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腮腺炎疫苗株Jeryl Lynn 1反向遗传系统的建立: 2019年; 目的建立腮腺炎疫苗株Jeryl Lynn 1(JL1)反向遗传系统,获得单一成分的拯救病毒JL1R。方法将JL1全长cDNA基因序列分为7个片段(F1~F7),在F7片段的3′端引入丁型肝炎病毒核酶序列(hepatitis D virus ribozyme,HdvRZ),分段合成后分别插入载体pT7-MCS3中,根据每段重叠区域的酶切位点拼接,构建全长表达质粒pT7-MCS3-MUVJL1(HdvRz);同时构建表达腮腺炎病毒(mumps virus,MuV)核蛋白(NP)、磷蛋白(P)、聚合酶蛋白(L)的3个辅助质粒;将全长表达质粒与3个辅助质粒及表达T7RNA聚合酶的质粒pCDIBP-T7RNAP共同电转染Vero细胞。对获得的病毒JL1R进行测序、病毒滴度及中和抗体测定。结果拯救病毒JL1R基因组SH及HN片段与疫苗株JL1对应片段的理论序列一致;JL1R经Vero细胞连续传代培养2~10代病毒滴度均在6 lgCCID50/mL以上;JL1R与疫苗株S79诱发抗MuV抗体滴度接近。结论成功构建了MuV疫苗株JL1的反向遗传操作系统,获得的单一成分拯救病毒JL1R可作为腮腺炎疫苗株的备选株,解决了S79疫苗生产中毒种及疫苗株的成分、纯度和批间一致性等问题,进一步提高了国内腮腺炎疫苗的免疫效果。; 高雅丽张勇侠陈宗香康庄罗心梅丛聪李立刘兰军; 关键词：腮腺炎病毒疫苗株反向遗传系统

一种副粘病毒的拯救系统和副粘病毒拯救方法: 本发明提供了一种副粘病毒拯救方法，包括以下步骤：(1)将副粘病毒基因组质粒、N质粒、P质粒、L质粒、pT7‑T7RNAP质粒、pCDIBP‑T7RNAP质粒和动物细胞混合；(2)使用物理或化学方法介导多质粒共转染；(3)...; 刘兰军张勇侠高雅丽陈宗香; 文献传递

一种防止幼兔逃逸的食盒: 本实用新型公开一种防止幼兔逃逸的食盒，包括食槽、投食道，食槽水平设置，投食道竖向设置，投食道与食槽的上端连通，食槽侧板与投食道侧板竖向固连为一体，食槽后板与投食道后板竖向固连为一体，投食道前板固连在食槽侧板的上端；投食道...; 刘兰军杨澜赵兆刘志鹏丛聪陶金; 文献传递

一种兔免疫球蛋白的生产工艺: 本发明公开了一种免疫球蛋白的生产工艺，属于生物制品领域，尤其涉及免疫球蛋白的生产工艺领域。其是用SPF兔血清灭活补体后，经辛酸沉淀过滤得到澄清液；并将澄清液依次通过以下层析：亲和层析、阴离子交换层析、抗A/抗B层析，能最...; 刘兰军武志强容新宗李春阳李佳林

一种以麻疹病毒为载体的重组新型冠状病毒疫苗的大规模生产工艺: 本发明提供了一种以麻疹病毒为载体的重组新型冠状病毒疫苗的大规模生产工艺，属于病毒载体疫苗制备领域。所述方法包括以下步骤：(1)细胞培养：在装载有细胞微载体的生物反应器内加入无血清细胞生长液，培养Vero细胞至密度为2～5...; 刘兰军容新宗武志强张勇侠李春阳陈宗香高雅丽牟建超杜天飞杨硕杨盛理李佳林

一种小型动物采血车: 本实用新型公开一种小型动物采血车，所述采血车的操作台上设有躯干固定架，所述躯干固定架包括主体框架、上挡板、前挡板，主体框架上端开口，水平设有滑槽，上挡板水平嵌入滑槽内，前挡板下端与主体框架铰接，两侧设有与主体框架连接的锁...; 杨硕李佳林陈宗香杨盛理刘兰军

