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小反刍兽疫病毒重组N蛋白抗原制备及间接ELISA检测方法的建立被引量：3: 2017年; 将编码小反刍兽疫病毒(PPRV)N蛋白的基因全长克隆到pBacPAK9载体中,并在昆虫细胞中进行表达。对表达产物进行SDS-PAGE分析,并用PPRV阳性血清进行了Western blot鉴定。用Ni-IDA亲和柱对组氨酸融合表达的N蛋白进行了纯化,并对纯化产物进行了理化性质和抗原活性分析。最后以表达的N蛋白作为包被抗原,建立间接ELISA检测方法,临床检测137份山羊血清并与IDvet公司的商品化PPRV抗体检测试剂盒进行比较。结果表明,制备的PPRV N蛋白抗原在溶液中以单体形式存在,具有非常好的抗原活性。用该蛋白建立的间接ELISA检测方法与IDvet试剂盒符合率为956%。本研究为小反刍兽疫病毒重组N蛋白抗原制备相关质量标准的建立奠定了基础,同时建立的ELISA抗体检测方法可以很好地用于小反刍兽疫的临床诊断。; 冯向辉陈三民孔汉金杨璐申屠芬琴田新生张丽孙明陈西钊; 关键词：小反刍兽疫病毒 N蛋白 ELISA

绵羊肺腺瘤内、外源性env基因比较分析被引量：2: 2013年; 绵羊肺腺瘤(Ovine pulmonary adenocarcinoma,OPA)是由绵羊肺腺瘤反转录病毒(Jaagsiekte retrovirus,JSRV)感染引起的成年绵羊的一种慢性、进行性、接触传染性肺脏疾病。env是JSRV的主要毒力基因之一,而在正常羊的基因组中也存在着JSRV的内源性基因片段。为比较分析JSRV内、外源性env的特征,本文扩增并测定了正常绵羊肺组织的内源性env基因(Enenv),运用生物信息学技术,比较分析了其与外源性绵羊肺腺瘤病毒JSRV21(AF105220)env基因(Exenv)的遗传进化关系,二、三级蛋白结构和抗原表位。结果表明Enenv和Exenv核苷酸同源性为88.1%,推导的氨基酸同源性为92.0%,两者的主要差异位于TM区和YXXM基序。本结果为进一步研究JSRVenv基因功能提供了新线索。; 孔汉金张克山刘永杰尚佑军吴斌刘湘涛; 关键词：ENV基因

羊口疮病毒感染宿主细胞的蛋白质组变化及功能分析: 羊传染性脓疱(contagiousecthyma)俗称“羊口疮”，是由痘病毒科，副痘病毒属羊口疮病毒（orfvirus，ORFV）引起的一种急性、高度接触性人兽共患传染病。该病主要侵害绵羊和山羊。临床上患病动物以口唇周围...; 孔汉金; 关键词：羊传染性脓疱宿主细胞蛋白质组亚细胞定位; 文献传递

牛狂犬病病毒的鉴定及N基因序列分析被引量：2: 2013年; 为诊断疑似牛狂犬病病例、分析其病原分子特征,本研究以疑似牛狂犬病脑组织为研究对象,运用内基氏小体染色观察、荧光抗体试验、特异性目的基因(N基因)RT-PCR扩增和序列测定等方法进行病毒鉴定,使用DNAStar、Mega4.0软件分析N基因的遗传进化关系。内基氏小体检测、荧光抗体试验、乳鼠脑内接种试验和特异性目的基因扩增结果显示狂犬病毒阳性,建立了基于狂犬病毒N基因的遗传进化关系树。结合临床症状确诊该病例为牛狂犬病,遗传进化分析表明本研究鉴定的狂犬病毒和2006年及2007年国内狗源狂犬病毒(DQ666306、DQ866121)、猪源狂犬病毒(DQ496219)及人源狂犬病毒(EF556197)的遗传关系较近。本文为研究牛狂犬病毒分子流行病学积累了资料。; 张克山刘永杰孔汉金尚佑军刘湘涛; 关键词：狂犬病毒分子特征分析

