吕赛群
- 作品数：11 被引量：11H指数：2
- 供职机构：第二军医大学东方肝胆外科医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金“重大新药创制”科技重大专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 腺病毒介导的双荧光素酶报告系统的构建及其应用被引量：1
- 2015年
- 目的:构建腺病毒介导的双荧光素酶报告系统,并利用其筛选一种广谱高活性启动子。方法:将待检测启动子控制的萤火虫荧光素酶(Fluc)基因表达框插入腺病毒E1区,CMV启动子控制的海肾荧光素酶(Rluc)基因表达框插入E3区作为内参,构建腺病毒介导的双荧光素酶报告系统。检测不同病毒感染量条件下测得的启动子活性数据差异、组内差异,难转染细胞内的转染情况,分析该系统的操作简便性、稳定可靠性。应用该系统检测常用启动子CAG、CASI及新启动子CCAU在一系列细胞内的活性,从中筛选出一种广谱高活性启动子。结果:成功构建了腺病毒介导的双荧光素酶报告系统;不同MOI值下测得的各启动子相对活性值无显著差异(P>0.05);在所实验的细胞内均能有效且准确地测定各启动子的活性,且复孔间方差小;CCAU在所实验的9株细胞中的表达活性显著(P<0.05)或极显著地(P<0.01)高于CASI以及CAG的表达活性。结论:构建获得的腺病毒介导双荧光素酶报告系统操作简便、稳定可靠、通用性强,可作为启动子活性筛选的一种新方法;利用该系统筛选获得了一种新的广谱高活性启动子CCAU。
- 李振海吴红平徐增辉吕赛群施军霞刘品一李林芳金华君吴孟超钱其军
- 关键词：腺病毒启动子
- 基于microRNA调控靶向肿瘤细胞的溶瘤腺病毒的研究
- 本论文将肿瘤特异性表达缺失或下调的microRNA引入作为溶瘤腺病毒新的调控靶点,对该溶瘤腺病毒治疗系统的靶向性和安全性进行了探索性的研究。
背景:microRNA是近年来的一个研究热点,可与其靶基因3'UTR中的...
- 吕赛群
- 关键词：MICRORNA溶瘤腺病毒肿瘤治疗肿瘤细胞
- 一种基于微小RNA调控可在肿瘤细胞内特异性增殖的重组腺病毒载体、其构建方法及其用途
- 本发明提供了一种基于微小RNA调控可在肿瘤细胞内特异性增殖的重组腺病毒载体、其构建方法及其用途。其特征在于：在该腺病毒至少一个增殖必需基因的3’非翻译区中至少插入一个微小RNA靶位点核苷酸序列：所述微小RNA在肿瘤细胞中...
- 钱其军金华君李琳芳吕赛群吴孟超
- 文献传递
- 腺病毒介导的T细胞高效基因表达系统的构建
- 2015年
- 结合转基因修饰的手段,能有效提高细胞免疫治疗的疗效,但由于缺乏T细胞高活性表达系统,限制了该方法的应用。构建腺病毒介导的双荧光素酶启动子活性筛选系统,检测一系列常用强启动子(CMV、CMV(in)、CAG、EF1α及CASI)在T细胞株K562及Jurkat中的活性,发现EF1α启动子活性在T细胞株中的活性最高。在EF1α的基础上,增加mCMV增强子和hCMV增强子顺式作用元件,构成了2个新型嵌合型启动子CCEF及CCEF(in)。双荧光素酶检测系统检测结果表明,新构建的2个启动子在T细胞中的活性高于EF1α,且两者相比CCEF启动子活性更高(p<0.05)。利用CCEF启动子控制PD-1全长抗体基因,并将此表达框插入腺病毒基因组,构建重组腺病毒Ad-CCEF-anti-PD-1。通过Western blotting及ELISA方法检测病毒感染T细胞株后,抗体基因的表达效率。结果表明,Ad-CCEF-anti-PD-1感染T细胞后,PD-1抗体能在T细胞中正确表达,且表达量较高(K562中11.019μg/mL,Jurkat中9.078μg/mL),表明该腺病毒介导的T细胞高效的基因表达系统成功构建,具有良好的应用前景。
- 刘品一吕赛群崔磊李振海黎江李林芳吴红平金华君钱其军
- 关键词：腺病毒启动子PD-1
- 一种携带外源基因在包装细胞中高效生产的重组病毒载体、其构建方法及其用途
- 本发明提供一种携带外源基因在包装细胞中高效生产的重组病毒载体、其构建方法及其用途。其特征在于：在该病毒可操作地连接的外源基因的3’非翻译区中插入有至少一个下述微小RNA的靶位点核苷酸序列：所述微小RNA在病毒包装细胞中高...