一种兔用冻精稀释液和冻存兔精液的方法: 本发明提供了一种兔用冻精稀释液和冻存兔精液的方法，属于人工授精技术领域。该兔用冻精稀释液包括以下成分：三羟甲基氨基甲烷，柠檬酸，葡萄糖，蔗糖，抗生素，二甲基亚砜，蛋黄，水和pH调节剂。该冻存兔精液的方法包括以下步骤：在兔...; 杨澜刘志鹏张玲赵兆杨硕赵世虎丛聪刘兰军

表达2型登革病毒NS1重组麻疹病毒的拯救及鉴定被引量：2: 2018年; 以麻疹病毒沪-191疫苗株(MVS191)为载体构建表达2型登革病毒非结构蛋白NS1(DENV2NS1)的重组麻疹病毒。将编码DENV2NS1 6×His蛋白的核酸序列用Bsi WI和BssHII酶切位点插入至载体pT7-MVF23ATU上,然后构建载体pT7F123DENV2NS1 6×His,最后构建获得插入了外源基因DENV2 NS1 6×His的载体pT7MVS191-DENV2NS1 6×His。质粒pT7MVS191-DENV2NS1 6×His与表达麻疹病毒N、P、L蛋白的辅助质粒共转染BSRT7细胞完成病毒包装后,在Vero细胞内增殖,完成重组病毒的拯救。重组病毒在Vero细胞上传至第4代,基因测序证明重组病毒中成功插入了外源基因DENV2NS1 6×His;Western Blot、原位免疫荧光反应可检测到重组病毒中麻疹病毒N蛋白及外源抗原DENV2NS1 6×His的表达;重组病毒增值特性与疫苗株MVS191相似;P1至P4代的重组病毒滴度稳定在6log10CCID50/mL～6.5log10CCID50/mL之间;P4代重组病毒免疫家兔,兔抗血清中麻疹病毒中和抗体效价大于1∶160;Western Blot可检测到免疫兔血清中DENV2NS1的抗体。本文成功构建了以麻疹病毒为载体,表达外源抗原DENV2NS1的重组病毒,为以麻疹病毒为载体的登革疫苗研发奠定基础。; 张勇侠陈宗香高雅丽罗心梅丛聪康庄赵婷刘兰军; 关键词：重组病毒

一种拯救麻疹Schwarz/Moraten疫苗株的系统和方法: 本发明提供了一种麻疹Schwarz/Moraten疫苗株反向遗传学方法，包括如下步骤：(1)病毒全长质粒pT7MV<Sub>sw</Sub>和辅助质粒与哺乳动物细胞混合；(2)电击转染；(3)培养细胞，收获病毒；所述全长...; 刘兰军张勇侠陈宗香高雅丽康庄; 文献传递

诺如病毒衣壳蛋白在Tn5细胞中的表达及纯化: 2017年; 将人诺如病毒VA387株ORF2基因插入载体pFastBac1中,转化DH10Bac感受态细胞获得Bacmid-NoV-ORF2;脂质体介导转染sf9昆虫细胞,获得表达NoV-ORF2的重组杆状病毒Ac-NoV-ORF2.冻融破碎经Ac-NoV-ORF2感染的Tn5细胞,离心收集上清进行分子筛纯化.10%SDS-PAGE分析结果显示,重组病毒感染的Tn5细胞可见特异的蛋白条带;目的蛋白条带为相对分子质量59kD和56kD的两个条带;电镜观察发现表达的诺如病毒衣壳蛋白成功装配成了大小约为40~50nm的VLPs.结果表明在Tn5细胞中实现了诺如病毒衣壳蛋白的表达和VLPs的装配.; 马玉晓刘兰军李玫颖张勇侠蔡峰代云见范凤鸣张雪梅赵云; 关键词：诺如病毒病毒样颗粒

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