抗羊口疮病毒B2L蛋白的单克隆抗体及其应用: 本发明公开了一种抗羊口疮病毒（Orf virus，ORFV）B2L蛋白的单克隆抗体及其应用。本发明采用原核表达系统，用大肠杆菌表达的ORFV B2L蛋白作为免疫原，免疫小鼠，经细胞融合，筛选得到一株稳定分泌抗B2L蛋白单...; 张克山刘湘涛孔汉金刘永杰尚佑军田宏尹双辉吴锦艳杨顺利陈妍王光祥; 文献传递

羊传染性脓疱病毒感染山羊皮肤成纤维上皮细胞差异表达miRNA分析: 2020年; 旨在研究羊传染性脓疱病毒(orf virus,orfv)感染山羊皮肤成纤维细胞(goat skin fibroblasts cell,GSF)对GSF细胞microRNA(miRNA)表达谱影响,探究miRNA在orfv感染过程中的作用及调控机制。分别提取感染和未感染orfv的GSF细胞总RNA,构建miRNA文库,利用高通量测序技术进行miRNA差异表达分析,对差异表达miRNA靶基因进行预测,并进行GO和KEGG分析,随机选取10个差异miRNA进行RT-qPCR验证。结果显示,orfv感染组和未感染GSF细胞组相比共有678个显著差异表达的miRNA(fold change≥1.5),其中,上调表达miRNA有509个,下调表达miRNA有169个,uniq_miRNA的Venn图分析显示,感染组和对照组共有的miRNA仅占8.21%;GO和KEGG分析显示,差异表达miRNA主要参与脂质代谢、受体及细胞因子信号转导等细胞生物学过程,RT-qPCR验证结果与高通量测序结果一致。本研究结果表明,orfv感染GSF细胞对其编码的miRNA有显著影响,获得大量GSF细胞编码的与orfv感染相关的差异miRNA,为进一步从宿主miRNA层面揭示orfv感染和致病机制提供了参考依据。; 张大俊侯景申超超徐国伟孔汉金成伟伟郑海学刘湘涛张克山; 关键词：羊传染性脓疱病毒病毒感染

用于检测小反刍兽疫病毒H 蛋白抗体的胶体金免疫层析试纸条: 本发明“一株可分泌PPRV‑H mAb的杂交瘤细胞株PPRV‐H4C<Sub>12</Sub>、其分泌的PPRV‑H mAb及包含该PPRV‑H mAb的胶体金免疫层析试纸条”，属于动物疫病检测领域。所述杂交瘤细胞株PP...; 陈西钊孙明田克恭吴培星迟立超冯向辉孔汉金申屠芬琴张丽

抗羊口疮病毒B2L蛋白的单克隆抗体及其应用: 本发明公开了一种抗羊口疮病毒（Orf virus，ORFV）B2L蛋白的单克隆抗体及其应用。本发明采用原核表达系统，用大肠杆菌表达的ORFV B2L蛋白作为免疫原，免疫小鼠，经细胞融合，筛选得到一株稳定分泌抗B2L蛋白单...; 张克山刘湘涛孔汉金刘永杰尚佑军田宏尹双辉吴锦艳杨顺利陈妍王光祥; 文献传递

用于检测小反刍兽疫病毒H蛋白抗体的胶体金免疫层析试纸条: 本发明“一株可分泌PPRV‑H mAb的杂交瘤细胞株PPRV‐H4C<Sub>12</Sub>、其分泌的PPRV‑H mAb及包含该PPRV‑H mAb的胶体金免疫层析试纸条”，属于动物疫病检测领域。所述杂交瘤细胞株PP...; 陈西钊孙明田克恭吴培星迟立超冯向辉孔汉金申屠芬琴张丽; 文献传递

一种用于小鼠尾部采血的负压装置: 本实用新型提供一种用于小鼠尾部采血的负压装置，其包括：负压发生装置、连接装置以及血液收集装置，所述的负压发生装置的抽气口通过连接装置与血液收集装置的排气口相连接，而血液收集装置的进气口用于血液收集。本实用新型简单、实用、...; 张克山孔汉金刘永杰尚佑军; 文献传递

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孔汉金