王佳佳
- 作品数：13 被引量：25H指数：3
- 供职机构：浙江大学医学院更多>>
- 发文基金：浙江省教育厅科研计划中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：医药卫生文化科学生物学理学更多>>
- 基于实时无标记技术研究流式分选后细胞活性的检测方法
- 2022年
- 利用流式细胞法、细胞计数试剂盒(CCK-8)法、实时细胞功能分析(RTCA)法分别检测分选前后细胞的活性,综合比较了3种方法的检测原理、操作特点等。结果显示,流式细胞法测得的分选后细胞凋亡率为(3.85±0.008)%,分选前细胞凋亡率为(14.09±0.021)%,分选后细胞凋亡率低于分选前,具有统计学差异(P<0.05);分选前后的活细胞比例显示,分选后活细胞比例高于分选前,具有显著性统计学差异(P<0.001)。CCK-8法测得的分选后细胞活性高于分选前,具有显著性统计学差异(P<0.001);RTCA法测得的分选后细胞连续增殖活性明显高于分选前,具有极显著性统计学差异(P<0.0001)。结果显示,相较于CCK-8法和流式细胞法,RTCA法的细胞用量少、可回收,操作简便,无需标记,检测灵敏度高,可获得实时动态的细胞生长曲线,适合研究分选后细胞长效动态的活性变化,可为基础和临床分选后活细胞的功能研究提供检测手段。
- 李艳伟王佳佳邢月婷郭春黄莹莹宋兴辉黄琼
- 关键词：流式细胞分析CCK-8细胞活性
- 不同激发方式的流式细胞分选仪一体化管理模式研究被引量：1
- 2022年
- 目的:研究建立不同激发方式的流式细胞分选仪一体化管理模式,探讨其应用效果。方法:针对流式分选仪的组成、工作原理、环境要求、人员要求、培训交流、操作管理及注意事项,探讨激光在空气中激发和在石英杯中激发两种流式细胞分选仪的使用及管理方法。结果:总结出一套日常维护、运行及培训的开放一体化管理模式,仪器每日稳定运行较一体化管理之前的8 h提高到10~12 h,运行机时数>1500 h/年,分选后细胞活性>90%,分选细胞纯度>99%,污染率<1%,样品堵塞<2%。结论:不同激发方式的流式细胞分选仪一体化管理模式能够加强仪器运行及维护管理,可使仪器使用者快速熟悉操作分选仪,延长分选仪使用寿命,提高分选仪使用率,为获得高纯度、高活性和高得率细胞提供保证,为科学研究、实验教学及技术开发提供更优质服务。
- 李艳伟王佳佳黄莹莹宋兴辉
- 实时无标记肿瘤细胞凋亡筛选技术体系的建立被引量：3
- 2019年
- 将xCELLigence-RTCA细胞分析系统的实时无标记技术和流式细胞术结合,建立实时无标记的肿瘤细胞凋亡筛选技术体系。利用顺铂诱导非小肺癌细胞A549凋亡,使用xCELLigence-RTCA系统连续监测96 h获取A549细胞动态生长曲线图谱,分析图谱确定细胞凋亡最佳检测时间点和半有效抑制浓度(IC50),联合流式细胞术的精准定量技术,分析顺铂作用后A549细胞的凋亡率。结果确定这种实时无标记细胞凋亡筛选技术体系用于肿瘤细胞凋亡筛选的可行性和可靠性。
- 李艳伟宋兴辉王佳佳刘丽黄莹莹郭春
- 关键词：凋亡检测流式细胞术
- 活细胞标记和流式细胞术应用于体外检测巨噬细胞吞噬活性的方法建立被引量：2
- 2020年
