李云云
- 作品数：8 被引量：23H指数：3
- 供职机构：四川农业大学更多>>
- 发文基金：长江学者和创新团队发展计划国家自然科学基金四川省教育厅资助科研项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 猪乙型脑炎抗原表位的原核表达及以减毒沙门氏菌为载体的口服疫苗的免疫原性研究
- 乙型脑炎E蛋白是该病毒的主要的抗原蛋白，本实验将乙脑E蛋白主要抗原片段基因串联，包括E蛋白上两个重要抗原域73aa～88aa,292aa～402aa，并将其定向连接至原核表达载体pET-32a(+)，构建原核表达质粒pE...
- 李云云
- 文献传递
- 猪传染性胃肠炎病毒检测技术研究进展被引量：6
- 2008年
- 猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)是引起猪病毒性腹泻的一种重要病原微生物,给世界养猪业造成巨大经济损失。近年来,伴随着分子生物学技术的快速发展与应用,TGEV的检测技术取得了长足进展,积累了丰富的资料。本文扼要阐述TGEV检测技术研究概况。
- 韩国全郭万柱李云云李宇王小玉
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒疫苗
- 携带猪乙型脑炎DNA疫苗减毒沙门菌的构建及其免疫原性被引量：1
- 2011年
- 将乙型脑炎病毒E蛋白主要抗原片段基因串联,构建真核表达载体pCI-EAB。将重组质粒pCI-EAB转染Vero细胞,表达产物通过RT-PCR和间接免疫荧光试验可检测出目的基因的转录与表达。质粒pCI-EAB电转化入减毒猪霍乱沙门菌,观察重组菌的安全性、体内外的稳定性与免疫原性。动物试验表明,重组菌是相对安全和稳定的;重组菌S.C500/pCI-EAB体外培养时,D600值在0.8左右质粒是比较稳定的;以1×108CFU剂量的重组菌S.C500/pCI-EAB口服免疫小鼠,在二免后1周和三免后1周,重组菌抗体水平与S.C500/pCI-neo空载体组差异显著(P<0.01);脾脏淋巴细胞增殖情况显示,重组菌对ConA有显著的反应性,且与对照组差异明显,同时CD3+、CD4+和CD8+T细胞的数量也显著高于对照组(P<0.01)。上述结果初步表明,以减毒沙门菌为载体的猪乙型脑炎DNA疫苗具有良好的安全性、稳定性和免疫原性,为猪乙型脑炎口服活菌疫苗的研制奠定了基础。
- 李云云郭万柱徐志文韩国全林华漆信桥
- 关键词：减毒沙门菌免疫原性
- 猪传染性胸膜肺炎新型疫苗的研究进展被引量：8
- 2009年
- 猪传染性胸膜肺炎是由猪胸膜肺炎放线杆菌引起以急性出血性纤维素性胸膜炎和出血性肺炎为主要特征猪的呼吸道疾病,给世界养猪业造成了巨大的经济损失。近年来,伴随着分子生物学技术的快速发展与应用,猪传染性胸膜肺炎疫苗研究取得了长足进展,积累了丰富的资料。文章中扼要阐述猪传染性胸膜肺炎疫苗研究概况。
- 韩国全郭万柱王利娜李宇李云云王印王小玉
- 关键词：猪传染性胸膜肺炎弱毒疫苗口服疫苗亚单位疫苗灭活疫苗
- 共表达γ干扰素的乙型脑炎病毒与猪细小病毒核酸疫苗的构建及其免疫原性研究被引量：4
- 2010年
- 为了构建和筛选良好的猪乙型脑炎和猪细小病毒的核酸疫苗,并提高核酸疫苗的免疫效果,用重叠PCR法把PPV VP2和JEV E10连接,再将扩增的IFN-γ连入构建载体pcDNA.VEI使其共同表达。用脂质体将pcDNA.VEI介导入Vero细胞,通过间接免疫荧光法检测目的基因的体外表达。用pcDNA.VEI和不表达IFN-Κ的pcDNAZ.VE分别免疫Balb/c小鼠,同时设立PBS、猪细小病毒灭活疫苗、乙型脑炎弱毒疫苗和pcDNA3.1空白质粒免疫对照组。共免疫两次,间隔2周检测免疫指标。结果表明,通过鉴定核酸疫苗的构建达到了预期目标,并可在荧光显微镜下观察到了其转染的Vero细胞。该核酸疫苗能够诱导脾淋巴细胞增殖。ELISA结果显示,与pcDNA.VE和阴性对照组进行比较,pcDNA.VEI所诱导产生的两种抗体都较高。pcDNA.VEI组能较稳定的诱导产生T细胞亚群,并检测到CD4+/CD8+比例于首免2周后都高于pcDNA.VE。因此表明该核酸疫苗能产生特异诱导体液免疫和细胞免疫且是安全的,证明了IFNγ基因具有免疫增强效果,为乙脑和猪细小病毒核酸疫苗研究提供了实验依据。
- 叶茂郭万柱徐志文王小玉李云云
- 关键词：猪Γ干扰素乙型脑炎病毒猪细小病毒核酸疫苗免疫原性
