董峰
- 作品数：6 被引量：22H指数：3
- 供职机构：天津科技大学食品工程与生物技术学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学更多>>
- 生鲜奶中体细胞计数方法的改进
- 牛奶体细胞数是牛奶品质和奶牛健康状况的一个重要指标,在多种体细胞的检测方法中,直接镜检法仍然是一种简单易行、准确率高的检测方法。但在实际操作中,该方法仍然存在样品背景颜色深、细胞不易辨认、计数时间长、样品不易保存等缺点。...
- 杜欣军郭睿莉董峰梁晶王硕
- 关键词：牛奶体细胞计数显微镜
- 文献传递
- 草甘膦抗性基因的重组表达及ELISA检测方法的初步建立被引量：1
- 2010年
- 采用CTAB方法从转基因大豆中提取DNA,根据草甘膦抗性基因设计引物,利用PCR从大豆DNA中扩增获得特异性目的基因,将该基因片段连接至表达载体pET-30a(+)中,并转化感受态细胞BL21(DE3)进行诱导表达,对诱导剂浓度和诱导时间进行优化。利用纯化后的液体重组蛋白和SDS-PAGE切胶蛋白2种形式抗原免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,并利用ELISA对抗体效价进行测定。研究结果表明,利用PCR从转基因大豆DNA中扩增出长度为1529bp的草甘膦抗性基因片段,经过重组表达获得分子量为55ku的重组蛋白,IPTG的最佳诱导浓度为0.1mmol/L,最佳诱导时间为4h,亲和纯化后其浓度为5.0mg/mL;经免疫,2种形式抗原获得的多抗效价分别达到1∶2400000和1∶800000。
- 王硕董峰杜欣军张伟伟吴懿娜
- 关键词：草甘膦多克隆抗体
- 西维因单链抗体基因克隆、表达及活性分析被引量：2
- 2010年
- 利用兼并引物从西维因单克隆杂交瘤细胞的cDNA中克隆得到抗体基因的轻链可变区(VL)和重链可变区(VH),长度分别为324bp和360bp,将其分别连接入pGEM-T-Easy载体进行测序;根据测序结果设计特异性引物和连接序列(Gly4Ser)3,利用重叠延伸PCR扩增得到长度为729bp的单链抗体基因片段(scFv),亚克隆至原核表达载体pET30a(+),并转化感受态细胞BL21(DE3)进行诱导表达;聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示,重组表达单链抗体形成包涵体,分子量大小约为33kDa,变性后利用不同条件进行复性,结果显示最佳复性时间为48h,最佳起始蛋白浓度为200μg/mL,含有精氨酸的复性液效果最佳;利用亲和层析纯化scFv,并利用竞争ELISA检测其活性,结果显示该scFv对西维因具有良好的亲和性和特异性。
- 王俊平张伟伟杜欣军吴懿娜董峰王硕
- 关键词：西维因单链抗体克隆活性
- 噬菌体抗体库技术及其应用被引量：8
- 2010年
- 吴懿娜杜欣军张伟伟董峰王硕
- 关键词：噬菌体展示抗体库小分子物质
- 牛奶中大肠杆菌和无乳链球菌的快速检测被引量：4
- 2009年
- 大肠杆菌和无乳链球菌是两种导致奶牛乳房炎的重要致病菌,这两种致病菌的检测有助于及时诊断和治疗奶牛乳房炎,从而有效控制牛奶质量。利用16S-23S rDNA间区作为检测靶点,建立牛奶中大肠杆菌和无乳链球菌的快速PCR检测方法,并对该检测方法的灵敏度和特异性进行了确认。结果显示,该方法对于牛奶中大肠杆菌和无乳链球菌的检出限均能够达到1cfu/mL,并且与其它7种对照菌株均无交叉反应,整个检测过程可在20h内完成。
- 杜欣军周文杰吴懿娜董峰穆蕊王硕
- 关键词：乳房炎大肠杆菌无乳链球菌PCR
- 酶法制备多肽铁及产物分析被引量：7
- 2010年
- 本文利用胰蛋白酶对猪血血红蛋白进行酶解,综合考虑酶添加量和酶解时间,选取酶添加量为1%,V(血红细胞):V(蒸馏水)=1:4,pH=8,温度为50℃,酶解5h血红蛋白可完全酶解。对酶解产物分级沉淀,收集沉淀产物,采用紫外光谱、葡聚糖凝胶层析、液相色谱法对酶解产物进行分析,证明沉淀产物的主要成分为多肽铁。
- 刘安军王丹王丽霞赵莹董峰
- 关键词：血红蛋白酶解产物
