成凤
- 作品数：16 被引量：49H指数：4
- 供职机构：重庆医科大学检验医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金深圳市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 过表达IL-12调节单核系肿瘤细胞向巨噬细胞分化被引量：3
- 2014年
- 构建过表达白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12)的THP-1单核系肿瘤细胞模型,从形态学、巨噬细胞表面标志表达水平及吞噬功能3方面探究过表达IL-12能否调节单核系肿瘤细胞向巨噬细胞分化。结果发现,与空白和空载组相比,IL-12组的THP-1细胞界限不明显,散在细胞增多;呈圆形或不规则圆形,偶见毛刺状突起;核仁模糊或消失,核染色质条索状浓集;CD68 mRNA和蛋白表达量均升高(P<0.05)。与空白组相比,CD11b mRNA和蛋白表达量升高不明显(P>0.05),但72 h CD11b蛋白表达量明显高于相同培养条件下的空载组(P<0.05)。培养72 h后各组细胞吞噬能力比较,IL-12组吞噬率(36.7±1.2)%高于空白组(15.7±3.1)%和空载组(28.0±1.5)%,差异有统计学意义(P<0.05)。上述结果提示,过表达IL-12可以促进单核系肿瘤细胞向巨噬细胞分化。
- 马婷婷熊海玉王秦成凤李紫薇吴碧涛林艳涂植光
- 关键词：过表达巨噬细胞
- 白介素-1和肿瘤坏死因子-α基因多态性与幽门螺杆菌相关性胃十二指肠疾病的关系被引量：1
- 2009年
- 为探讨汉族人群中IL-1和TNF-α基因多态性与幽门螺杆菌相关性胃十二指肠疾病之间的关系,本文选取H.pylori阳性的38例慢性胃炎患者、30例十二指肠溃疡患者和70例健康对照者,采用PCR-限制性长度片段多态方法检测该人群中IL-1B-511、TNF-A-308、TNF-A-857位点多态性和IL-1受体拮抗剂基因多态性。结果显示在慢性胃炎组中TNF-A-308各基因型的频率与对照组比较,分布有差异,具有统计学意义(χ2=22.614,P<0.001)。在十二指肠溃疡组中TNF-A-857各基因型的频率与对照组比较,分布有差异,具有统计学意义(χ2=9.444,P=0.009)。再经Logistic回归分析,与携带TNF-A-308G/G者比较,携带TNF-A-308A/A者发生慢性胃炎的危险性为OR=22.70(95%CI:2.51-205.40);与携带TNF-A-857C/C者相比较,携带TNF-A-857T/T者发生十二指肠溃疡的危险性为OR=6.73(95%CI:1.71-26.53)。这些结果表明TNF-α基因多态性与幽门螺杆菌相关性胃十二指肠疾病的发生相关。为探讨汉族人群中IL-1和TNF-α基因多态性与幽门螺杆菌相关性胃十二指肠疾病之间的关系,本文选取H.pylori阳性的38例慢性胃炎患者、30例十二指肠溃疡患者和70例健康对照者,采用PCR-限制性长度片段多态方法检测该人群中IL-1B-511、TNF-A-308、TNF-A-857位点多态性和IL-1受体拮抗剂基因多态性。结果显示在慢性胃炎组中TNF-A-308各基因型的频率与对照组比较,分布有差异,具有统计学意义(χ2=22.614,P<0.001)。在十二指肠溃疡组中TNF-A-857各基因型的频率与对照组比较,分布有差异,具有统计学意义(χ2=9.444,P=0.009)。再经Logistic回归分析,与携带TNF-A-308G/G者比较,携带TNF-A-308A/A者发生慢性胃炎的危险性为OR=22.70(95%CI:2.51-205.40);与携带TNF-A-857C/C者相比较,携带TNF-A-857T/T者发生十二指肠溃疡的危险性为OR=6.73(95%CI:1.71-26.53)。这些结果表明TNF-α基因多态性与幽门螺杆菌相关性胃十二指肠疾病的发生相关。
- 向瑜杨致邦陈瀑范贵荣郭丽媛成凤
- 关键词：胃十二指肠疾病基因多态性幽门螺杆菌白细胞介素-1肿瘤坏死因子-Α
- Ad5F35-GFP、Ad5-GFP及Lipofectamine^(TM) 2000对4种细胞转染效率的比较被引量：2
- 2012年