- 目的:通过活细胞标记和流式细胞术的联合应用,建立一种方法研究体外巨噬细胞的吞噬活性。方法:研究采用活细胞示踪染料CFSE标记对照组巨噬细胞,对未标记CFSE的细胞使用免疫刺激剂LPS处理,两组细胞混匀后与预先超声处理过的Alexa594标记的大肠杆菌孵育,在一个体系中完成吞噬过程,流式细胞术检测双荧光信号来评价对照组细胞和LPS处理后细胞的吞噬活性。结果:对照组和LPS处理组巨噬细胞的吞噬率分别为48.6%和62.3%,LPS处理后巨噬细胞的吞噬活性明显升高,与文献报道一致。实验表明,通过活细胞标记区分,在同一体系中完成LPS处理和未处理细胞的吞噬活性检测是非常可行的。也正因为待比较吞噬活性的两组细胞处在同一个吞噬环境中,吞噬率反映的吞噬活性更为准确。结论:本研究应用活细胞标记和流式细胞术,成功建立了一种实现体外处理的巨噬细胞吞噬活性的检测方法,简便、准确、可信度高。
- 王佳佳王磊王磊宋兴辉李艳伟黄莹莹黄莹莹
- 关键词：巨噬细胞流式细胞术
- 高校大型仪器共享平台人才培养模式路径探析——基于浙江大学医学院公共技术平台的实践与探索被引量：5
- 2022年
- 高校大型仪器平台已成为推进高校科研能力提升的重要技术条件保障。随着高校科研能力和技术的发展,高校大型仪器共享平台经历了由仪器操作服务向仪器开发创新、人才培养的转变。基于此,该文以加强实验技术创新为主线,搭建了三维教学模式,着力将平台打造成高层次技术人才培养、高水平仪器技术孵化的教学科研基地,为新时代高校科研发展提供技术支撑。
- 宋兴辉刘双双黄莹莹李艳伟王佳佳郭春邢月婷
- 关键词：大型仪器共享平台
- “小鼠脾脏单细胞悬液不同制备方法及其流式细胞术检测”综合实验的建立与探索被引量：3
- 2023年
- 由于流式细胞术应用中涉及的样品制备、仪器使用和数据解读均比较复杂,该文对流式实验教学的内容和形式进行了有益的探索,建立了“小鼠脾脏单细胞悬液不同制备方法及其流式细胞术检测”的综合性实验。新方法不仅包含小鼠原代组织取材、单细胞悬液不同制备方法(手动解离、自动解离)、流式细胞仪计数、显微观察等步骤,而且能涵盖流式抗体的配色与标记、流式细胞仪操作、数据分析(T淋巴细胞亚群的分群)等多个知识点,并围绕不同解离方法对实验结果的影响进行了探讨,极大地改善了实验教学效果和质量,充分发挥了流式细胞术在高校教学和科研中的重要支撑作用,使学生学会完整的流式技术链条,并提升了其科研能力与创造力,从而为培养复合型科研人才提供助力。
- 黄莹莹邢月婷阿依西布·萨吾提杨丹李艳伟王佳佳郭春周南
- 关键词：单细胞悬液实验教学
- 离心参数对流式分选后样本的影响研究被引量：2
- 2021年
- 流式分选术是对细胞或生物颗粒进行无菌筛分的技术,因具有检测速度快、通量高、灵敏度高等优势,故在医学及生命科学领域有广阔的应用前景。离心是流式分选后富集细胞的常用技术,直接影响流式分选后样本的细胞活性和得率。该文以KPC细胞系(即小鼠胰腺组织特异性kras缺失p53突变形成胰腺癌分离的癌细胞,简称KPC)和小鼠原代脾脏细胞为例,利用FACS SORP Aria II分选仪进行分选。对离心力、离心时间等参数进行优化,结果表明KPC细胞分选后,300×g、4°C离心25 min,能获得高得率高活性的细胞用于下游实验,而小鼠原代脾脏细胞则300×g、4°C离心15 min最为合适。该方法解决了流式分选后细胞离心难、离心损失大的问题,可提高分选实验实际得率,为流式分选术的应用提供技术参考。
- 黄莹莹邢月婷孟晓瑜桑文华李艳伟宋兴辉郭春王佳佳
- 关键词：离心力得率细胞活性
- 实时检测收集液对分选后HEK293T细胞活性的影响被引量：1
- 2021年