- 钱其军金华君李琳芳吕赛群吴孟超
- 文献传递
- 腺病毒介导microRNA-99a过表达抑制肝癌细胞生长被引量：5
- 2012年
- 目的:利用腺病毒介导microrRNA-99a(miR-99a)的过表达,观察miR-99a对肝癌细胞生长的抑制作用,探讨一种腺病毒介导miRNA治疗肿瘤的新方法。方法:qRT-PCR检测正常肝细胞系L-02和肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721、Hep3B和Huh7细胞中miR-99a的表达,构建含miR-99a的重组5型腺病毒Ad5-miR-99a。用空载腺病毒Ad-blank和Ad5-miR-99a分别感染Huh7细胞,MTT法和集落形成实验检测miR-99a过表达对Huh7细胞生长的抑制作用。结果:与正常肝细胞L02和其他肝癌细胞相比,miR-99a在肝癌Huh7细胞中表达量相对最低(P<0.01)。成功构建重组腺病毒Ad5-miR-99a,Ad5-miR-99a感染Huh7细胞后,miR-99a可在Huh7细胞中稳定高表达。集落形成实验和MTT实验显示,相对于Ad-blank组,Ad5-miR-99a可显著抑制Huh7细胞的生长和集落形成(P<0.01)。结论:成功构建重组腺病毒Ad5-miR-99a,miR-99a能有效抑制肝癌细胞的增殖,Ad5-miR-99a有可能成为治疗肝癌的新药物。
- 张敬磊金华君刘辉吕赛群杨远傅思源钱其军周伟平
- 关键词：肝细胞癌靶向基因治疗
- 表达SIRPα-Fc的基因-溶瘤腺病毒对胆管癌治疗作用的实验研究
- 2015年
- 目的:研究表达SIRPα-Fc融合基因的基因-溶瘤腺病毒SG655-SF对胆管癌的治疗作用。方法:将信号调节蛋白α(signal regulatory proteinα,SIRPα)突变体CV1与人Ig G1 Fc段融合(简称SF),构建SF编码序列(基因)。将SF基因插入条件增殖型腺病毒载体SG655,构建基因-溶瘤腺病毒SG655-SF。重组病毒经鉴定正确后,经扩增、滴度测定,感染293细胞。Western blot检测外源基因的表达情况。间接免疫荧光检测293细胞表达的SF蛋白对胆管癌细胞的结合能力。噻唑蓝(MTT)法测定病毒对胆管癌细胞的杀伤作用。建立人类胆管细胞癌裸鼠移植瘤模型,用SG655-SF治疗,观察疗效。取肿瘤组织进行切片检查,验证其抗肿瘤作用。结果:成功构建SF表达框、基因-溶瘤腺病毒SG655-SF。SG655-SF感染293细胞后,能高效表达SF蛋白。293细胞表达的SF蛋白能有效结合CD47高量表达的胆管癌细胞株EH-CA1-T、EHCA1-Y。SG655-SF能有效杀伤胆管癌细胞。SG655-SF可以有效抑制肿瘤在裸鼠体内生长。肿瘤组织切片检查提示有肿瘤坏死和病毒浸润。结论:基因-溶瘤腺病毒SG655-SF具有良好的抗胆管癌活性。
- 巩睿智吕赛群马宜冬左明辉叶真龙朱海莉吴红平施军霞李林芳金华君钱其军
- 关键词：胆管癌溶瘤腺病毒CD47
- 正向和反向SV40 poly(A)信号序列对上游基因表达的影响
- 2010年
- 目的研究正向和反向SV40poly(A)信号在3种常用细胞株中对上游基因表达的调控作用,为基因表达研究中载体poly(A)信号的选择提供依据。方法将F-Luc与R-Luc两种荧光素酶基因插入同一质粒,构建带有双荧光素酶报告基因的载体Dual-Luc。在F-Luc基因后分别插入正向和反向互补的SV40poly(A)信号序列,得到2个带有不同SV40poly(A)信号的载体Dual-Luc2、Dual-Luc3。将其分别转染常用的3类细胞株293、L-02和HeLa细胞,应用双荧光素酶标仪和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定报告基因(F-Luc)的表达量,以R-Luc基因的表达量作对照。结果成功构建携带正向和反向互补SV40poly(A)序列的双荧光素酶载体Dual-Luc2、Dual-Luc3;双荧光素酶标仪检测表明,在293细胞中,Dual-Luc2、Dual-Luc3的F-Luc/R-Luc比值分别为3.25±0.43、3.03±0.14,差异无统计学意义(P>0.05);在L-02细胞中,Dual-Luc2、Dual-Luc3的F-Luc/R-Luc比值分别为6.16±0.39、3.83±0.39,差异有统计学意义(P<0.05);在HeLa细胞中,Dual-Luc2、Dual-Luc3的F-Luc/R-Luc比值分别为1.21±0.10、0.66±0.02,差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR检测与荧光素酶检测结果一致。结论不同细胞中poly(A)信号序列对上游基因的调控作用存在差异;poly(A)信号对上游基因的调控作用主要发生于转录水平。
- 侯兵金华君刘文超钱其军吕赛群
- 关键词：基因表达
- 一种携带外源基因在包装细胞中高效生产的重组病毒载体、其构建方法及其用途
- 本发明提供一种携带外源基因在包装细胞中高效生产的重组病毒载体、其构建方法及其用途。其特征在于：在该病毒可操作地连接的外源基因的3’非翻译区中插入有至少一个下述微小RNA的靶位点核苷酸序列：所述微小RNA在病毒包装细胞中高...
- 钱其军金华君李琳芳吕赛群吴孟超
- miR-29b对肝癌细胞中甲基化转移酶表达的调控作用被引量：4
- 2011年
- DNA甲基化异常在肿瘤发生中起着极为重要的作用,而基因组DNA的甲基化主要通过DNA甲基化转移酶(DNA methyhransferases,DNMTs)来完成。microRNA和甲基化转移酶的表达具有一定的联系。构建携带有miR-29b的腺病毒载体并包装病毒,鉴定正确后,将病毒感染肝癌细胞PLC,用qRT-PCR的方法检测miR-29b在PLC细胞中对甲基化转移酶表达的调控作用。结果表明,成功构建携带有miR-29b的腺病毒,qRT-PCR方法检测表明miR-29b能有效地调控甲基化转移酶的表达。
- 吕赛群金华君钱其军
- 关键词：DNMT3B