- 目的将腺病毒Ad5F35-GFP、Ad5-GFP及LipofectamineTM2000对4种细胞的转染效率进行比较,以获得Ad5F35-GFP适用的细胞种类及各类细胞适用的转染方法。方法采用携带绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)基因的Ad5F35-GFP、Ad5-GFP及LipofectamineTM2000,分别转染人慢性粒细胞白血病细胞K562、人外周血单个核细胞(PBMC)、小鼠脂肪细胞3T3-L1和肝癌细胞Hep A1-6,于转染48 h后,倒置荧光显微镜下观察转染效率,RT-PCR法检测GFP基因mRNA的转录水平。结果 Ad5F35-GFP转染K562细胞、PBMC效率均较高,分别为61%和56%,但不能有效地转染3T3-L1(5%)、HepA1-6(15%)细胞;Ad5F35-GFP、Ad5-GFP及LipofectamineTM2000均不能有效地转染3T3-L1细胞,转染效率分别为5%、5%和6%;Ad5-GFP、LipofectamineTM2000转染Hep A1-6细胞效率均较高,分别为73%和71%。结论 Ad5F35-GFP可有效转染人造血细胞和单核细胞,为相关基因的研究及治疗领域的应用奠定了基础。
- 成凤王秦匡文斌李朴董晋豫梁勤东涂植光
- 关键词：腺病毒转染效率
- TFPI-2对人肝癌细胞生长增殖、凋亡及AFP合成的影响被引量：5
- 2011年
- 目的:探讨TFPI-2基因对人肝癌细胞Hep3B生长增殖、凋亡及甲胎蛋白AFP表达的影响。方法:将重组质粒PCDNA3.1-TFPI-2转染Hep3B细胞并经G418稳定筛选后,RT-PCR和Westernblot检测转染前后TFPI-2 mRNA和蛋白表达水平,采用CCK-8法、生长曲线观察TFPI-2对人肝癌细胞Hep3B生长增殖的影响,通过平板克隆形成实验观察单个细胞的增殖能力,RT-PCR检测AFP mRNA的表达,并用电化学发光法测定培养上清液中甲胎蛋白AFP含量,流式细胞仪检测细胞早晚期凋亡情况。结果:转染成功的Hep3B细胞检测到TFPI-2 mRNA和蛋白的表达;与转染空载体及未转染的细胞相比,转染TFPI-2的细胞生长增殖能力明显减弱;AFP mRNA表达抑制率为16.51%,AFP蛋白分泌明显低于对照组(P<0.01);流式细胞术检测转染TFPI-2的Hep3B细胞早期凋亡率明显增加(24.03%±7.28%vs 8.77%±3.66%)。结论:TFPI-2表达可显著抑制肝癌细胞生长和AFP的表达,同时还能诱导细胞早期凋亡。为进一步探讨靶向TFPI-2的肝癌基因治疗提供了实验依据。
- 秦晓林徐勇范晓卿李武县匡文斌成凤涂植光
- 关键词：肝癌组织因子途径抑制物-2甲胎蛋白
- 人YB-1蛋白的高效原核表达、纯化及其多抗的制备被引量：10
- 2010年
- 目的构建YB-1原核表达系统,诱导表达后纯化YB-1融合蛋白并制备其多抗。方法采用RT-PCR扩增YB-1编码序列,将该序列克隆至载体pET-32a(+);转化BL21(DE3),确定最佳表达条件;采用亲和层析与超滤纯化目的蛋白,经Western blot鉴定后免疫家兔,制备其抗体。结果成功扩增YB-1编码序列并构建了其表达载体;SDS-PAGE结果显示,表达条件经优化后(28℃,5h,0.5mmol/LIPTG),YB-1融合蛋白在BL21中得到高效可溶性表达;Western blot结果证实,表达产物经纯化后获得了纯度较高的YB-1融合蛋白,将该蛋白免疫家兔后获得了效价与特异性较高的抗体。结论成功建立了YB-1蛋白的原核表达系统及蛋白纯化方法 ,并制备了其抗体。
- 李朴孔飞飞余雪梅成凤涂植光
- 关键词：YB-1原核表达
- 携人IL-12基因腺病毒的构建及其对Hep3B细胞增殖及TGF-β表达的影响被引量：7
- 2012年
- 目的:构建携带人IL-12的重组腺病毒,观察其对Hep3B增殖及TGF-β表达的影响。方法:PCR扩增IL-12基因,构建穿梭质粒pAdTrack-IL-12;穿梭质粒经Pme I线性化后转化AdEasier Cell,E.coli BJ5183内同源重组;PacⅠ酶切重组腺病毒质粒,转染AD293,包装病毒;病毒pAd-IL-12感染肝癌细胞Hep3B,以RT-PCR、Western blot检测白介素12的表达;MTT法检测肝癌细胞的增殖情况;RT-PCR检测转化生长因子-β(TGF-β)的表达。结果:成功构建携IL-12基因的重组质粒,并成功包装可高效感染Hep3B的腺病毒pAd-IL-12;RT-PCR以及Western blot结果表明,病毒pAd-IL-12感染Hep3B后可高表达白介素12,并且与对照组相比Hep3B增殖能力显著降低(P<0.05),TGF-β表达量也降低(P<0.05)。结论:可高表达IL-12的腺病毒包装成功,感染肝癌细胞Hep3B后抑制其增殖,同时也下调TGF-β的表达,为进一步研究IL-12的肿瘤治疗作用奠定了基础。
- 成凤匡文斌王秦秦晓林范晓卿董晋豫梁勤东李朴涂植光
- 关键词：白介素12细胞增殖
- 携人IL-12基因腺病毒的构建及其抗肿瘤机制的研究
- 目的：将腺病毒Ad5F35-GFP对4种不同细胞的转染效率与Ad5-GFP和pEGFP-N1进行比较，以获得腺病毒Ad5F35-GFP适用的细胞种类及各类细胞适用的转染方法。构建携带人白介素-12(IL-12)的重组腺病...
