- 卵巢癌细胞中乳源免疫调节肽受体蛋白的筛选被引量：1
- 2012年
- 目的乳源免疫调节肽(PGPIPN)在人卵巢癌细胞株(SKOV3)上进行受体蛋白的筛选。方法异硫氰酸荧光素(FITC)标记PGPIPN,作用于SKOV3观察其细胞定位;从SKOV3中提取作用部位的蛋白;通过NHS-activated亲和层析柱进行分离和纯化受体蛋白质,SDS-PAGE的初步鉴定。结果在激光扫描共聚焦显微镜下观察荧光标记肽结合于SKOV3的胞膜上。通过提取膜蛋白和亲和层析法成功筛选了受体膜蛋白。结论 PGPIPN的作用位点位于细胞膜上,其抗癌作用可能通过胞膜结合蛋白而启动信号转导通路,为进一步探讨其抗癌机制奠定基础。
- 何晓光郑欣任明强张文晓杨浩然魏彩顾芳秦宜德
- 关键词：免疫调节肽受体蛋白
- 乳铁蛋白抗菌-免疫调节融合肽的载体构建及在大肠杆菌中的表达和纯化被引量：3
- 2012年
- 目的构建乳铁蛋白抗菌-免疫调节融合肽(LIFP)表达载体,在E.coli BL21中诱导高表达并进行纯化。方法以乳铁蛋白抗菌肽(LfcinB)与乳源免疫调节肽(PGPIPN)的序列为参照,以连接臂(GGGGS)连接两种肽,设计LIFP基因,并在其5'端设计凝血酶FXa识别的酶切位点。将融合肽基因构建到表达载体pGEX-KG中,转化到E.coli BL21中,用IPTG低温诱导表达,通过AKTA层析系统纯化融合蛋白,Western blot进行鉴定。结果成功构建pGEX-KG-LIFP原核表达载体,并诱导其高表达。通过AKTA蛋白纯化系统,用亲和层析方法纯化,得到高纯度的融合蛋白。结论成功构建了LIFP表达载体,制备并纯化了LIFP,为进一步研究该肽功能和药物开发奠定基础。
- 张文晓秦宜德何晓光郑欣任明强
- 关键词：免疫调节肽融合蛋白纯化
- 免疫调节肽对T淋巴细胞转化和巨噬细胞分泌的影响被引量：8
- 2011年
- 目的研究乳源免疫调节肽(PGPIPN)对BALB/c鼠脾T淋巴细胞转化和骨髓巨噬细胞(BMMs)分泌的影响。方法通过MTT法检测不同浓度PGPIPN对小鼠脾T淋巴细胞的转化作用,通过ELISA法检测在PGPIPN刺激下小鼠BMMs活化所释放的肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素6(IL-6)的含量。结果 PGPIPN在体外与刀豆蛋白A(Co-nA)合用可明显促进ConA的丝裂原作用;体内实验表明各种剂量PGPIPN饲养的小鼠,其脾淋巴细胞在适当剂量的ConA的诱导下均具有明显的T淋巴细胞转化的能力;PG-PIPN单独作用于BMMs不能刺激TNF-α和IL-6的释放,但与脂多糖(LPS)合用时则可以明显增加细胞因子的释放。结论 PGPIPN具有促进T淋巴细胞转化的作用,与LPS合用可促进BMMs的细胞因子释放的水平,提示PGPIPN可增加T淋巴细胞和巨噬细胞的免疫功能。
- 王巍何晓光郑欣顾芳秦宜德
- 关键词：脾T淋巴细胞骨髓巨噬细胞细胞因子
- 乳源免疫调节肽体外抑制人卵巢癌细胞侵袭和转移被引量：10
- 2013年
