陈莉
- 作品数：3 被引量：6H指数：1
- 供职机构：哈尔滨医科大学药学院生物制药学教研室更多>>
- 发文基金：哈尔滨市科技创新人才研究专项资金项目哈尔滨市科技创新人才研究专项资金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 波形蛋白基因的构建、表达及鉴定被引量：1
- 2012年
- 文章进行波形蛋白(VIM)基因重组质粒的构建,并进行表达与鉴定,为开辟新的肝癌诊断方法奠定基础。从人宫颈癌细胞(HELA)中提取总RNA并采用PR-PCR及PCR技术克隆VIM基因,经酶切连接等构建带有GST标签的PGEX-4T-1-VIM重组表达质粒,在大肠杆菌DH5α菌中扩增重组质粒,并在BL21菌中进行诱导表达,通过SDS-PAGE及Western blotting等进行鉴定。重组及表达蛋白Vimentin的融合蛋白,为建立一种新的肝癌早期诊断方法奠定基础。
- 戴丽娟李新禹陈莉唐晓波
- 关键词：肝癌克隆
- 抗VEGFR2/抗CD3双特异单链抗体的表达及初步活性检测被引量：5
- 2011年
- 目的:构建和表达抗血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)/抗CD3双特异单链抗体(bscVEGFR2×CD3),及亲和活性测定。方法:设计抗VEGFR2/抗CD3双特异单链抗体基因序列,由公司合成并亚克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,脂质体法转染中国仓鼠卵巢细胞(CHO),筛选高效分泌表达bscVEGFR2×CD3的克隆株。表达产物经Ni-NTA柱纯化,120 g/L SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定。应用流式细胞术(FCM)检测生物学活性。结果:bscVEGFR2×CD3重组表达载体测序证实序列正确。bscVEGFR2×CD3能够在CHO细胞中进行分泌表达,筛选出6株高表达克隆株。120 g/L SDS-PAGE显示相对分子质量(Mr)约56 000有1条带,与预期相符,Western blot证明anti-His抗体能与这条蛋白条带发生特异性结合。FCM检测bscVEGFR2×CD3能与CD3+jurkat细胞和VEGFR2+A375细胞特异性结合。结论:成功构建和表达抗VEGFR2/抗CD3双特异单链抗体,该抗体具有与VEGFR2、CD3特异性结合的免疫学活性。
- 戴丽娟鄢成伟李淑珍陈莉李新禹单瑞辉于学薇唐晓波
- 关键词：CD3VEGFR2
- 高尔基体糖蛋白GP73基因的构建、表达及鉴定
- 2011年
- 目的重组及表达人高尔基体糖蛋白73(GP73)的融合蛋白,为建立一种新的肝癌诊断方法奠定基础。方法提取转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞(293细胞)中的总RNA,应用RT-PCR、PCR等技术扩增出GP73基因,将其分别与带有HIS标签的PET-32a及GST标签的PGEX-4T-1载体连接,转化入DH5α菌中进行克隆并测序鉴定。进一步构建表达体系,用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,最终在BL21菌中表达GP73融合蛋白(分别含有HIS,GST-Tag),并进行SDS-PAGE及Western blot鉴定。结果 293细胞株提取的RNA经RT-PCR、PCR扩增后得到一条255 bp的DNA片段,经测序鉴定为GP73基因序列;并在大肠杆菌中实现了可溶性高表达,Western blot鉴定为GP73融合蛋白。结论采用原核表达方法可获得高纯度的GP73融合蛋白,为进一步开发GP73诊断试剂打下基础,为肝癌的诊断开辟新途径。
- 李新禹李淑珍陈莉单瑞辉唐晓波
- 关键词：肝癌克隆