- 猪IL-2对pcDNA-E39.VP2真核共表达质粒免疫原性的影响被引量：2
- 2011年
- 为了研究猪IL-2基因的真核质粒和融合基因形式对pcDNA-E39.VP2真核共表达质粒的免疫增强作用,分别将IL-2基因插入pcDNA3.1(+)和pcDNA-E39.VP2(已构建)中构建重组质粒pcDNA-IL2和pcDNA-IL2-E39.VP2。将真核质粒pcDNA-IL2-E39.VP2免疫小鼠,另外,将pcDNA-IL2分别先于和后于pcDNA-E39.VP2 3d免疫小鼠,同时设pcDNA-E39.VP2对照组。对免疫小鼠进行PPV(JEV)抗体水平、脾脏淋巴细胞增殖功能和外周血T淋巴细胞亚群变化的检测。结果显示,1周后,pcDNA-IL2-E39.VP2免疫组和pcDNA-IL2后于pcDNA-E39.VP注射的免疫组JEV/PPV抗体水平和脾脏淋巴细胞增殖活性显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)高于对照组,pcDNA-IL2先于pcDNA-E39.VP注射的免疫组仅在第5周显著(P<0.05)高于对照组;各组(除对照组外)CD8+值差异不显著(P>0.05),CD4+、CD4/CD8值都高于对照组,其中pcDNA-IL2-E39.VP2免疫组与对照组差异极显著(P<0.01)。结果表明,IL-2能增强pcDNA-E39.VP诱导小鼠的免疫能力,且以融合基因形式构建的真核质粒免疫增强效果最明显。
- 肖义蓉王印郭万柱徐志文朱玲杨泽晓王小玉李云云
- 关键词：免疫原性
- 流行性乙型脑炎病毒E蛋白抗原表位区与猪细小病毒VP2真核表达质粒的构建及免疫效果
- 2010年
- 筛选了3个位于流行性乙型脑炎病毒(JEV)E蛋白上不同位置的抗原表位区基因,利用重叠PCR方法分别与猪细小病毒(PPV)VP2基因相连。将目的基因定向插入真核表达载体pcDNA3.1(+),构建了重组质粒pcDNA3.1-EA-VP2、pcDNA3.1-EB-VP2、pcDNA3.1-EC-VP2。将重组质粒在无免疫佐剂参与的情况下免疫BALB/c小鼠,同时设空质粒接种组及PBS缓冲液接种组作为空白对照,采用ELISA法、淋巴细胞增殖试验和流式细胞仪技术分别对抗体水平、脾淋巴细胞转化功能和小鼠外周血中CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞数进行检测。结果显示,重组质粒pcDNA3.1-EA-VP2、pcDNA3.1-EB-VP2、pcDNA3.1-EC-VP2接种小鼠后,都能诱导小鼠产生JEV、PPV特异性抗体,并且促进脾淋巴细胞增殖。试验组与对照组比较差异极显著(P<0.01);试验组小鼠CD3+、CD4+T淋巴细胞数在首疫后第7天高于对照组(P<0.01),CD8+T淋巴细胞数在首免后第14天高于对照组(P<0.01)。pcDNA3.1-EB-VP2免疫组小鼠的体液免疫和细胞免疫应答水平均高于pcDNA3.1-EA-VP2和pcDNA3.1-EC-VP2免疫组。表明,用JEV E蛋白抗原表位区基因与PPV VP2基因构建的真核表达质粒能够诱导小鼠产生良好的细胞免疫和体液免疫应答。
- 李云云郭万柱林华漆信桥
- 关键词：流行性乙型脑炎病毒猪细小病毒抗原表位
- 猪乙型脑炎病毒EⅢ与猪细小病毒VP2基因的串联表达及免疫原性被引量：3
- 2011年
- 通过重叠PCR的方法将猪细小病毒(PPV)VP2基因和猪乙型脑炎病毒(JEV)EⅢ基因通过Linker连接,并克隆至真核表达载体pCI-neo,得到重组质粒pCI-VP2-EⅢ。将重组质粒pCI-VP2-EⅢ转染Vero细胞,其表达产物通过RT-PCR和间接免疫荧光试验的方法检测出目的基因的转录与表达。质粒pCI-VP2-EⅢ在无免疫佐剂参与的情况下,免疫6～8周龄的BALB/c小鼠,同时设空质粒接种组,猪细小病毒灭活苗和猪乙脑弱毒苗免疫组及磷酸盐缓冲液接种组作为参比对照。结果表明,pCI-VP2-EⅢ免疫组,在二免后1周产生JEV和PPV的特异性抗体,三免后达到高峰;对ConA有显著的反应性,且与对照组差异明显;通过流式细胞仪检测,CD3+T、CD4+T显著高于猪细小病毒灭活苗免疫组和对照组(P<0.05),略低于乙脑减毒苗免疫组,但CD8+T显著高于其他试验组(P<0.05),这表明pCI-VP2-EⅢ接种后可能主要是以CD8+T淋巴细胞介导的细胞免疫。
- 李云云郭万柱徐志文林华李宇漆信桥
- 关键词：细小病毒乙脑病毒VP2基因核酸疫苗