- 目的探讨乳源免疫调节肽(PGPIPN)对人卵巢癌细胞株(SKOV3)侵袭和转移的影响。方法 Transwell小室测定其侵袭力和迁移力,细胞划痕实验测定细胞运动能力,细胞克隆形成实验观察SKOV3的克隆形成能力,用MTT法比较PGPIPN对SKOV3、人正常肝细胞株LO2和小鼠永生化成纤维细胞株(MEFS)的生长抑制情况,检测PGPIPN的细胞毒性。结果 Transwell试验中,与空白对照组相比,浓度为1 mg.L-1和10 mg.L-1的PGPIPN明显抑制了SKOV3的侵袭和转移(P<0.01),抑制率分别为20.20%和23.78%;划痕实验显示对细胞的运动能力得到了明显的抑制;平板法的克隆形成实验结果较明显,与空白对照组相比,1 mg.L-1和10 mg.L-1的PGPIPN抑制率分别为32.50%和38.11%;PGPIPN抑制SKOV3细胞生长,对正常细胞无明显影响。结论乳源免疫调节肽能够抑制人卵巢癌细胞的侵袭和转移。
- 魏彩秦宜德郑欣何晓光张文晓杨浩然
- 关键词：顺铂卵巢癌细胞
- 免疫调节肽对卵巢癌skov3细胞凋亡及相关基因表达的影响被引量：6
- 2012年
- 目的研究免疫调节肽(PGPIPN)对人卵巢癌细胞株skov3凋亡及相关基因表达的影响。方法体外培养卵巢癌skov3细胞,分别使用10-6、10-5、10-4、10-3、10-2g/L的PGPIPN孵育skov3细胞48 h,观察量效关系;通过cDNA芯片技术筛选凋亡相关基因;实时荧光定量PCR法检测Bax、Bcl-xl、Caspase-3 mRNA水平的表达量;Western blot法检测Bax、Bcl-xl、Caspase-3蛋白表达量。结果与对照组相比,Bax和Caspase-3的表达随着PGPIPN浓度升高而升高(P<0.05);Bcl-xl的表达随着PGPIPN浓度升高而降低(P<0.05)。结论 PGPIPN通过促进细胞中Bax及抑制Bcl-xl的表达来调控skov3细胞的凋亡,该过程可能和Caspase的活化相关。
- 郑欣何晓光张文晓杨浩然魏彩顾芳任明强秦宜德
- 关键词：免疫调节肽CDNA芯片BAXBCL-XL
- 乳源免疫调节肽对卵巢癌SKOV3细胞凋亡及相关基因表达的影响
- 目的研究乳源免疫调节肽（PGPIPN）对人卵巢癌细胞株SKOV3凋亡及其相关基因表达的影响。
方法体外培养卵巢癌SKOV3细胞，分别使用浓度10~/(-6/)、10~/(-4/)、10~/(-2/)g//L的PG...
- 郑欣
- 关键词：免疫调节肽CDNA芯片BAXBCL-XL
- 文献传递
- 牛乳铁蛋白肽基因LfcinB的慢病毒载体的构建及鉴定被引量：4
- 2011年
- 目的构建并鉴定牛乳铁蛋白肽基因LfcinB基因的慢病毒载体,为LfcinB应用于基因治疗奠定了基础,以便进一步研究LfcinB的功能。方法根据GenBank报道的Lf-cinB基因序列,合成LfcinB基因,PCR方法扩增LfcinB基因,与经EcoR 1和Nhe 1酶切后的pljm1载体[含CMV启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]连接、转化,产生pljm1-LfcinB慢病毒表达载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用pljm1-Lf-cinB载体、△8.91载体、pvsvg载体三质粒共转染包装细胞293T细胞,包装产生重组慢病毒,以293T细胞中绿色荧光蛋白GFP的表达水平测定病毒滴度。Western blot检测Lf-cinB的表达。结果 PCR和测序证实成功构建了pljm1-Lf-cinB慢病毒载体。浓缩病毒悬液滴度为2×108 TU/ML。Western blot检测到目的肽成功表达。结论成功构建含LfcinB的慢病毒载体,为进一步感染细胞和基因治疗奠定了基础。
- 张晓宇秦宜德张文晓郑欣何晓光王巍
- 关键词：乳铁蛋白细胞凋亡
