孙卫平
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
- 供职机构：中国人民解放军南京军区军事医学研究所更多>>
- 发文基金：江苏省“333工程”培养资金资助项目江苏省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 一株分泌抗2型猪链球菌表面蛋白Lmb单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其制备方法
- 本发明属于病原微生物免疫学检测技术领域，涉及一株分泌抗2型猪链球菌表面蛋白Lmb单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其制备方法。本发明分泌抗2型猪链球菌表面蛋白Lmb鼠源单克隆抗体细胞株是以纯化的2型猪链球菌05ZYH33的表面蛋...
- 潘秀珍高基民孙卫平王长军李先富
- 文献传递
- 2型猪链球菌FtsZ重组蛋白的制备及其酶活性测定
- 2017年
- 目的制备2型猪链球菌丝状温度敏感蛋白(Filamentous temperature-sensitive protein Z,FtsZ)重组蛋白并测定其水解三磷酸鸟苷(GTP)的酶活性。方法从2型猪链球菌中国强毒株05ZYH33基因组中PCR扩增目的基因ftsz,构建重组表达质粒pET28a-ftsz,转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,筛选阳性转化子进行IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定表达产物,Ni 2+亲和层析柱纯化重组蛋白,Western blot分析。重组蛋白免疫新西兰兔后收集多抗血清,间接ELISA法检测抗体效价,用孔雀绿-磷酸检测法测定FtsZ重组蛋白的GTP酶活性。结果成功构建pET28a-ftsz重组表达质粒;纯化获得大量纯度较高的FtsZ重组蛋白;ELISA检测兔多抗血清效价达1∶13 107 200;Western blot显示FtsZ重组蛋白能够与His-Tag单抗和兔多抗血清发生反应;以GTP为底物检测重组蛋白具有GTP酶活性。结论成功制备了具有GTP酶活性的2型猪链球菌FtsZ重组蛋白并以重组蛋白为抗原制备出高效价的多抗血清,为进一步研究2型猪链球菌FtsZ在细胞分裂调控过程中的作用奠定基础。
- 范伟伟倪华孙卫平张剑李超龙吴倩倩王长军潘秀珍
- 关键词：2型猪链球菌纯化
- 一株分泌抗2型猪链球菌AK蛋白的单克隆抗体及其应用
- 本发明公开了一株分泌抗2型猪链球菌AK蛋白的单克隆抗体及其应用。一株分泌抗2型猪链球菌AK蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为2E9，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2017年4月25日，保藏号为CCTCC N...
- 潘秀珍高基民孙卫平王长军李先富沈玉洁张艳梅
- 文献传递
- 2型猪链球菌天冬氨酸激酶的原核表达及抗原性检测被引量：1
- 2017年
- 目的原核表达2型猪链球菌(Streptococcus suis 2)天冬氨酸激酶(aspartokinase,AK)并检测其免疫原性。方法对S.suis 2中国强毒株05ZYH33的AK编码基因05SSU1811进行生物信息学分析并设计引物,通过PCR从05ZYH33基因组中扩增目的片段。将目的基因克隆入原核表达载体pET28a,转化E.coli BL21(DE3)后采用IPTG诱导表达目的蛋白,用His亲和层析柱纯化重组蛋白,并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。用纯化的重组AK免疫BALB/c小鼠4次,采血,分离血清,采用间接ELISA检测抗体效价,并进行Western blot分析。结果构建的重组质粒在宿主菌中高效表达目的蛋白,His亲和层析柱纯化的重组蛋白,能与感染05ZYH33全菌的猪恢复期血清反应。ELISA检测重组AK免疫鼠血清抗体效价为1∶102 400,Western blot显示该抗血清能与重组蛋白反应。结论成功制备重组AK蛋白,该蛋白具有抗原性,为进一步研究AK在S.suis 2致病过程中的作用奠定了基础。
- 孙卫平吴倩倩范伟伟张剑李超龙王长军潘秀珍高基民
- 关键词：2型猪链球菌原核表达天冬氨酸激酶多克隆抗体
- 2型猪链球菌细胞分裂蛋白DivIVA的原核表达及纯化被引量：3
- 2016年
- 目的利用原核表达系统制备2型猪链球菌细胞分裂起始因子DivIVA重组蛋白并进行纯化,为研究其在调控细胞分裂中的作用奠定基础。方法以2型猪链球菌05ZYH33全基因组为模板,PCR扩增divIVA基因片段,经BamHⅠ和XholⅠ双酶切后将目的片段连接至表达载体pET28a,构建重组表达质粒pET28a-divIVA,经测序鉴定后将重组质粒转化进入表达菌E.coli BL21,以终浓度为0.1mmol/L的IPTG于37℃培养4h,诱导DivIVA蛋白表达。用Ni离子亲和层析柱分离纯化目的蛋白,SDS-PAGE和Western blot进行检测和验证。结果成功构建重组表达质粒pET28a-divIVA,并在E.coli BL21中表达主要以包涵体形式存在的DivIVA蛋白。包涵体蛋白经8mol/L脲变性溶解后经Ni离子亲和层析柱纯化,获得的目的蛋白经SDS-PAGE检测分子质量为36ku,与预期大小相符;经Western blot检测,该蛋白能被相应抗体特异性识别。结论在E.coli BL21中成功表达并纯化了DivIVA蛋白,为研究该蛋白在2型猪链球菌的细胞分裂机制奠定了基础。
- 倪华过雨晴杜世仁张剑范伟伟孙卫平王长军曹祥荣潘秀珍
- 关键词：2型猪链球菌