- 成凤
- 关键词：白介素-12转化生长因子-Β腺病毒抗肿瘤机制
- 文献传递
- 重组腺病毒Ad5-hNK4-EGFP的构建与鉴定被引量：3
- 2012年
- 目的构建携带绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)标签和hNK4基因的重组腺病毒Ad5-hNK4-EGFP,并检测其对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响。方法以pcDNA3/hNK4质粒为模板,采用高保真DNA聚合酶扩增hNK4基因,克隆至腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建重组穿梭质粒pAdTrack-hNK4,穿梭质粒经PmeⅠ酶切线性化,与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中进行同源重组,获得重组腺病毒质粒pAd5-hNK4-EGFP,经PacⅠ酶切线性化后转染AD-293细胞进行包装,获得重组腺病毒Ad5-hNK4-EGFP,经4轮扩增后,测定病毒滴度;将重组腺病毒感染AD-293细胞,采用RT-PCR及Western blot法检测感染细胞中NK4基因的转录及蛋白的表达;MTT法检测Ad5-hNK4-EGFP对肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor,HGF)诱导的MDA-MB-231细胞增殖的影响。结果重组腺病毒质粒pAd5-hNK4-EGFP经PacⅠ酶切鉴定证明构建正确;经包装及4轮扩增后,重组腺病毒Ad5-hNK4-EGFP的滴度可达1.5×1011PFU/ml;经RT-PCR及Western blot鉴定表明,重组腺病毒携带的NK4基因能够在AD-293细胞中表达;HGF可促进MDA-MB-231细胞增殖,而Ad5-hNK4-EGFP可拮抗HGF诱导的MDA-MB-231细胞增殖。结论成功构建了表达hNK4基因的重组腺病毒Ad5-hNK4-EGFP,其可拮抗HGF诱导的MDA-MB-231细胞的增殖,为进一步深入研究HGF和NK4的功能、相互作用及作用机制奠定了基础,也为乳腺癌的靶向基因治疗提供了一个新的靶点。
- 匡文斌成凤秦晓林范晓卿王秦董晋豫梁勤东涂植光
- 关键词：腺病毒肝细胞生长因子NK4
- Y盒结合蛋白1单克隆抗体的研制、表位测定及其免疫学应用被引量：5
- 2012年
- 建立稳定分泌抗人Y盒结合蛋白1单克隆抗体(anti-YB-1 mAb)的杂交瘤细胞株,鉴定其表位与免疫学应用。将重组YB-1蛋白免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合。经ELISA法筛选鉴定、定株后采用腹水诱生法制备anti-YB-1 mAb;Protein G亲和层析法纯化mAb,ELISA法测定mAb效价、亚型及相对亲和力。采用抗原表位预测法鉴定anti-YB-1 mAb识别表位所在区域。Western blot和免疫组化鉴定mAb识别内源性YB-1的特异性。经筛选鉴定获得2株稳定分泌anti-YB-1 mAb的杂交瘤细胞(1-D9,3-E8);腹水抗体效价均≥1×10-6,亚型均为IgGl;1-D9和3-E8单抗识别表位分别位于(134-160aa)与(266-303aa)肽段。Western blot、免疫组化结果证实anti-YB-1 mAb能特异性识别内源性YB-1。该研究为YB-1免疫学定性、定量检测方法的建立、肿瘤靶向抗体治疗及进一步探讨YB-1的生物学功能奠定了基础。
- 李朴史静成凤梁勤东匡文斌王秦董晋豫涂植光
- 关键词：YB-1单克隆抗体抗原表位免疫学检测
- IL-12诱导急性单核细胞白血病细胞分化及凋亡的机制研究被引量：3
- 2015年
- 白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12)具有明显的抗肿瘤作用,但其作用机制较复杂。前期形态学和功能的研究发现,IL-12可诱导单核细胞白血病细胞分化。该研究从巨噬细胞表面分化标志、细胞增殖能力、周期以及凋亡四个方面探讨了IL-12诱导急性单核细胞白血病细胞分化和凋亡的相关作用机理。结果发现,以人源性重组IL-12 p70处理的THP-1细胞,巨噬细胞表面标志CD68和CD11b的表达量明显增加并呈时间依赖性,CD68+和CD11b+阳性细胞数也显著增多;IL-12诱导分化过程中伴有THP-1细胞生长缓慢、G1期或G1/S期细胞周期阻滞现象;IL-12处理后的THP-1细胞凋亡率也明显增加,以早期凋亡细胞为主,并伴有抗凋亡蛋白Bcl-2表达下调及促凋亡蛋白Fas表达增加。上述实验结果提示,IL-12对于急性单核细胞白血病可通过诱导肿瘤细胞向成熟巨噬细胞分化,抑制细胞增殖以及增加细胞凋亡来发挥抗肿瘤作用。
- 吴碧涛马婷婷林艳熊海玉王秦成凤李紫薇涂植光
- 关键词：白细胞介素-12急性单核细胞白血病分化治疗
