的表达量相对较高。细胞增殖实验显示WASF3静默组(pHB-shWASF3-1)在24、48、72、96、120 h的增值率均低于对照组pHB-shNegetive Control组(pHB-shNC)及空白对照(Control)(0.92±0.06比1.18±0.05比1.14±0.03、1.42±0.05比1.90±0.12比1.77±0.14、2.02±0.03比2.83±0.08比2.70±0.10、2.78±0.02比3.78±0.03比3.70±0.17、3.22±0.04比4.10±0.12比4.02±0.10,t_(24 h)=7.983、t_(48 h)=9.024、t_(72 h)=23.491、t_(96 h)=66.348、t120 h=17.114;t_(24 h)=8.453、t_(48 h)=5.843、t_(72 h)=15.813、t_(96 h)=13.479、t120 h=19.142,P值均<0.01),差异均有统计学意义,但后两组间差异无统计学意义。pHB-shWASF3-1组克隆形�
- 聂卫红刘相萍衣俊羽周泉刘加秀韩亚斐隋爱华王圆媛王海波
- 关键词：乳腺癌迁移
- 一种鉴别中药材何首乌及其混伪品的环介导等温扩增引物组及方法、试剂盒与应用
- 本发明公开了一种鉴别中药材何首乌及其混伪品的环介导等温扩增引物组及方法、试剂盒与应用，本发明首次使用LAMP检测方法鉴别何首乌及其混伪品，克服了现有技术中因为何首乌与其他何首乌属的基因序列非常相似，如trnL‑trnF的...
- 韩亚斐隋爱华刘相萍姚如永王姝涵周泉刘晓风刘加秀
- 文献传递
- 一种鉴别巴戟天及其混伪品的LAMP检测引物组、试剂盒及其应用
- 本发明公开了一种鉴别巴戟天及其混伪品的LAMP检测引物组、试剂盒及其应用，所述引物组包括外引物ITS2‑22‑F3，外引物ITS2‑22‑B3，内引物ITS2‑22‑FIP，内引物ITS2‑22‑BIP，使用本发明的试剂...
- 隋爱华姚如永刘相萍王姝涵韩亚斐周泉刘加秀刘晓风
- 文献传递
- 红磷基光催化剂抗菌性能及肿瘤细胞摄取差异性的初步研究
- 目的肿瘤严重威胁人类生命健康,目前治疗肿瘤的主要手段如手术、放疗、化疗等,受到复发、化疗耐药和非特异性靶向性等的限制,疗效不佳。光动力疗法（Photodynamic therapy,PDT）是一种基于光、光敏剂（Phot...
- 刘加秀
- 关键词：红磷光敏剂光催化
- 丙泊酚对大鼠海马神经元缺氧复氧损伤时线粒体分裂的影响
- 2016年
- 目的评价丙泊酚对大鼠海马神经元缺氧复氧损伤时线粒体分裂的影响。方法原代培养新生SD大鼠海马神经元，采用随机数字表法分为4组（n=42）：对照组（C组）正常培养；赋形剂组（V组）不行缺氧复氧，加入赋形剂二甲基亚砜培养6h，终浓度0．01％；缺氧复氧组（H／R组）采用氧糖剥夺法缺氧6h，复氧20h建立大鼠海马神经元缺氧复氧损伤模型；缺氧复氧＋丙泊酚组（H／R＋P组）于缺氧6h时加入丙泊酚，终浓度1μmol／L。于复氧20h时采用流式细胞术测定细胞凋亡率，采用激光共聚焦显微镜检测细胞质Ca^2＋浓度，采用ELISA法检测神经元钙调神经磷酸酶活性，采用Western blot法检测线粒体分裂相关蛋白Drp1、Fis1及细胞凋亡相关蛋白细胞色素c（Cyt c）、凋亡诱导因子（AIF）的表达。结果与C组比较，H／R组和H／R＋P组细胞凋亡率、Ca^2＋浓度、钙调神经磷酸酶活性及Drp1、Fis1、Cyte、AIF蛋白的表达水平升高（P〈0．05），V组各指标差异无统计学意义（P〉0．05）；与H／R组比较，H／R＋P组细胞凋亡率、Ca^2＋浓度、钙调神经磷酸酶活性及Drp1、Fis1、CytC、AIF表达水平降低（P〈0．05）。结论丙泊酚可通过抑制线粒体分裂减轻大鼠海马神经元缺氧复氧损伤。
