田小东
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
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- 弓形虫SAG1、MIC3单基因及SAG1-MIC3融合基因真核表达载体的构建与鉴定
- 刚地弓形虫/(Toxoplasma gondii/)是一种专性细胞内寄生的机会致病性虫,呈世界性分布,可引起人兽共患弓形虫病,由法国学者Nicolle及Manceaux于1908年发现。虫体呈弓形,故命名为弓形虫。其发育...
- 田小东
- 关键词：刚地弓形虫疫苗
- 文献传递
- 弓形虫SAG1-MIC3融合基因真核表达载体的构建与鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的构建编码弓形虫RH株膜表面蛋白1(SAG1)和微线体蛋白3(MIC3)的重组真核表达载体pcDNA3.1-SAG1-MIC3并鉴定,为弓形虫疫苗研制作准备。方法采用PCR技术从弓形虫基因组DNA中分别扩增SAG1和MIC3基因片段,分别克隆入pMD18-T载体,并对重组入外源基因的质粒通过PCR、酶切和测序鉴定;采用亚克隆技术将SAG1和MIC3基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1(-),经含氨苄青霉素的LB平板筛选阳性重组质粒pcDNA3.1-SAG1-MIC3,PCR、酶切和测序鉴定;采用脂质体法将重组载体转染Hela细胞,经RT-PCR法检测转染细胞转录情况。结果MIC3和SAG1基因的TA-cloning经PCR和酶切鉴定,大小分别为933bp和789bp,与预期值一致;pcNDA3.1-SAG1-MIC3经酶切鉴定,目的片段约为1722bp,与SAG1-MIC3长度相当;测定重组载体的核苷酸序列,与GenBank中的相应序列100%同源;PCR验证载体携带的SAG1-MIC3融合基因在Hela细胞中转录生成mRNA。结论成功构建重组真核表达载体pcDNA3.1-SAG1-MIC3,为弓形虫核酸疫苗的研制奠定了基础。
- 田小东古钦民周怀瑜张加勤丛华赵群力李瑛
- 关键词：刚地弓形虫SAG1疫苗
