刘雪梅
- 作品数：2 被引量：10H指数：2
- 供职机构：辽宁大学生命科学院更多>>
- 发文基金：沈阳市科技计划项目辽宁省科学技术计划项目辽宁省教育厅高等学校科学研究项目更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- PTD-Apoptin原核表达载体构建及可溶性表达被引量：2
- 2013年
- 目的:可溶性表达PTD-Apoptin融合蛋白。方法:亚克隆Apoptin基因并人工合成PTD序列,构建原核表达载体pGEX-6p-1-PTD-Apoptin,使载体在E.coli BL21(DE3)中表达并优化。GST亲和纯化天然状态的融合蛋白,并通过MTT实验验证活性。结果:最佳表达条件是25℃、0.1mmol/mL IPTG过夜诱导表达,经GST亲和纯化得到天然状态的单一组分融合蛋白,与胃癌823细胞共孵育后细胞存活率为10.86%,与对照组相比具显著差异。结论:成功获得高生物活性的原核可溶性表达融合蛋白PTD-Apoptin,使胃癌823细胞存活率降至10.86%。
- 贲松彬潘子瑶刘雪梅崔剑谷海峰李其久陈长兰
- 关键词：APOPTIN可溶性表达BL21(DE3)MTT
- TAT-Apoptin融合蛋白分泌表达载体的构建及其活性检测被引量：9
- 2013年
- 目的构建具有自主跨膜能力的Apoptin融合蛋白表达载体,使其分泌表达,避开包涵体复性,简化制备工艺。方法人工合成反式激活蛋白(TAT)序列,与Apoptin序列融合,连接到pET22b+载体上,构建原核分泌表达载体pET22b+-TAT-Apoptin,IPTG诱导目的蛋白分泌表达到大肠杆菌周质空间,提取蛋白行SDS-PAGE分析,MTT法检测分泌表达的融合蛋白对胃癌823细胞的抑制作用。结果重组TAT-Apoptin蛋白可分泌至大肠杆菌周质空间中,以可溶状态存在,对胃癌823细胞的最大抑制率为83.95%。结论成功构建重组TAT-Apoptin蛋白表达载体,分泌表达的可溶性融合蛋白具有生物活性。
- 刘雪梅崔剑侯伟健李其久贲松彬
- 关键词：凋亡素分泌表达凋亡