- 流式细胞分选是纯化活细胞较为常用的实验方法,是获得高活性细胞的有效手段,其中收集液为分选后的细胞提供一定的营养环境,从而保证分选后细胞的高活性。该研究选用流式细胞分选仪分选人肾上皮细胞系HEK293T(简称293T)细胞,用3组即A组(含BSA的PBS缓冲液)、B组(含FBS的PBS缓冲液)、C组(含FBS的DMEM培养基)收集液分别接收分选后的293T细胞,以流式细胞检测法、细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测法、实时细胞分析(Real Time Cellular Analysis,RTCA)检测法分别检测分选后细胞的活性情况并进行统计分析。结果显示,A组中含0.4% BSA的PBS缓冲液、B组中含10% FBS的PBS缓冲液、C组中含10% FBS的DMEM培养基接收的细胞活性分别高于各组内的对照,凋亡率分别为(4.12±0.474)%、(4.10±0.660)%、(3.71±0.291)%,均具有显著性统计学差异(P<0.000 1)。比较三种细胞活性检测方法发现,RTCA检测法具有极简的操作流程,无须标记,可实时获得细胞的动态增殖曲线的优点,可作为分选后细胞活性最客观的检测方法。该研究为揭示收集液对细胞活性的影响提供参考依据,为快速客观检测分选后细胞活性提供实时检测方法。
- 李艳伟宋兴辉邢月婷王佳佳郭春黄莹莹
- 关键词：CCK-8流式细胞分析实时检测细胞活性
- 运用CFSE和PKH26双染法快速鉴定细胞外囊泡
- 2023年
- 目的细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)称为细胞间“信使”,通过传递物质和信息调控受体细胞的功能和表型,在生理状态维持及疾病进程中发挥重要作用。然而,亚微米直径、高异质性、低折射率等特性使EVs的分析鉴定严重受阻。本研究旨在探索一种准确、高效的EVs流式检测方案,为EVs的功能研究提供技术支撑。方法首先采用差速离心法分离获得EVs,用已知直径的聚苯乙烯微球作为标尺,对流式细胞仪检测EVs的各项参数进行调试和优化以达到最佳信噪比;梯度稀释EVs样本,优化其上样浓度以降低群检测效应(swarming effect),在此基础上进一步用PKH26和CFSE两种荧光染料对EVs脂膜和蛋白进行双荧光标记,从而实现对EVs物理和生化特性的多参数分析,最后通过特异性抗体标记、电镜观察、纳米颗粒跟踪分析对EVs样本进行验证分析。结果参数优化后的流式细胞仪在散色光通道能将80 nm的微球信号与仪器背景噪音信号清楚分开;通过对样本的梯度稀释建立的浓度与稀释倍数之间的标准工作曲线的相关系数达0.99以上,说明仪器可以对EVs进行定量分析;荧光染色显示EVs呈CFSE及PKH26双阳性,占比约5.46%,与抗体标记的结果相近;电镜和纳米颗粒跟踪分析验证其粒径及群体分布与流式结果一致。结论联合散射光与脂膜荧光染料标记是一种经济、高效的EVs流式检测方案,有利于EVs流式分析的标准化。
- 郭春李艳伟王佳佳邢月婷黄莹莹宋兴辉叶小康
- 关键词：流式细胞术CFSEPKH26
- 高校仪器设备购置前管理措施探讨被引量：4
- 2022年
- 仪器设备是高校科学研究、技术开发及实验教学的主要保障。十四五时期,随着国家对仪器设备购置的不断投入,为了有效利用科研经费,避免重复购买闲置设备,进行周密细致的前期购置调研十分必要。我校医学院公共技术平台从仪器购置申请、用户需求调研、仪器技术指标调研等环节不断探索并总结经验,制定了特有的仪器购置前措施,充分保障了仪器购置工作的效益。
- 李艳伟方三华宋兴辉黄琼刘丽王佳佳
- 关键词：购置前利用率