- 王海彬刘加秀贾长新赵芹王士雷王雪
- 关键词：二异丙酚缺氧海马神经元
- Ⅹ型胶原蛋白α1对三阴性乳腺癌细胞增殖、迁移、血管形成的影响
- 2024年
- 目的探讨三阴性乳腺癌(TNBC)细胞中Ⅹ型胶原蛋白α1(COL10A1)的表达及其潜在的生物学作用及机制。方法利用Ualcan在线分析工具探索COL10A1在TNBC中的表达并在乳腺癌细胞中应用蛋白质印迹法(Western blot)验证。利用小干扰RNA(siRNA)与重组过表达质粒GV703-COL10A1转染三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231和BT-549,获得COL10A1敲低实验组(Si-COL10A1)和对照组(Si-NC)、过表达实验组(OE-COL10A1)和对照组(NC)的细胞。利用细胞计数试剂盒(CCK-8)法细胞活力测定、平板克隆、划痕实验、细胞迁移实验检测TNBC细胞的增殖、迁移能力;采用体外小管形成实验检测人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的体外血管形成能力。两组之间比较采用独立样本t检验。结果生信分析及Western blot结果显示TNBC中COL10A1高表达,且与更差的总生存期(OS)、无复发生存期(RFS)相关。细胞克隆形成实验显示COL10A1敲降组MDA-MB-231、BT-549细胞克隆形成率[(10.47±0.91)、(11.10±1.35)%]明显低于其对照组[(16.77±2.33)%、(18.43±2.40)%,t=4.373、4.609,P<0.05);COL10A1过表达后两细胞克隆形成率[(21.50±0.62)%、(27.83±3.72)%]明显高于其对照组[(15.23±2.79)%、(19.40±1.47)%,t=3.792、3.648,P<0.05]。划痕实验结果显示COL10A1敲降组MDA-MB-231、BT-549细胞的划痕愈合率[(17.00±1.07)%、(15.38±0.89)%]明显低于其对照组[(30.58±1.88)%、(23.78±1.58)%,t=6.284、4.636,P<0.01];COL10A1过表达后两细胞划痕愈合率[(47.40±3.09)%、(41.26±4.33)%]高于其对照组[(34.48±2.03)%、(21.80±1.03)%,t=3.491、4.737,P<0.01]。在细胞迁移实验中,COL10A1敲降组MDA-MB-231、BT-549细胞进入下室的数量[(151.70±33.25)、(76.67±10.41)个]低于对照组[(378.00±26.51)、(303.70±15.50)个,t=9.219、21.060,P<0.01];COL10A1过表达后两细胞进入下室的数量[(1519.00±144.10)、(551.00±61.65)个]高于对照组[(426.30±46.07)、(288.30±27.57)个,t=12.510、6.736,P<0.01]。COL10A1过表达细胞的条件培养基培养�
- 彭景刘相萍宋洪明毛艳刘加秀周泉王海波
- 关键词：三阴性乳腺癌增殖迁移血管形成
- 一种鉴别中药材黄芪混伪品的环介导等温扩增引物组、试剂盒、方法及应用
- 本发明公开了一种鉴别中药材黄芪混伪品的环介导等温扩增引物组、试剂盒、方法及应用，本发明结合植物DNA条形码技术，创造性的从rDNA ITS、ITS2、trnL‑trnF、matK等序列中选择了序列分歧度最小、遗传变异系数...
- 周泉隋爱华刘相萍姚如永韩亚斐王姝涵刘加秀刘晓风
- 文献传递
